一种高特异性且高灵敏性的利用CRISPR-Cas12a的激活和反式切割特性的三错配检测方法

本文介绍了一种基于CRISPR-Cas12a系统的高特异性且高灵敏性的三错配检测方法（TMD）。该方法通过设计特定的crRNA和报告基因，利用Cas12a的激活和反式切割特性，能够有效区分野生型（WT）和突变型（MT）DNA。实验结果表明，TMD方法在区分WT和MT时具有较高的DF值（最高可达7.5），并能检测到低至0.0001%的突变丰度。在15例临床样本测试中，TMD与NGS测序结果高度一致，验证了其准确性。该方法不仅在癌症早期检测中具有重要应用，还在疾病监测和治疗评估等领域展现出良好的前景。