利用球形PAM天线增强CRISPR-Cas12a的潜力：向通用无扩增核酸检测平台的范式转变

本文介绍了一种新型的球形PAM天线增强CRISPR-Cas12a系统，旨在开发一种无需预扩增步骤的高灵敏度核酸检测平台。传统的CRISPR-DX技术虽然高效，但依赖于复杂的预扩增步骤，导致实验流程复杂和交叉污染问题。作者通过设计包含与靶标单链DNA部分互补的发卡DNA和富集PAM序列的双链DNA天线，创建了一个局部富集PAM的微环境，使得Cas12a蛋白能更快识别靶标并激活反式切割活性，从而释放荧光信号。该系统不仅能够检测常规DNA靶标，还能检测miRNA，并且通过智能手机辅助的荧光读取器实现了即时检测。实验结果显示，该系统对结核分支杆菌的检测限为2.2 fM，灵敏度比传统方法提高了2-3个数量级，且与传统PCR方法的结果高度一致。该研究为快速、灵敏和通用的核酸检测平台提供了新的设计思路，推动了分子诊断技术的发展。