文献分享|Nucleic Acids Res.：免PAM发夹底物靶向激活Cas12a反式切割活性

本研究报道了一种新型CRISPR-Cas12a激活剂——发夹结构的DNA底物，其通过末端环状构象直接激活Cas12a的反式切割活性，且完全独立于PAM序列。研究发现，该激活过程利用环结构的空间效应替代传统PAM的构象诱导功能，实现了dsDNA的固有PAM非依赖性激活。基于此发现，作者成功构建了发夹到dsDNA的变构检测平台，实现了对活性氧分子次氯酸（HOCl）及金属离子Ca2+的高灵敏度、高特异性检测。这一发现突破了传统dsDNA必须依赖PAM的固有限制，为Cas12a系统的应用提供了新的可能性。