Nucleic Acids Res. ¦通过伪杂交DNA-RNA底物设计增强CRISPR/Cas12a检测RNA的能力

本文探讨了CRISPR/Cas12a系统在RNA检测方面的技术瓶颈，包括灵敏度偏低、难以识别短RNA片段和复杂结构RNA，以及依赖繁琐的预处理步骤。为解决这些问题，作者提出了一种创新的伪杂交DNA-RNA（PHD）技术，通过设计含有PAM序列的双链DNA激活剂，与靶标RNA形成DNA-RNA杂合体，从而激活Cas12a的反式切割活性。该技术构建的双模式检测系统不仅能在20分钟内完成高灵敏度的RNA直接检测，还能突破DNA检测的PAM序列依赖限制。实验结果表明，双链DNA激活剂的切割效率最强，ASCas12a对超短RNA和复杂结构RNA的识别效果最好，检测灵敏度可达33.8 fM。临床样本检测结果与qPCR一致，证明了PHD技术的实用性和优越性。