Anal. Chem. |通过C端标记策略增强蛋白质从头测序

本文介绍了一种通过C端标记策略增强蛋白质从头测序的方法，旨在解决同质异构体歧义问题。蛋白质从头测序技术在不依赖数据库的情况下，直接从质谱数据中确定蛋白质序列，广泛应用于抗体测序、非核糖体肽的序列分析等领域。然而，该技术在实际操作中面临的主要挑战是如何准确区分质量相同但化学结构不同的氨基酸，如亮氨酸和异亮氨酸。研究团队通过电子转移/高能碰撞解离（EThcD）技术，结合C端标记策略，成功区分了这些同质异构体。实验表明，C端标记不仅增强了肽的电荷状态，还促进了可电离C端片段的产生，从而提高了序列覆盖率和测序准确性。研究还展示了该方法在不同蛋白酶消化和抗体测序中的应用，证明了其有效性和广泛适用性。