浙江大学，Nature Chemistry！

背景：遗传密码扩展（GCE）策略通过引入空白密码子实现非经典氨基酸（ncAAs）的位点特异性掺入，但在哺乳动物细胞中，多重ncAA掺入面临效率低下的挑战。研究目的：本研究系统评估人类基因组中稀有密码子的重编码潜力，旨在开发一种高效的多重ncAA掺入方法。结论：研究鉴定出八个稀有密码子可用于高效ncAA掺入，其中四个（TCG、ACG、CGA、TCA）实现接近野生型蛋白表达水平；通过工程化正交aaRS/tRNA对，成功在单个蛋白质中实现两种、三种乃至五种不同ncAAs的同时掺入，效率高达90%以上，并应用于双正交标记和顺序蛋白质激活等功能演示，为合成生物学和蛋白质工程提供了新工具。