Nat. Commun. \u00A6用于CRISPR-Cas12a一锅法检测的耐热非经典PAM的识别

背景：CRISPR-Cas12a系统在核酸检测中高度依赖经典PAM序列（TTTV），且传统一锅法中扩增与切割反应相互干扰，限制了靶标选择范围和检测灵敏度。研究目的：开发一种能兼容多样化PAM并实现高效一锅法核酸检测的平台。结论：作者开发的变温一锅法CRISPR平台（POP-CRISPR）通过“37°C扩增、45°C检测”策略，在高温下激活了82种非经典PAM，显著扩展了靶点范围；该平台结合了高效扩增与高温增强的反式切割活性，实现了极高灵敏度（1 aM）和单碱基分辨率，并在20分钟内完成检测，在便携式现场诊断中展现出强大应用潜力。