Nucleic Acids Res. |通过拆分激活剂并延伸激活剂末端，实现对CRISPR/Cas12a反式切割动力学的调控

背景：CRISPR/Cas12a的反式切割活性强大，但激活过程迅速且不受控，易导致背景信号泄漏。在超微量检测中，引入熵驱动DNA电路（EDC）进行信号放大，却加剧了动力学失配，易产生假阳性。现有调控手段设计复杂、成本高且缺乏精度。研究目的：开发一种低成本、可编程且能实现精确动力学匹配的策略，以调控CRISPR/Cas12a的反式切割活性，抑制背景信号。结论：作者提出了一种基于空间位阻的调节策略，通过拆分激活剂并在末端引入延伸序列产生位阻，将Cas12a锁定在失活状态，有效过滤EDC电路的自发泄漏，解决了动力学不匹配问题。该策略无需蛋白改造，仅通过调整核酸延伸段即可精准调控反应动力学，检出限达1.24 pM，具备识别单碱基错配的能力，且高度模块化，可灵活嵌入各类核酸扩增体系或DNA逻辑电路中，有望推动超灵敏、零背景的分子诊断技术的发展。