精缮生物吴小阳改造piggyBac转座酶进行位点特异性整合

背景：PiggyBac转座子是一种在基因组功能研究和基因转移中具有应用前景的移动遗传元件，但其天然转座酶PBase介导的整合具有TTAA位点依赖性，导致随机整合。研究目的：通过蛋白质工程改造PBase，降低其TTAA依赖性整合活性，并与Cas9融合，结合转座系统的大片段整合能力和CRISPR-Cas系统的精准靶向优势，实现DNA大片段的位点特异性高效整合。结论：研究成功筛选出高切除活性、低TTAA依赖性的PBase突变体，并与Cas9融合构建了Cas9-PBase系统；通过进一步优化（如关键残基替换、引入sgRNA识别序列），显著提升了整合效率和靶向准确性；在HEK293T细胞和人诱导多能干细胞（hiPSCs）中验证了该系统可实现高效、精准的大片段整合，且无随机整合事件，为遗传性疾病治疗和生物制药提供了新工具。