BB.RPA-CRISPR/Cas12a偶联微流控生物传感器实现副溶血性弧菌的现场灵敏定量检测

背景：副溶血性弧菌是引发食源性疾病的重要病原体，对公共卫生和水产养殖构成威胁，亟需发展快速、准确的现场定量检测技术。现有qPCR等方法依赖复杂仪器，难以现场部署。研究目的：本研究旨在开发一种整合重组酶聚合酶扩增（RPA）与CRISPR/Cas12a系统的离心微流控生物传感器（ORCMB平台），实现副溶血性弧菌的现场、灵敏定量检测。通过预载标准品质粒、优化crRNA及反应条件，该平台可在单次运行中同步构建标准曲线并分析样品，以控制变异。结论：所构建的平台检测限为6.08拷贝/微升，定量范围100–10⁴拷贝/微升，性能与qPCR相当，批内批间变异可接受，检测成本约3.30美元。加标与实际样品验证表明其具备可靠的现场定量能力，为基于RPA-CRISPR的等温检测提供了可转移的定量方法框架，推动了现场病原体检测技术的发展。