Nature | 基因编辑的“温柔革命”：不剪断双链也能高效敲入，清华大学王海峰团队开发KNIT让CAR-T制造更安全

传统CRISPR-Cas9基因编辑依赖双链断裂(DSB)实现DNA敲入，虽高效但伴随indel、染色体易位等安全隐患。清华大学王海峰团队在Nature发表研究，开发了名为KNIT的新型编辑系统。该系统利用Cas9切口酶仅切断一条DNA链，并通过设计“DNA供体招募系统”在靶位点附近富集供体模板，显著提升了单链切口介导的同源定向修复(HDR)效率。第二代KE2系统效率最高可达89%。与Cas9相比，KNIT的indel和易位率极低，且未完成编辑的细胞可重复编辑。应用方面，研究在TRAC位点实现了CAR-T细胞的无病毒、无DSB工程化，效率32.9%-40.6%，制备的CAR-T细胞在体外和动物模型中均有效抗肿瘤。在LIPA基因突变细胞模型中，KNIT将正常cDNA精准整合至AAVS1位点，恢复了蛋白表达。该技术代表了基因编辑从“暴力剪切”到“温柔切口”的范式转变，为更安全的基因治疗和细胞治疗提供了新平台。