人细胞中进化丝氨酸重组酶用于10Kb插入

背景：传统基因治疗策略受限于病毒载体包装容量，CRISPR/Cas9系统存在效率低、脱靶等副作用，而丝氨酸重组酶虽能实现精准DNA整合，但在人类细胞中活性有限且依赖预埋位点。研究目的：开发一种在人细胞中完全进化、能高效识别内源性基因组位点并进行大片段靶向整合的丝氨酸重组酶系统。结论：研究团队开发了S-SELeCT系统，通过对phiC31重组酶进行人细胞定向进化，获得了能识别内源性对称位点Site A的高效突变体，并与dMad7融合，结合可变剪接共表达策略，在稳定细胞系中实现了10 kb质粒高达32.4%的整合效率，为不依赖宿主修复的大片段基因整合提供了新工具。