梭菌整合偶联激活的无启动子组合途径文库避大肠杆菌内DNA组装负担

背景：组合DNA设计与组装是获得高性能代谢途径的关键方法，但在梭菌等转化效率低的微生物中应用时，常需借助大肠杆菌进行组装，而梭菌遗传元件可能对大肠杆菌造成代谢负担，导致文库质量下降。研究目的：开发一种名为“无启动子序列的整合偶联激活（ICAPS）”的新方法，以在梭菌中实现DNA的组合组装，避免大肠杆菌中的负担问题。结论：ICAPS方法通过将不含启动子的操纵子整合至梭菌自身启动子下游来激活表达，结合新构建的合成RBSs，成功应用于丙酮丁醇梭菌的1-己醇合成途径文库，验证了其可行性，并发现乙酰辅酶A和丁酰辅酶A的缩合反应可能是限速步骤。