BB.基于多功能标记引物开发通用单步CRISPR检测方法消除不稳定的crRNA输入和PAM依赖性用于细菌感染的即时检测

本文介绍了一种名为TOP-CRISPR的新型检测方法，旨在解决重组酶聚合酶扩增（RPA）与CRISPR/Cas12a整合在细菌感染即时检测中面临的不稳定RNA输入、PAM依赖性和多步操作等挑战。该方法通过靶基因诱导的扩增子在T7 RNA聚合酶的帮助下生成crRNA序列，从而无需额外的crRNA，并通过标记引物的巧妙设计实现RPA与CRISPR/Cas12a系统的单管兼容，避免了气溶胶污染问题。实验结果表明，TOP-CRISPR能够检测低至1 CFU/mL的靶细菌，整个过程仅需不到50分钟，显著优于传统方法。此外，该方法还成功应用于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7和铜绿假单胞菌的检测，并通过实际样品验证了其实用性和稳健性。