Mikrotest zum Nachweis neutralisierender Antikörper gegen das Rhinopneumonitisvirus der Pferde

Zusammenfassung Fur den Neutralisationstest mit dem Rhinopneumonitisvirus der Pferde wurde eine Mikromethode entwickelt. Der permanente Schweinenierenstamm “PK 15” eignete sich fur die Zuchtung dieses Virus in Mikroplatten am besten. Wie in konventionellen Rohrchentesten, genugte eine Virus-Gebrauchsdosis von etwa 70 KID50. Eine Erhohung auf 200 KID50 veranderte die Ergebnisse nicht. Die Bindungsreaktion wurde direkt in den Plastikplatten bei + 4 °C uber 3 Stunden angesetzt. Durch Zugabe der “PK 15”-Zellen in die Gemische wurde die Bindungszeit abgeschlossen. Die Bebrutung der Mikroplatten erfolgte uber 7 Tage in einem CO2-Brutschrank. Als Kriterium einer stattgefundenen Virusvermehrung diente das Auftreten cytopathischer Veranderungen. Abgelesen wurde mit einem Auflichtmikroskop. Die in Mikrotesten gewonnenen Serumtiter von 70 Pferdeseren lagen durchschnittlich 2 bis 3 log2 hoher als die aus Rohrchentesten. Die Reproduzierbarkeit der Mikrotiter war sehr gut. Die Mikrotechnik kann fur alle grosangelegten, routinemasigen Neutralisationsteste mit dem Rhinopneumonitisvirus empfohlen werden. Summary Microtest for the demonstration of neutralizing antibodies against equine rhinopneumonitis virus A microtechnique was used for neutralization tests with the equine rhinopneumonitis virus in “PK 15” cells (permanent pig kidney strain). As in conventional tube tests, a dose of virus of about 70 KID50 is sufficient. Increasing the dose to 200 KID50 does not affect the results. The fixation reaction is carried out in plastic plates over a period of three hours at 4 °C. The fixation time is arrested by adding the PK 15 cells to the mixture. The micro-plates are incubated for 7 days at 37 °C in an atmosphere of CO2. The appearance of cytopathic changes is the criterion for multiplication of the virus. The result is read with a microskope with incident illumination. The serum titres obtained in 70 horses by this microtest had an average value of 2 to 3 log2 higher than when carried out by the tube test. Reproducibility of the micro-titre was very good. The micro-method can be recommended for all routine serial neutralization tests with the virus of rhinopneumonitis. Resume Microtest pour la mise en evidence des anticorps neutralisant le virus de la rhinopneumonite du cheval On developpe une micromethode pour le test de neutralisation avec le virus de la rhinopneumonite du cheval. La souche permanente de reins de porcs “PK 15” convient le mieux a la culture de ce virus en microplaques. Comme pour le test conventionnel en eprouvette, une dose de virus d'env. 70 KID50 est suffisante. Une augmentation a 200 KID50 ne modifie pas les resultats. La reaction de fixation s'effectue sur plaques en plastique, a 4 °C, pendant 3 heures. On orrete le temps de fixation en ajoutant les cellules PK 15 au melange. L'incubation des microplaques se fait a l'etuve, en atmosphere de CO2, pendant 3 heures. On arrete le temps de fixation en ajoutant les cellules pour la multiplication du virus. La lecture se fait au microscope a lumiere incidente. Les titres obtenus en microtests avec 70 serums equins sont en moyenne de 2 a 3 log2 plus eleves que les titres obtenus en eprouvettes. La reproductibilite des microtitres est excellente. La micromethode peut etre recommandee pour touts les tests de neutralisation de routine avec le virus de la rhinopneumonite, pratiques en serie. Resumen Microprueba para identificar anticuerpos neutralizantes frente al virus de la rinoneumonitis de los caballos Para la prueba de neutralizacion con el virus de la rinoneumonitis de los caballos se desarrollo una microtecnica. La estirpe permanente de rinones porcinos “PK 15” era la mas apropiada para cultivar este virus en microplacas. Como en las pruebas convencionales de tubitos, bastaba la dosis de utilidad de virus de unas 70 DIC50. El aumento a 20 DIC50 no variaba los resultados. La reaccion de fijacion se ajustaba directamente en las placas de plastico a + 4 °C a lo largo de 3 horas. Anadiendo las celulas “PK 15” a las mezclas se concluia el tiempo de fijacion. La incubacion de las microplacas acontecia por un espacio de 7 dias en una estufa de CO2. Como criterio de la multiplicacion de virus habida se utilizaba la aparicion de alteraciones citopaticas. La lectura se realizaba con un microscopio de luz incidente. Los titulos sericos obtenidos en micropruebas de 70 sueros sanguineos de caballos se hallaban como media de 2 a 3 log2 por encima de los de las pruebas en tubitos. La reproducibilidad de los microtitulos era muy buena. La microtecnica se puede recomendar para todas las pruebas de neutralizacion rutinarias, en escala grande, con el virus de la rinoneumonitis.