ARMC5/CACUL1 蛋白复合物在肾上腺肿瘤发生中的作用

IF 2.9 3区医学 Q3 ENDOCRINOLOGY & METABOLISM

Annales d'endocrinologie Pub Date : 2024-10-01 DOI:10.1016/j.ando.2024.08.083

Dr O. Roquigny , Dr I. Cavalcante , M. A. Quesnoy , Mme L. Sefraoui , Dr A. Vaczlavik , Mme K. Perlemoine , Dr F. Bonnet-Serrano , Dr M. Rizk , Dr A. Berthon , Pr J. Bertherat , Dr B. Ragazzon

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引用次数: 0

摘要

目的 ARMC5基因在双侧大结节性肾上腺增生症（BAMH）中经常发生改变，导致皮质醇过多症。研究表明，ARMC5 可作为 Cullin3 的适配体，对特定底物进行泛素化和降解。然而，ARMC5 似乎还有其他作用，为了确定这些作用，我们使用与 ARMC5 融合的过氧化物酶 APEX2，通过近似标记质谱法确定了 ARMC5 的其他潜在伙伴。APEX2酶可使活细胞中的蛋白质近距离生物素化。材料与方法分离ARMC5-APEX2生物素化的蛋白质，然后用质谱法鉴定。在 H295R、HEK293 和 HeLa 细胞中转染 CACUL1-HA、ARMC5-flag（WT、突变体、片段）或 siRNA 后，进行了共免疫沉淀、免疫荧光和 qPCR 实验。结果近距离标记（ARMC5-APEX2）显示 ARMC5 与 CACUL1（CDK2-相关和含 Cullin 结构域蛋白-1）相互作用。这种相互作用通过共免疫沉淀得到了证实，并且需要 ARMC5 的 BTB 结构域。CACUL1 似乎没有被 CUL3/ARMC5 泛素化。过量表达 CACUL1 会导致 ARMC5 的核转位，而 ARMC5 通常主要在细胞质中转位。这些数据表明，ARMC5 和 CACUL1 形成了一个复合体，其在核水平特别是类固醇生成中的确切作用尚待确定。

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Rôle du complexe protéique ARMC5/CACUL1 dans la tumorigenèse corticosurrénalienne

Objectif

Le gène ARMC5 est fréquemment altéré dans l’hyperplasie macronodulaire bilatérale des surrénales (HMBS) responsable d’un hypercortisolisme. Il a été montré qu’ARMC5 joue le rôle d’adaptateur de la Cullin3 pour l’ubiquitination et la dégradation de substrats spécifiques. Cependant, ARMC5 semble avoir d’autres rôles et pour essayer de les déterminer, nous avons identifié d’autres partenaires potentiels d’ARMC5 par spectrométrie de masse après marquage de proximité en utilisant la peroxydase APEX2 fusionnée à ARMC5. L’enzyme APEX2 permet de biotinyler les protéines à proximité dans les cellules vivantes.

Matériels et méthodes

Les protéines biotinylées par ARMC5-APEX2 ont été isolées puis identifiées par spectrométrie de masse. Des expériences de co-immunoprécipitation, d’immunofluorescence et de qPCR ont été réalisées après transfection de CACUL1-HA, ARMC5-flag (WT, mutants, fragments) ou de siRNA dans les cellules H295R, HEK293 et HeLa.

Résultats

Le marquage de proximité (ARMC5-APEX2) a mis en évidence une interaction de ARMC5 avec CACUL1 (CDK2-associated and Cullin domain containing protein-1). Cette interaction est confirmée par co-immunoprécipitation et nécessite le domaine BTB d’ARMC5. CACUL1 ne semble pas être ubiquitiné par CUL3/ARMC5. La surexpression de CACUL1 conduit à une translocation nucléaire de ARMC5 qui est normalement majoritairement cytoplasmique. Enfin, l’invalidation de CACUL1 conduit à une augmentation de l’expression des gènes de la stéroïdogenèse.

Discussion

L’ensemble de ces données montre qu’ARMC5 et CACUL1 forment un complexe dont le rôle exact au niveau nucléaire et en particulier sur la stéroïdogenèse reste encore à définir.

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来源期刊

Annales d'endocrinologie 医学-内分泌学与代谢

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审稿时长

50 days

期刊介绍： The Annales d''Endocrinologie, mouthpiece of the French Society of Endocrinology (SFE), publishes reviews, articles and case reports coming from clinical, therapeutic and fundamental research in endocrinology and metabolic diseases. Every year, it carries a position paper by a work-group of French-language endocrinologists, on an endocrine pathology chosen by the Society''s Scientific Committee. The journal is also the organ of the Society''s annual Congress, publishing a summary of the symposia, presentations and posters. "Les Must de l''Endocrinologie" is a special booklet brought out for the Congress, with summary articles that are always very well received. And finally, we publish the high-level instructional courses delivered during the Henri-Pierre Klotz International Endocrinology Days. The Annales is a window on the world, keeping alert clinicians up to date on what is going on in diagnosis and treatment in all the areas of our specialty.