SP-A 可恢复 SFTPA1 和 SFTPA2 突变体的低聚作用和分泌功能

Q4 Medicine
T. Desroziers , Y. Soreze , C. Fletcher , S. Amselem , F. Dastot Le Moal , V. Nau , C. Louvrier , M. Legendre , N. Nathan , S. Karabina
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Cette observation est en faveur d’une solubilisation de SP-A mutée en présence de WT. Nous avons précédemment montré que SP-A mutée n’était pas sécrétée. Cette étude confirme ces observations également par immunofluorescence mettant en évidence des vésicules de sécrétion seulement pour SP-A WT. Là encore, la co-expression avec SP-A WT permet à nouveau d’observer une sécrétion partielle des protéines mutées. Les analyses par co-IP du lysat et du surnageant ont permis de confirmer l’interaction entre SP-A WT et SP-A mutée.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Nous rapportons pour la première fois à travers cette étude le bénéfice de la protéine SP-A WT dans la restauration du profil d’oligomérisation et de la sécrétion des protéines SP-A mutées. 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Les protéines extraites du lysat cellulaire et du surnageant (sécrétion) sont analysées par western blot et co-immunoprécipitation (co-IP). Les protéines sont également étudiées par immunofluorescence.</p></div><div><h3>Résultats</h3><p>Les protéines SP-A mutées présentent un profil d’oligomérisation anormal dans le lysat soluble avec une absence d’hexamère en comparaison au WT. De façon intéressante, la co-expression avec SP-A WT augmente la quantité de SP-A mutée et restaure la formation d’hexamères. Parallèlement, dans le lysat insoluble, SP-A mutée seule est plus présente qu’en étant co-exprimée avec du WT. Cette observation est en faveur d’une solubilisation de SP-A mutée en présence de WT. Nous avons précédemment montré que SP-A mutée n’était pas sécrétée. Cette étude confirme ces observations également par immunofluorescence mettant en évidence des vésicules de sécrétion seulement pour SP-A WT. 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摘要

导言:分泌到肺泡空间的成熟表面活性蛋白(SP)-A 是 SP-A1 和 SP-A2 的组合,主要以十八进制形式存在。编码 SP-A 的基因(SFTPA1 和 SFTPA2)的杂合子变异与纤维化弥漫性间质性肺病(DIP)和肺腺癌有关。迄今为止,尚无特效治疗方法。本研究的目的是调查 SP-A1 和 SP-A2 突变体对 SP-A 的寡聚化和分泌以及治疗潜力的影响。方法在 HEK293 T 细胞系中通过瞬时表达或共表达 SP-A WT 和/或突变体(错义突变)进行体外研究。从细胞裂解物和上清液(分泌物)中提取的蛋白质通过 Western 印迹和共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP)进行分析。结果与 WT 蛋白相比,突变的 SP-A 蛋白在可溶性裂解物中显示出异常的寡聚化特征,缺乏六聚体。有趣的是,与 SP-A WT 共表达可增加突变 SP-A 的数量并恢复六聚体的形成。同时,在不溶解的裂解物中,单独存在的突变 SP-A 比与 WT 共表达时更多。这一观察结果有利于突变 SP-A 在 WT 存在的情况下溶解。我们之前已经证明,突变的 SP-A 不会分泌。本研究还通过免疫荧光证实了这些观察结果,发现只有 SP-A WT 有分泌囊泡。在这里,与 SP-A WT 共表达也能观察到突变蛋白的部分分泌。对裂解物和上清液的 Co-IP 分析证实了 SP-A WT 与突变 SP-A 之间的相互作用。这项试验性研究为研究 SP-A 作为与 SFTPA1 或 SFTPA2 变异相关的肺纤维化患者的治疗方法提供了机会。
本文章由计算机程序翻译,如有差异,请以英文原文为准。
SP-A restaure l’oligomérisation et la sécrétion de mutants de SFTPA1 et SFTPA2

Introduction

La protéine du surfactant (SP)-A mature, sécrétée dans l’espace alvéolaire, est une combinaison de SP-A1 et SP-A2 principalement rapportée sous forme d’octadécamères. Les variations hétérozygotes dans les gènes codant pour SP-A (SFTPA1 et SFTPA2) sont associées à des pneumopathies interstitielles diffuses (PID) fibrosantes et des adénocarcinomes pulmonaires. À ce jour aucun traitement spécifique n’existe. Cette étude a pour but d’analyser l’effet des mutants SP-A1 et SP-A2 sur l’oligomérisation et la sécrétion ainsi que le potentiel thérapeutique de SP-A.

Méthodes

Étude in vitro par expression ou co-expression transitoire de SP-A WT et/ou mutée (mutation faux sens) dans la lignée cellulaire HEK293 T. Les protéines extraites du lysat cellulaire et du surnageant (sécrétion) sont analysées par western blot et co-immunoprécipitation (co-IP). Les protéines sont également étudiées par immunofluorescence.

Résultats

Les protéines SP-A mutées présentent un profil d’oligomérisation anormal dans le lysat soluble avec une absence d’hexamère en comparaison au WT. De façon intéressante, la co-expression avec SP-A WT augmente la quantité de SP-A mutée et restaure la formation d’hexamères. Parallèlement, dans le lysat insoluble, SP-A mutée seule est plus présente qu’en étant co-exprimée avec du WT. Cette observation est en faveur d’une solubilisation de SP-A mutée en présence de WT. Nous avons précédemment montré que SP-A mutée n’était pas sécrétée. Cette étude confirme ces observations également par immunofluorescence mettant en évidence des vésicules de sécrétion seulement pour SP-A WT. Là encore, la co-expression avec SP-A WT permet à nouveau d’observer une sécrétion partielle des protéines mutées. Les analyses par co-IP du lysat et du surnageant ont permis de confirmer l’interaction entre SP-A WT et SP-A mutée.

Conclusion

Nous rapportons pour la première fois à travers cette étude le bénéfice de la protéine SP-A WT dans la restauration du profil d’oligomérisation et de la sécrétion des protéines SP-A mutées. Cette étude pilote permet d’envisager l’étude de SP-A comme traitement des patients présentant une fibrose pulmonaire associée à des variations de SFTPA1 ou SFTPA2.

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Revue des Maladies Respiratoires Actualites
Revue des Maladies Respiratoires Actualites Medicine-Pulmonary and Respiratory Medicine
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