Audrey Gros , Martina Prochazkova-Carlotti , Elodie Richard , Floriane Cherrier , Elodie Laharanne , Yamina Idrissi , Camille Baron , Sandrine Poglio , Océane Ducharme , Sarah Menguy , Anne Pham-Ledard , Marie Beylot-Barry , Jean-Philippe Merlio , Laurence Bresson-Bepoldin
{"title":"建立大细胞腿型皮肤B淋巴瘤临床前模型的价值","authors":"Audrey Gros , Martina Prochazkova-Carlotti , Elodie Richard , Floriane Cherrier , Elodie Laharanne , Yamina Idrissi , Camille Baron , Sandrine Poglio , Océane Ducharme , Sarah Menguy , Anne Pham-Ledard , Marie Beylot-Barry , Jean-Philippe Merlio , Laurence Bresson-Bepoldin","doi":"10.1016/j.morpho.2023.100628","DOIUrl":null,"url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>Les lymphomes cutanés B à grandes cellules de type jambe sont une entité spécifique de la classification OMS présentant un profil d’expression correspondant à une cellule d’origine B lymphocytaire post-centre germinatif, IgM+. Nous avons décrit le profil mutationnel de cette entité.</p><p>Ces cancers rares posent le problème de pouvoir caractériser les mécanismes de résistance thérapeutique des cellules tumorales. La mort massive des cellules tumorales en suspension n’avait pas permis l’établissement de lignée.</p></div><div><h3>Matériel et méthodes</h3><p>Afin d’obtenir le premier modèle de cette entité, nous avons réalisé une xénogreffe orthotopique sous-cutanée de plusieurs patients et réalisé des étapes de greffes secondaires. Parallèlement, nous avons mis en culture les cellules obtenues de ces xénogreffes successives. Le phénotype par immunohistochimie et cytométrie et le génotype des xénogreffes et de la lignée obtenue ont été comparés à ceux de la tumeur primitive ainsi que le séquençage transcriptomique.</p></div><div><h3>Resultats</h3><p>Nous avons réalisé la xénogreffe de la tumeur d’une patiente de 85<!--> <!-->ans présentant un lymphome B cutané type jambe. La première xénogreffe a donné une tumeur en 42<!--> <!-->jours et à 73<!--> <!-->jours le sacrifice a permis de réaliser une autopsie associée à la remise en suspension des cellules et xénogreffe secondaire.</p><p>La cytométrie montrait l’expression de CD19, CD20 et CD45. L’analyse histologique et l’immunohistochimie anti-HLA-ABC confirmait l’infiltration cutanée, hépatosplénique, rénale et fémorale. Les cellules mises en culture ont permis d’obtenir une lignée avec plus de 200 divisions au bout d’un an qui était également capable de permettre des xénogreffes successives.</p><p>Le modèle de xénogreffe et la lignée conservaient l’expression CD20, BCL2, MUM1, IgM, BCL6<sup>faible</sup> avec celle de MYC and Ki-67 caractéristique de cette entité. Le séquençage massif retrouvait les mutations combinées des gènes <em>MYD88</em>, <em>CD79B</em> and <em>PIM1</em> définissant le sous-type de ces lymphomes. La multi-FISH and la SNP-array montraient un profil génétique stable. Le séquençage transcriptomique montrait l’activation de NF-KB et de MYC. Un test pharmacologique montrait une réponse plus intense à l’ibrutinib (IC 50 : 2,6<!--> <!-->nM) par rapport à un modèle « équivalent » de lymphome B systémique (lignée OCI-Ly3).</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Ce premier modèle démontre la faisabilité de notre approche ce qui permettra d’obtenir d’autres modèles représentant la diversité des lymphomes B cutanés agressifs. 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Nous avons décrit le profil mutationnel de cette entité.</p><p>Ces cancers rares posent le problème de pouvoir caractériser les mécanismes de résistance thérapeutique des cellules tumorales. La mort massive des cellules tumorales en suspension n’avait pas permis l’établissement de lignée.</p></div><div><h3>Matériel et méthodes</h3><p>Afin d’obtenir le premier modèle de cette entité, nous avons réalisé une xénogreffe orthotopique sous-cutanée de plusieurs patients et réalisé des étapes de greffes secondaires. Parallèlement, nous avons mis en culture les cellules obtenues de ces xénogreffes successives. Le phénotype par immunohistochimie et cytométrie et le génotype des xénogreffes et de la lignée obtenue ont été comparés à ceux de la tumeur primitive ainsi que le séquençage transcriptomique.</p></div><div><h3>Resultats</h3><p>Nous avons réalisé la xénogreffe de la tumeur d’une patiente de 85<!--> <!-->ans présentant un lymphome B cutané type jambe. 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De l’intérêt d’établir un modèle préclinique de lymphome cutané B à grandes cellules de type jambe
Introduction
Les lymphomes cutanés B à grandes cellules de type jambe sont une entité spécifique de la classification OMS présentant un profil d’expression correspondant à une cellule d’origine B lymphocytaire post-centre germinatif, IgM+. Nous avons décrit le profil mutationnel de cette entité.
Ces cancers rares posent le problème de pouvoir caractériser les mécanismes de résistance thérapeutique des cellules tumorales. La mort massive des cellules tumorales en suspension n’avait pas permis l’établissement de lignée.
Matériel et méthodes
Afin d’obtenir le premier modèle de cette entité, nous avons réalisé une xénogreffe orthotopique sous-cutanée de plusieurs patients et réalisé des étapes de greffes secondaires. Parallèlement, nous avons mis en culture les cellules obtenues de ces xénogreffes successives. Le phénotype par immunohistochimie et cytométrie et le génotype des xénogreffes et de la lignée obtenue ont été comparés à ceux de la tumeur primitive ainsi que le séquençage transcriptomique.
Resultats
Nous avons réalisé la xénogreffe de la tumeur d’une patiente de 85 ans présentant un lymphome B cutané type jambe. La première xénogreffe a donné une tumeur en 42 jours et à 73 jours le sacrifice a permis de réaliser une autopsie associée à la remise en suspension des cellules et xénogreffe secondaire.
La cytométrie montrait l’expression de CD19, CD20 et CD45. L’analyse histologique et l’immunohistochimie anti-HLA-ABC confirmait l’infiltration cutanée, hépatosplénique, rénale et fémorale. Les cellules mises en culture ont permis d’obtenir une lignée avec plus de 200 divisions au bout d’un an qui était également capable de permettre des xénogreffes successives.
Le modèle de xénogreffe et la lignée conservaient l’expression CD20, BCL2, MUM1, IgM, BCL6faible avec celle de MYC and Ki-67 caractéristique de cette entité. Le séquençage massif retrouvait les mutations combinées des gènes MYD88, CD79B and PIM1 définissant le sous-type de ces lymphomes. La multi-FISH and la SNP-array montraient un profil génétique stable. Le séquençage transcriptomique montrait l’activation de NF-KB et de MYC. Un test pharmacologique montrait une réponse plus intense à l’ibrutinib (IC 50 : 2,6 nM) par rapport à un modèle « équivalent » de lymphome B systémique (lignée OCI-Ly3).
Conclusion
Ce premier modèle démontre la faisabilité de notre approche ce qui permettra d’obtenir d’autres modèles représentant la diversité des lymphomes B cutanés agressifs. Il permet d’étudier les interactions avec le microenvironnement tumoral qui seront analysées sur le plan fonctionnel et par des techniques de transcriptomique en cellule unique.
期刊介绍:
Morphologie est une revue universitaire avec une ouverture médicale qui sa adresse aux enseignants, aux étudiants, aux chercheurs et aux cliniciens en anatomie et en morphologie. Vous y trouverez les développements les plus actuels de votre spécialité, en France comme a international. Le objectif de Morphologie est d?offrir des lectures privilégiées sous forme de revues générales, d?articles originaux, de mises au point didactiques et de revues de la littérature, qui permettront notamment aux enseignants de optimiser leurs cours et aux spécialistes d?enrichir leurs connaissances.