镍离子在二氧化硅基色谱树脂中用于重组蛋白纯化的吸附谱

Rafael De Paula, R. C. Giordano, W. Kopp
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摘要

现代生物技术最重要的贡献之一是重组蛋白的生产。将聚组氨酸尾部(poly -his)插入重组蛋白中,通过组氨酸与色谱树脂表面的金属亲和力促进纯化过程。在此背景下,本研究的目的是评价镍离子在国内生产的二氧化硅上的吸附过程,并与IDA基团活化,以纯化重组蛋白。在这一阶段的研究中,建立了溶液中镍的定量校准曲线,以评估吸附在色谱树脂上的金属离子的浓度。对镍-IDA配合物在纯化过程中常见条件下的稳定性进行了评价,取得了良好的效果。在这些实验中,即使在高浓度咪唑的解吸试验后,镍离子仍然被吸附在柱中。PY-IDA树脂每克活性二氧化硅(PY-IDA)吸附镍82.96(±16.58)mmol。未来的蛋白质纯化实验
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PERFIL DE ADSORÇÃO DE ÍONS NÍQUEL EM RESINAS CROMATOGRÁFICAS A BASE DE SÍLICA PARA PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES
Uma das mais importantes contribuições da biotecnologia moderna é a produção de proteínas recombinantes. A inserção da cauda de poli-histidina (poli-his) em proteínas recombinantes, facilita o processo de purificação através da afinidade da histidina com metais na superfície de resinas cromatográficas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar o processo de adsorção de íons níquel em sílica produzida nacionalmente e ativada com grupos IDA, para purificação de proteínas recombinantes. Nesta etapa do estudo, foi construída uma curva de calibração para quantificação de níquel em solução, permitindo avaliar a concentração desse íon metálico adsorvido à resina cromatográfica. O complexo níquel-IDA também foi avaliado quanto a sua estabilidade em condições comuns a processos de purificação, apresentando ótimos resultados. Nestes experimentos os íons níquel mantiveram-se adsorvidos na coluna, mesmo após testes de dessorção com altas concentrações de imidazol. A resina PY-IDA adsorveu 82,96 (± 16,58) mMols de níquel por grama de sílica ativada (PY-IDA). Futuros experimentos de purificação de proteínas
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