Detection of Dopamine and Serotonin by Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

临床检验杂志 Pub Date : 2017-09-30 DOI:10.15324/KJCLS.2017.49.3.220

남궁 수민, 최 정수, 박 지향, 양 만길, 이 민우, 김 성욱

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引用次数: 11

Abstract

도파민과 세로토닌은 신경전달물질 및 호르몬으로서 미량이지만 체내에서 중요한 기능을 한다. 검체는 혈청과 24시간 뇨를 쓰며, 주로 HPLC-MS를 이용하여 검사한다. 본 연구에서는 항원-항체반응을 이용한 경쟁적 ELISA를 통해 도파민과 세로토닌을 검출하고자 하였다. 5 μg/mL BSA conjugate를 96 well 표면에 고정시킨 뒤 각각 농도를 다르게 한 신경전달물질과 1차항체를 넣어 반응시키고 HRP가 결합된 2차 항체와 TMB를 처리하여 흡광도를 측정하였다. 측정 결과를 토대로 회귀식과 R2값을 구하여 신경전달물질에 대한 항체의 민감도와 신경전달물질 농도와 흡광도 사이의 상관관계를 판단하였다. 도파민은 1차항체를 6,000배, 7,000배로 희석했을 때 R2=0.91로 신경전달물질 농도와 흡광도의 상관관계가 가장 높게 나타났고, 세로토닌은 3,000배와 6,000배를 제외한 모든 희석배수에서 R2≥0.90의 높은 상관관계를 나타냈다. 도파민과 세로토닌 모두 1.0×10-7 M 이하의 저농도에서는 효과적으로 검출되지 않았기 때문에 참고치가 이보다 낮은 혈청 도파민 검출은 HPLC-MS이용이 필요해 보이지만, 24시간 뇨 도파민과 혈청 및 24시간뇨 세로토닌의 검출에는 competitive ELISA가 효과적일 것이라 사료된다. 보다 낮은 농도의 신경전달물질도 정확하게 검출하기 위해서는 추가 연구가 필요하다.

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竞争性酶联免疫吸附法检测多巴胺和血清素

多巴胺和血清素是神经传达物质及荷尔蒙，虽然微量，但在体内具有重要功能。检体使用血清和24小时尿，主要用HPLC-MS进行检测。本研究试图通过抗原-抗反应的竞争性ELISA检测多巴胺和血清素。将5 μg/mL BSA conjugate固定在96 well表面，分别加入浓度不同的神经传达物质和1次抗体进行反应，处理HRP结合的2次抗体和TMB，测定吸光度。根据测定结果，求出回归式和R2值，判断出抗体对神经传达物质的敏感度，神经传达物质浓度和吸光度之间的关系。多巴胺将1次抗体稀释为6000倍、7000倍时，R2=0.91，神经传达物质浓度和吸光度的相关关系最高;血清素在除3000倍和6000倍以外的所有稀释倍数中，R2≥0.90，显示出较高的相关关系。多巴胺和血清素都1.0×10 - 7米以下的低浓度中未检测出有效,所以参考价值更低的血清检测多巴胺hplc - ms使用,但需要24小时尿多巴胺和血清及24小时尿的检测出有competitive elisa,是一个有效的饲料。为了准确检测出浓度更低的神经传达物质，有必要进行进一步的研究。

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