Quantitative determination of PCR products by colorimetric method.

Abstract

PCRによって増幅された産物を,高感度かつ客観的に検出,定量するための方法として,非放射性プロープを用いた非色法の有用性が検討された。マイクロプレートウェルに一本鎖PCR増幅産物を吸着し,Digoxigenin (Dig.)をラベルしたプローブとハイブリダイゼーションを行なった後,パーオキシンダーゼ標識抗Dig抗体によるELISAを行なった。パーオキシダーゼ標識プローブは,Biotin標識プローブより10倍以上の感度を示し,ピコグラム単位での検出,定量が可能であった。未知材料の定量は,既知材料のO. D.値曲線に対して,ELESAの結果示されたO. D.値を外挿することにより求められた。この方法は同じく簡便な方法であるアガオースゲルによる定量に比し,客観性に優れ,10,000倍以上の感度を有し,アガロースゲルによる定量では,検出不能な低濃度材料に対しても有効であった。本法は,他の定量方法に比し,求められる条件即ち,客観性,感度,手技の簡便性に優れ,PCR産物の定量,あるいはPCRによる増幅の違いに基づくTempletの推量に有用な手段であると結論した。