Préparation de fibronectine humaine de haute pureté fonctionnellement active

Abstract

De la fibronectine a été purifiée par chromatographie d'affinité sur Sepharose/gelatine, à partir de plasma frais humain congelé avec de l'urée 3 M comme agent d'élution. La haute pureté des préparations a été vérifiée (immunoélectrophorèse, électrophorèse en polyacrylamide, FPLC). L'intégrité fonctionnelle de la molécule purifiée a été confirmée par trois tests : mesure de la capacité de fixation à la gélatine par une technique de type ELISA, mesure de la capacité d'adhésion cellulaire avec des fibroblastes (cellules de rein de hamster nouveau-né) et mesure de la capacité d'opsonisation (ingestion de particules de latex gélatinisées par des macrophages murins). Congelée, la fibronectine conserve toutes ses propriétés. La qualité de cette fibronectine semble bien adaptée aux exigences d'une protéine standard permettant d'évaluer les propriétés physico-chimiques et fonctionnelles d'autres fibronectines.

Fibronectin has been purified by gelatin-Sepharose affinity chromatography from fresh frozen human plasma. The bound fibronectin was eluted with 3 M urea. The purity of the fibronectin obtained has been checked on (immunoelectrophoresis, polyacrylamide gel electrophoresis, FPLC). Biological activity of the purified molecule has been monitored by means of three assays: quantitation of the gelatin-binding activity by ELISA, quantitation of the fibronectin-mediated attachment of fibroblasts on plastic and evaluation of the opsonic activity (uptake of gelatin latex particules by a murine macrophage line). When deep-frozen, fibronectin retains all of its properties. This highly purified and functional fibronectin fulfills the basic requirements for a standard reagent. It will allow to investigate physicochemical and functional alterations of various fibronectins.