EFEITO DO SILENCIAMENTO DA CHAPERONA ERP29 NA EXPRESSÃO DE GENES DA VIA PI3K/AKT EM CÉLULAS DE CÂNCER DE FARINGE SENSÍVEIS E RESISTENTES À CISPLATINA

Abstract

Introdução/Justificativa

As proteínas chaperonas, como a ERp29, são essenciais para o enovelamento e para a secreção de proteínas do retículo endoplasmático para o complexo de Golgi. Alterações nesse processo podem comprometer a funcionalidade proteica e influenciar o comportamento celular, incluindo a progressão tumoral. O silenciamento do gene ERP29 foi associado ao aumento da progressão de células tumorais da faringe, sugerindo que a ERp29 pode atuar na inibição de fenótipos tumorais agressivos. No entanto, os mecanismos envolvidos nessa regulação ainda não estão esclarecidos. A via PI3K/AKT desempenha um papel importante na progressão tumoral, regulando processos como sobrevivência celular e resposta inflamatória no microambiente tumoral. No entanto, a relação entre ERP29 e a modulação dessa via ainda não foi elucidada.

Objetivos

O objetivo deste trabalho foi avaliar os padrões de expressão de genes da via PI3K/AKT na linhagem de células tumorais de faringe FaDu, com supressão do gene ERP29, em três condições experimentais: FaDu, FaDu tratada com cisplatina (CDDP) (FaDu-CDDP) e FaDu resistente à CDDP (FaDu-R).

Materiais e Métodos

A linhagem celular FaDu (HTB-43, ATCC) é sensível à CDDP e foi cultivada seguindo protocolo padrão. A resistência celular foi induzida com 0,5 µM de CDDP, conforme protocolo previamente estabelecido. O gene ERP29 foi silenciado utilizando RNA de interferência (s21576, Invitrogen). Para identificar genes da via PI3K/AKT modulados pelo ERP29, o cDNA de cada amostra foi amplificado utilizando a placa TaqMan Array Human Molecular Mechanisms of Cancer (4418806, Applied Biosystems). Os resultados foram validados por qPCR. O teste t foi utilizado para comparação entre os grupos e os resultados foram expressos como fold change (FC). O valor de p < 0,05 foi considerado significativo.

Resultados

A expressão do gene SRC foi maior nas células FaDu-CDDP em comparação com FaDu (FC: 3,4, p = 0,02) e FaDu-R (FC: 4,6, p < 0,001). No entanto, após o silenciamento de ERP29, os níveis de SRC tornaram-se semelhantes entre as linhagens celulares. O gene AKT1 apresentou maior expressão nas células FaDu (FC: 4,2, p = 0,03) e FaDu-CDDP (FC: 3,9, p = 0,04) em comparação com FaDu-R. No entanto, nas células com ERP29 silenciado, a expressão de AKT1 foi maior em FaDu do que em FaDu-CDDP (FC: 1,7, p = 0,04). Não foram observadas diferenças significativas na expressão de ITGAV entre as linhagens celulares. Entretanto, após o silenciamento do ERP29, ITGAV apresentou maior expressão em FaDu (FC: 3,3, p = 0,02) e FaDu-R (FC: 2,3, p = 0,01) em comparação com FaDu-CDDP. A expressão de JUN foi maior em FaDu-CDDP em relação a FaDu-R (FC: 2,6, p = 0,04). Entretanto, após o silenciamento do ERP29, a expressão de JUN foi maior em FaDu em comparação com as outras linhagens celulares (FC: 4,5, p= 0,03 e FC: 3,0, p= 0,03). A expressão de MDM2 foi menor em FaDu do que nas demais linhagens celulares (FC: 0,3, p= 0,002 e FC: 0,2, p = 0,01). No entanto, nas células com ERP29 silenciado, a expressão de MDM2 foi maior em FaDu do que em FaDu-CDDP (FC: 2,0, p = 0,02).

Conclusão

Nossos resultados sugerem que o gene ERP29 modula a expressão de genes-chave da via PI3K/AKT, influenciando potencialmente o comportamento das células tumorais no carcinoma de faringe. Estudos adicionais, incluindo experimentos com diferentes linhagens celulares e modelos in vivo, são necessários para confirmar esses achados.