L’amphiréguline contribue à la résistance des cellules tumorales circulantes du cancer bronchique non à petites cellules via un modèle d’étude microfluidique

Abstract

Introduction

Le Cancer Bronchique Non à Petites Cellules (CBNPC) est hautement métastatique avec un tropisme cérébral assombrissant le pronostic des patients (Goldstraw et al., 2015). Une kinase de la voie de signalisation Hippo, NDR2, soutient ce caractère métastatique en entrainant notamment la translocation nucléaire du facteur de transcription YAP (Yes Associated Protein) (Levallet et al., 2023). Nous cherchons à déterminer si l’amphiréguline (AREG, ligand du récepteur de l’Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR)) et cible transcriptionnelle de YAP, participe à la résistance des Cellules Tumorales Circulantes (CTCs) du CBNPC.

Méthodes

Deux lignées cellulaires tumorales (H2030 et H2030-BrM₃) exprimant (siARN-Neg) ou non l’AREG (siARN-AREG), ont été mises en flux afin de mimer les conditions en circulation des CTCs via une pompe microfluidique (Ibidi ®), dans un milieu de culture contenant ou non de l’AREG exogène (20 ng/mL). La viabilité (test à l’Acridine orange, NucleoCounter 3000 de Chemometec ®), la prolifération (Ki67), la mort cellulaire (Caspase Glo 3/7 ®) et l’expression d’effecteurs de la voie Hippo (RT-qPCR, immunocytochimie et western blot) ont été quantifiées.

Résultats

La mise en flux des cellules H2030 ou H2030-BrM₃ augmente de 2 à 3 fois l’expression du messager de l’AREG. L’AREG exogène diminue l’expression de l’EGFR à la membrane plasmique des cellules H2030-BrM₃, mais augmente de 3 fois l’expression protéique de TACE (enzyme libérant l’AREG mature), et de 3,5 fois la forme phosphorylée de ERK1/2 (kinases en aval de l’EGFR). L’activation de signalisation AREGr/EGFR/ERK1/2 est corrélée à une diminution d’environ 2 fois de l’activité des caspases 3/7, et une augmentation du nombre de cellules positives au Ki67.

Conclusion

Nous avons donc démontré que 1) la mise en flux des cellules H2030 ou H2030-BrM₃ induit l’expression du messager de l’AREG de façon NDR2 dépendante, et que 2) l’AREG exogène, activant la signalisation ERK, protégerait les cellules de lignées tumorales bronchiques mise en flux de la mort cellulaire et stimulerait leur prolifération. Ce travail renforce l’hypothèse que l’AREG jouerait un rôle dans la résistance des CTCs du CBNPC et donc la formation de métastases. Ces résultats seront à confirmer via un modèle murin de métastases cérébrales d’origine bronchique. L’objectif sera également d’évaluer l’intérêt du dosage sanguin de l’AREG dans le suivi des patients atteints de CBNPC sous traitement comme potentiel biomarqueur. La forme circulante de l’AREG pourrait à terme servir de biomarqueur des CBNPC à risque de métastase.