Mise en place de l’immunohistochimie contre les mutations BRAF et NRAS dans le profilage moléculaire des mélanomes conjonctivaux

Abstract

Introduction

Le mélanome conjonctival, dont l’incidence augmente continuellement, représente environ 5 % de l’ensemble des mélanomes oculaires ; 30 à 50 % de ces mélanomes conjonctivaux présentent des mutations de l’oncogène BRAF et environ 20 % des mutations du gène NRAS (avec comme mutation récurrente V600E, Q61R respectivement).

Objectif

Le but de ce travail est d’étudier la sensibilité et la spécificité des anticorps ciblant les protéines mutantes BRAFV600E et NRASQ61R dans une cohorte de mélanomes conjonctivaux.

Matériel et méthode

À partir d’une cohorte de 25 mélanomes conjonctivaux diagnostiqués dans le service de pathologie oculaire de l’hôpital des 15–20 entre 2011 et 2022, une relecture centrale des diagnostics a été réalisée. Puis, un bloc de tissu paraffiné de chaque cas a été sélectionné pour permettre l’analyse immunohistochimique (anticorps prédilués anti-BRAFV600E clone IHC600 et anti-NRASQ61R clone RBT-NRAS, Diagomics) et en parallèle une analyse en biologie moléculaire (séquençage ciblé des mutations hotspots des gènes BRAF et NRAS). Après déparaffinage, un démasquage pendant 60 minutes à pH 8,5, puis une incubation de l’anticorps (20 minutes pour BRAF et 30 minutes pour NRAS) ont été réalisés. Une amplification a été nécessaire pour l’anticorps anti-NRAS. Enfin, les lames ont subi des étapes de lavage et contre-coloration à l’hématoxyline.

Résultats

Les résultats concernant l’immunohistochimie anti-NRAS et anti-BRAF montrent une sensibilité de 100 % pour les deux et une spécificité de 95 et 94 %. Quand elle était présente, cette expression était forte et diffuse pour les deux anticorps. Deux cas positifs en immunohistochimie (1 pour NRAS et 1 pour BRAF) n’ont pas été confirmés en biologie moléculaire.

Discussion/conclusion

Ce travail constitue la première série étudiant la valeur prédictive de l’immunohistochimie dans la détection des mutations BRAF et NRAS dans les mélanomes conjonctivaux. L’immunohistochimie anti-BRAF V600E a montré par le passé sa valeur diagnostique dans plusieurs types tumoraux dont les mélanomes cutanés. En revanche, l’immunohistochimie anti-NRASQ61R a révélé des résultats contradictoires quant à sa spécificité dans la littérature en dehors des tumeurs oculaires. Nos résultats montrent une bonne corrélation entre expression des protéines mutées BRAF/NRAS et la présence des mutations en biologie moléculaire. Ceci pourrait constituer alors un outil rapide, peu onéreux et préservant le matériel tissulaire pour réaliser le profilage de ces tumeurs.