ISEV2024 摘要手册。

方法：制备型超速离心法提供了多种不同的纯化选择。目前需要改进 EV 纯化，这可能需要重新考虑目前使用的纯化策略，以进一步去除可能干扰工作流程的杂质。离心法提供多种纯化策略，包括密度梯度超速离心、速率分区离心和差速离心。每种方法都有其优点和局限性，下文将对此进行讨论。离心既可用于制备 EVs，也可使用分析超速离心机（AUC）对样品进行表征。分析超速离心机的工作原理是监测颗粒在离心力作用下的沉降和扩散模式。根据这些数据，可以确定一些样品特性，包括样品纯度和大小分布，这两点都是 EV 研究的重要方面。其他生物物理特性，包括沉降和扩散系数、各向异性、流体力学半径和部分比容，也可通过 AUC 确定：在此，我们展示了几种不同的制备方法，并讨论了它们在使用和污染物去除方面的优势和局限性。小结/结论：了解不同的纯化方法可以帮助我们更好地分析样品：了解不同的纯化方法将有助于研究人员选择最适合其 EVs 的方法。AUC 长期以来一直是病毒载体的有力表征方法；它是一种第一主要表征技术，能让研究人员研究最终配方中的样本。Anis Larbi博士11法国贝克曼库尔特生命科学公司赞助展览、海报展示和午餐（周四）2024 年 5 月 9 日12:00 - 2:00，展厅-14-15 室引言细胞外囊泡 (EV) 分析采用了多种方法。分离方法通常包括超速离心法、大小排阻色谱法或沉淀法。表征技术，如电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、流式细胞术和 Western 印迹，可提供有关 EV 大小、形态、表面标记和蛋白质含量的信息。方法提出了一种用于表征 EVs 的综合工作流程，根据目的的不同有两种不同的模式：生物标记/异质性分析（常用于研发）和特定 EV 生产（用于生产）。工作流程包括几个关键步骤，如 EV 制备、纯化、质量控制和表征。流式细胞仪是这一过程中广泛使用的方法，通常辅以正交方法进行比较。这种自动化确保了整个过程中结果的一致性和可靠性。此外，流式细胞术利用荧光灵敏地检测和计数单个 EV 的能力，使其成为一种优越的 EV 表征方法。单独分析 EV 的能力在生物标记/异质性分析中尤为重要。此外，经测试的流式细胞仪操作简便、坚固耐用，尤其在生产环境中具有显著优势。最后，流式细胞仪与 EV 工作流程分析的无缝整合进一步证明了它的优势。由于流式细胞仪具有极高的灵敏度，利用它可以获得高质量、可重复的数据。总之，这些发现有力地证明了将流式细胞仪作为 EV 分析中正交方法的补充甚至替代方法的优势。最近发布的 MISEV2023 标志着 EV 研究界的一个重要里程碑，旨在为细胞外囊泡研究的分析和报告制定标准化指南和建议。该领域的知识追求涉及利用各种解决方案生成数据，同时确保质量和可重复性。本报告重点介绍离心法和流式细胞术的现行做法如何与 MISEV2023 保持一致，以及可能存在的差距。 44 在PRODIGE 31- REMINET队列中探索细胞外小泡作为监测十二指肠胰腺神经内分泌肿瘤（DPNET）的新生物标志物Valentin Vautrot1, Isen Naiken1, Carmen Garrido1, Pr Côme Lepage2, Jessica Gobbo博士31 INSERM 1231, Label "Ligue National contre le Cancer" and Label d'Excellence LipSTIC、2Federation Francophone de Cancérologie Digestive (FFCD), EPICAD INSERM 1231, DIJON, France, 3INSERM 1231, Label "Ligue National contre le Cancer" and Label d'Excellence LipSTIC, Department of Medical Oncology, Early phase unit INCa CLIP2；Georges-François Leclerc 中心，DIJON，FRANCEPF01。46 开发细胞外囊泡 RNA 测序平台，用于鉴定胰腺癌诊断的 RNA 标记客座研究员 Yuta Shimizu1,2，研究员 Fumi Asai2，研究员 Keidai Miyakawa2，助教 Kenji Takahashi3，主任 Tatsutoshi Inuzuka21Baylor Genetics，美国休斯顿，2H.U. Group Research Institute, Akiruno, Japan, 3Asahikawa Medical University, Asahikawa, JapanPF01.47 用于检测子宫内膜基质细胞标志物 CD10、CD90 和 CD140b 的血浆 EV 的光谱流式细胞术，作为子宫内膜异位症的生物标志物Emily Paterson 女士1、Simon Scheck 博士1,2、Simon McDowell 博士2、Nick Bedford 博士2、Jane Girling 副教授3、Claire Henry 博士11 新西兰惠灵顿奥塔哥大学、2 新西兰惠灵顿首都与海岸特 Whatu Ora、3 新西兰达尼丁奥塔哥大学PF01.48 miR-15a from tear-derived EVs in diabetic retinopathyTengku Ain Fathlun Kamalden教授1, 2 Nur Musfirah Mahmud1, 3 Ying Jie Liows1, 4 Sujaya Singh1, 5 Samarjit Das21UM眼科研究中心、2Department of Anaesthesiology and Department of Pathology, Johns Hopkins School of 37 Medicine, Baltimore, United States of AmericaPF01.49 蛋白质组学发现肝细胞癌早期诊断中细胞外囊泡富集的差异蛋白载体.Zhenxun Wang1, Ph.D Bodeng Wu2, Qiaoting Wu1, Jiawei Li1, Jiaming Chen1, Quan Zhong1, Phd Xin Zhang2, Professor.南方医科大学南方医院肝胆外科 2 南方医科大学南方医院医学实验中心PF01.50 作为胸膜间皮瘤生物标志物的EV衍生环状RNA Ben Johnson博士1、Winston Lay先生1、Tamkin Ahmadzada博士2、Richard Zelei先生1、Anthony Linton博士1、Elham Hosseini-Beheshti博士11澳大利亚悉尼Concord的石棉和粉尘疾病研究所，2澳大利亚悉尼Camperdown的悉尼大学PF01.53 小鼠血浆 miRNAs 的昼夜节律变化Dohi Eisuke 博士11日本小平市国立神经学和精神病学中心PF01.54 探索外泌体亚群在生物标志物发现中的应用首席执行官，研究与开发部 Se-Hwan Paek1，副研究工程师 Taekmin Kim1，研究工程师 Dayeon Choi1，研究主任 Seung-Cheol Choi11SOL 生物公司，韩国首尔PF01.55 Radiation-induced miR-126-5p in extracellular vesicles suppresses cholesterol efflux by targeting ABCG5Min Eon Park1, You Yeon Choi1, Ki Moon Seong11Korea Institute of Radiological & Medical Sciences (KIRAMS), Seoul, KOREAPF01.56 筛选辐射诱导的 AKR/J 白血病小鼠模型中的外泌体 miRNAMin Eon Park1, You Yeon Choi1, Ki Moon Seong11Korea Institute of Radiological & Medical Sciences (KIRAMS), seoul, KOREAPF01.57 使用 Oni 纳米成像仪增强细胞外囊泡的表征：侏儒症细胞来源细胞外囊泡分离技术的比较分析Diane Nelson1、Mahir Mohiuddin、研究员 Jennifer Jones、Jeffrey Fagan、Jerilyn Izac、Sumeet Poudel、Bryant Nelson、Lili Wang1美国，NistAPF01.58 利用细胞外囊泡实现跨中枢神经系统屏障的精确药物输送Marie Pauwels 博士1、Nele Plehiers 博士1、Charysse Vandendriessche 博士1、Matthew JA Wood 教授2、Lien Van Hoecke 博士1、Roosmarijn E Vandenbroucke 教授11比利时根特（兹韦纳尔德）VIB-UGent、英国牛津大学2PF01.Geetika Raizada 女士、Benjamin Brunel 博士、Joan Guillouzouic 先生、Eric Le Ferrec 博士、Eric Lesniewska 博士、Wilfrid Boireau 博士、Céline Elie-Caille 博士。Céline Elie-Caille1FEMTO-ST Institute, CNRS, University of Franche-Comté, Besançon, FrancePF01.61 Label-free biomarker detection in advanced colorectal cancer plasma exosomesDr. 4）小结我们的研究结果表明，CD3 靶向外泌体可以生成并维持 CAR-T 细胞，这是一种治疗恶性肿瘤的潜在现成免疫疗法。研究生 Jihoon Han、研究生 Yeongha Hwang赞助商展览、海报展示和午餐（周五），展览厅-14-15 号，2024 年 5 月 10 日，中午 12:00 - 下午 2:001）引言癌症疫苗通过诱导全身性肿瘤特异性免疫反应，为癌症免疫疗法提供了一条前景广阔的途径。肿瘤细胞外囊泡（TEV）是一种天然富含肿瘤抗原的纳米颗粒，因此对疫苗开发很有吸引力。然而，它们来自原始肿瘤细胞的固有恶性特性限制了它们的直接治疗用途。本研究介绍了一种将 TEV 重新用作强效个性化癌症疫苗的新方法。我们的研究表明，抑制 YAP 和自噬不仅能减少 TEV 的恶性相关特性，还能通过丰富其肿瘤抗原和佐剂的载量来增强其免疫原性。细胞上清液经过一系列离心步骤去除微囊和细胞碎片。随后，将得到的上清液通过一个 0.22-µm 孔径的过滤器进行过滤，使用过滤器切向流过滤 PBS，然后在 150,000 × g 下离心 2 小时。使用低温透射电子显微镜观察 TEV。体内肿瘤模型通过将 E.G7-OVA 肿瘤细胞皮下注射到 C57BL/6 小鼠的左侧腹部，建立了治疗性疫苗接种模型、预防性疫苗接种模型、肿瘤复发模型和个性化癌症疫苗模型。接种五天后，在肿瘤接种部位附近或对侧部位皮下注射 TEV。它们能产生肿瘤特异性和持久的免疫记忆。) 小结/结论总之，我们开发出了一种改进型 TEVs 作为癌症疫苗，它能引起强大的肿瘤特异性反应，并在预防和手术后环境中有效抑制癌症生长。杨璐、邱松波、范震教授赞助展览、海报展和午餐（周五），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 10 日，中午 12:00 - 下午 2:00 使用疫苗消灭传染病是人类历史上最伟大的成就之一；然而，使用疫苗预防或治疗人类癌症的梦想在很大程度上仍未实现。我们假设，如果能将传染性病毒相关抗原特异性地传递到目标肿瘤，并且病毒抗原随后能与主要组织相容性复合体 I 类（MHC-I）复合呈现在癌细胞表面，那么通过自然病毒感染或接种疫苗获得的原有抗病毒免疫力就能被重新定向到癌细胞上。为了验证这一假设，我们开发了肿瘤靶向细胞外囊泡 (EVs)，用于向肿瘤递送与 MHC-I 兼容的多肽。我们设计了一种小鼠细胞模型（C57BL/6背景），以表达针对人类表皮生长因子受体-2（HER2）的细胞膜锚定单链可变片段（scFv）抗体。工程细胞释放的 EV 可特异性靶向表达 HER2 的癌细胞。在我们的概念验证实验中，H2-Kb兼容的卵清蛋白（OVA）多肽（257-264）SIINFEKL以H2-Kb受限的方式通过直接脉冲载入EVs。用加载了 SIINFEKL 的 EVs 处理细胞后，在几种 C57BL/6 背景的小鼠肿瘤细胞系（MC38 小鼠结肠肿瘤细胞和 E0771 小鼠乳腺肿瘤细胞）中检测到了 SIINFEKL 的呈现，但在 Balb/c 背景的小鼠肿瘤细胞（4T1 小鼠乳腺肿瘤细胞）中没有检测到。含有 SIINFEKL 的 EVs 能激活 OT-1 小鼠的 T 细胞，这些小鼠表达的转基因 T 细胞受体能识别 8-mer SIINFEKL 肽。相比之下，加载了SIINFEKL的EVs不能激活C57BL/6野生型小鼠的幼稚T细胞。未添加 SIINFEKL 肽的对照 EVs 也不能激活 OT-1 T 细胞。OT-1 T细胞与MC38/HER2细胞共培养后，只有在用SIINFEKL负载的EVs处理后才会诱导细胞凋亡（用annexin-v凋亡流式细胞仪检测）。 最后，基于合成生物学的BEVs-BC在卵巢切除（OVX）小鼠模型中显著预防了OP。总之，我们利用合成生物学技术一步构建了具有骨靶向和骨形成双重作用的 BEVs-BC，为治疗 OP 提供了一种有效的策略，并具有巨大的产业化潜力。Rostyslav Horbay, Daniel Panting, Michaela van der Meerwe, Maria Dimancheva, Dr Eric LaCasse, Dylan Burger, Dr Shawn Beug1Apoptosis Research Centre, Children's Hospital of Eastern Ontario Research Institute and University of Ottawa, 401 Smyth Rd, Ottawa, Ontario、K1H 8L1, Canada, Ottawa, Canada, 2Kidney Research Centre, The Ottawa Hospital Research Institute and University of Ottawa, 401 Smyth Rd, Ottawa, ON, K1H 8L1, Canada, Sponsor Exhibition, Poster Session and Lunch (Friday), Exhibit hall-Doors 14-15, May 10, 2024, 12：00 PM - 2:00 PM介绍。我们已经证明，SMAC 模仿剂（SMCs）是一类拮抗凋亡抑制蛋白家族成员的药物，可与免疫配体和免疫刺激剂协同作用，根除肿瘤。我们发现，这种协同作用可归因于 SMC 介导的 30-150 nm 小细胞外囊泡（sEV）的释放，这些囊泡携带来自免疫细胞和癌细胞的炎性细胞因子。我们采用细胞培养方法来解读 SMC 诱导的 sEVs 对癌细胞和免疫细胞的影响，包括活力测定、直接培养和跨孔共培养条件、ELISA 和流式细胞术。使用 SMC 会使免疫细胞的 sEV 释放率增加 5 倍（t 检验，P<0.05，n = 4），但不会显著改变癌细胞的分泌率）。对免疫细胞进行 SMC 处理会导致促炎细胞因子被包装到 sEVs 中，尤其是 TNFα。将 TNFα 包入免疫细胞的 sEV 是一个依赖于 ESCRT 的过程，通过 Wester 印迹检测 Syntenin 和 Alix 的存在反映了这一点，但肿瘤细胞衍生的 sEV 却缺少这些关键的 ESCRT 蛋白。免疫细胞和癌细胞衍生的 sEV 对外泌体标志物 Flotillin-1 和 HSC70 均呈阳性。由此产生的含 TNFα 的免疫细胞衍生 sEV 在有 SMC 存在的情况下可诱导癌细胞死亡（方差分析，n = 4，P<0.0001）。有趣的是，Syntenin 靶向药物增加了 SMC 诱导癌细胞死亡的效果（仅 SMC 为 67%，而联合药物为 14%，n = 2），但没有增加免疫细胞的死亡。此外，SMC刺激的外泌体释放导致免疫细胞衍生的sEVs中其他炎症介质的包装，这可将巨噬细胞极化为促炎的M1亚群（从基线水平的4%到15%，n = 2）。最后，我们观察到 RIG-I 包装在来自 SMC 处理过的癌细胞的肿瘤衍生 sEV 中。这一发现表明，SMC 可刺激先天性免疫细胞处于促炎状态。我们的数据表明，SMC 处理可增加免疫细胞释放携带细胞因子的 sEV，从而以有利于治疗的方式消灭癌细胞。Lucas Walther3, Jacky Goetz1, Karola Rittner2, Dr Vincent Hyenne11INSERM U1109, Strasbourg, France, 2Transgene SA, Illkirch-Graffenstaden, France, 3INSERM U1109 and Transgene SA, Strasbourg, France赞助商展览、海报展示和午餐（周五），展厅-14-15，2024 年 5 月 10 日，中午 12:00 - 下午 2:00简介：以病毒为基础的疗法在各种病症中具有广阔的应用前景，尤其是在癌症中，病毒可用作溶瘤或免疫治疗载体。我们假设，感染了治疗性病毒的免疫细胞会释放具有抗肿瘤免疫调节潜力的修饰性 EVs。为了验证这一假设，我们研究了武装痘病毒如何影响人PBMCs的EVs分泌，以及这些EVs是否能提高或介导此类病毒在体内的抗肿瘤潜力：由于痘病毒在结构上和功能上与细胞外囊泡（EVs）极为相似，我们首先比较了六种EVs分离方法，发现只有0.1um过滤法（结合SEC或超速离心法）能够可靠地将痘病毒从治疗病毒感染的免疫细胞（PBMCs）分泌的小EVs（通过NTA、冷冻EM、细胞学和质谱法表征）中分离出来。我们用这种方法将它们与EEVs或病毒样颗粒区分开来，并研究EVs的含量和功能：结果：我们观察到，病毒感染 3 种不同毒株的痘病毒会显著刺激小 EV 分泌，此外还会改变它们的含量。特别是，受感染细胞分泌的EV中富含肌动蛋白相关蛋白，这表明肌动蛋白细胞骨架可能有助于病毒诱导的EV分泌。 总之，我们的研究结果为了解肠道益生菌的作用机制提供了新的视角，并提出了一种基于水果饮食来维持肠道屏障功能的新治疗策略。Deborah Brandt Almeida 博士、Jenicer Kazumi Umada Yokoyama Yasunaka 女士、Verônica Feijoli Santiago 博士、Simon Ngao Mule 博士、Paula Menegheti 女士、Giuseppe Palmisano 博士、Ana Claudia Torrecilhas 博士、Mauro Cortez 博士赞助商展览、海报展和午餐（周五），展厅-14-15 号厅，2024 年 5 月 10 日，12：00 PM - 2：00 PMINTRODUCTION：简介：亚马逊利什曼病通过操纵宿主的免疫反应来生存，并引发利什曼病。非原虫释放细胞外囊泡 (Evs)，参与诱导受感染巨噬细胞的 CD200、抑制细胞活化的配体以及诱导性一氧化氮合酶/一氧化氮（iNOS/NO）机制。目的：我们探讨了这些结构的内容，以及不同的 pH 值条件或 Ca2+ 抑制剂是否会影响天冬酶素-Evs 的释放。材料与方法：将利什曼病母细胞在轴突型母细胞培养基（AA）中培养 1 小时，使其水泡化，上清液经 0.45 毫米无菌细胞过滤器过滤，浓缩后用于不同的检测：蛋白质组学检测（纳米 LC-MS/MS）。原虫也可在不同 pH 值的 PBS、RPMI 或 AA 中培养。在免疫沉淀/Western 印迹（IP/WB）或 SDS-PAGE 银染色和使用利什曼病-Evs 多克隆抗体进行 WB 分析后，进行 CD200 诱导的 BMM 刺激试验。 还包括纳米粒子跟踪分析（NTA），以验证 Evs 的纯度和数量。 结果：蛋白质组学分析表明，各重复序列共有 25 个蛋白质，其中重复序列 1 共有 56 个，重复序列 2 共有 63 个。大多数共有蛋白质被认为具有催化活性（分子功能），并定位在细胞核中（细胞成分分析）。在不同培养基中培养母细胞时，当 pH 值高于 5.2 时，CD200 的诱导会受到影响。在不同 pH 值（4.5、5.2、7.0 和 8.0）下培养的母细胞在 pH 值较低时（4.5）显示 Evs 释放受到影响，而在 pH 值较高时（7 或 8）影响更为显著。关于 Ca2+ 的作用，当加入 EDTA、EGTA 和 BAPTA-AM 抑制剂时，Evs 的数量和轮廓大小都会受到影响。在这三种情况下，NTA 分析的 Evs 数量都较低，而 EDTA 的影响更为显著。此外，在对照组中，Evs 的分布更集中，从 100 纳米到 200 纳米不等，但随着处理方法的不同，Evs 的分布也发生了变化，这表明 Ca2+ 在母细胞-Evs 释放过程中起着至关重要的作用。结论：pH 和 Ca2+ 对母体-Evs 的释放至关重要，突出了在研究寄生虫 Evs 时必须考虑的独特因素。2Biomedicine Research Core Facility, Graduate School of Medicine, Juntendo University, Bunkyo-ku, Japan, 3Faculty of Medical Science, Urayasu, Japan赞助展览、海报展和午餐（周五），展览厅-14-15 号，2024 年 5 月 10 日 12：1) 引言 细胞外囊泡（EVs）是在微生物感染时分泌的，在调节免疫和感染反应中起着至关重要的作用。败血症是一种危及生命的多器官功能障碍，由对感染的全身性炎症反应失调引起，给治疗干预带来了巨大挑战。尽管进行了大量试验，但仍无法取得令人满意的治疗效果。我们之前的研究揭示了 LL-37（一种人类猫肝菌素宿主防御肽）在提高接受盲肠结扎和穿刺（CLP）的败血症小鼠存活率方面的潜力。在本研究中，我们探讨了 LL-37 对中性粒细胞（抵抗病原体的主要防御者）的调节能力，重点是其增强抗炎 EVs 分泌和促进细胞运动的能力。2）方法通过流式细胞术、干涉显微镜和 Western 印迹法分析从 CLP 小鼠腹腔渗出液中分离出的 EVs 和 LL-37 刺激的小鼠骨髓中性粒细胞上清液。通过将 EVs 与从小鼠盲肠中分离出来的大肠杆菌培养，评估了 EVs 的抗菌功效。此外，在给中性粒细胞衍生的 EVs 治疗中毒性胃肠炎小鼠后，使用苏木精和伊红染色法对组织样本进行了组织学评估。中性粒细胞通过电穿孔转染了编码EGFP的质粒，并使用格子光片显微镜通过具有延时功能的三维成像监测其运动情况。 这包括被鉴定为应激反应蛋白的损伤相关分子模式（DAMPs），这表明运动诱发应激后会启动免疫功能：我们的研究结果表明，中等强度的运动可作为一种佐剂，通过小的EVs分泌免疫蛋白和DAMPs，引起先天性免疫系统的急性积极挑战。这就提供了一种机制，通过定期锻炼来增强机体的免疫监视，有氧健身者的反应更强就表明了这一点。李黔北博士、郑磊教授赞助展览、海报展和午餐（周五），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 10 日，中午 12:00 - 下午 2:00 肥胖与肠道微生物群失衡有关，其特征是白色脂肪过度积累和脂质代谢紊乱。Akkermansia muciniphila（Akk）是一种常见的肠道共生菌，已被证明能减少脂肪储存并将白色脂肪细胞转化为棕色表型。本研究强调了 Akk 在高脂饮食（HFD）小鼠模型中改善葡萄糖不耐受、高脂血症、内毒素血症、肝脏脂肪变性和肥胖相关精神障碍的作用。研究重点尤其放在A. muciniphila的膜蛋白Amuc_1100上，该蛋白在分泌的细胞外囊泡中被发现。Amuc_1100 通过 AC3/PKA/HSL 通路促进了 3T3-L1 前脂肪细胞的脂肪分解和白色脂肪细胞的棕色化。这些发现为了解 Akk 及其成分在治疗肥胖症和相关代谢紊乱方面的治疗潜力提供了新的视角。Msc Johanna Matilainen, Viivi Berg, Maija Vaittinen, Janne Tampio, Ville Männistö, Jussi Pihlajamäki, Tanja Turunen, Marjo Malinen, Pirjo Käkelä, Dorota Kaminska, Veera Luukkonen, Anne-Mari Mustonen、Uma Thanigai-Arasu、Kristiina Huttunen、Reijo Käkelä、Sanna Sihvo、Petteri Nieminen、Kirsi Rilla赞助商展览、海报展和午餐（周五），展厅-14-15 号门，2024 年 5 月 10 日 12：简介：肥胖症与慢性低度炎症和脂肪组织（AT）炎症细胞因子分泌失调有关。最近的研究表明，脂肪组织也分泌细胞外囊泡 (EV)，EV 可对炎症刺激做出快速反应。研究表明，抑制钙蛋白酶不仅能在小鼠体内的血管内皮中发挥抗炎和纤维化作用，还能在体外减少某些细胞类型的EV分泌。然而，钙蛋白酶抑制对人类血管内皮细胞功能或脂肪细胞 EV 分泌的影响尚未得到研究。在我们的实验中，我们旨在研究钙蛋白酶对EV介导的交流和人类脂肪细胞功能的影响，从而揭示治疗代谢性疾病的潜在可能性。用标准超速离心法分离出EVs，并通过纳米粒子跟踪分析、电子显微镜和质谱法进行研究。结果：在我们的研究中，钙泊平对成熟的SGBS细胞有抗炎作用，同时减少了EV的分泌。此外，我们的初步研究结果表明，钙泊平还能降低体外培养的患者AT的EV分泌。令人惊讶的是，尽管钙泊平具有抗炎作用，但其在 SGBS 细胞中的表达和分泌却出现了下调，这表明胰岛素敏感性受到了抑制。进一步的分析表明，钙泊平通过下调 PI3K/Akt 通路改变了胰岛素信号传导，导致 Glut4 葡萄糖转运体的贩运中断。对EV和肝细胞条件培养基处理的质谱分析将揭示钙泊汀对EV蛋白质组和肝细胞介导的反应的影响。 摘要/结论：据我们所知，这是第一项彻底调查钙泊汀对人类脂肪细胞功能和代谢的影响的研究，特别强调了EV分泌和EV介导的通讯。我们的研究结果表明，钙泊平能减少 EV 分泌，抑制人类脂肪细胞的炎症反应，但不能改善葡萄糖耐量，这与之前的小鼠体内研究相反。因此，我们的研究结果为钙蛋白在人类脂肪转化酶中的作用引入了新的方面。 小鼠出生后第 1 天开始接受治疗，并与药物（IV-药物（n = 11）、IN-药物（n = 14））和健康对照组（n = 12）进行比较。所有小鼠在出生后第 14 天安乐死，以进行脑组织学分析：结果：LPS/过氧损伤减少了静脉注射组（p = 0.0155）和鼻内注射组（p = 0.0307）大脑皮层中的 IBA-1 阳性细胞。静脉注射队列中齿状回的 TUNEL 阳性细胞有所增加（p = 0.0155）。与 LPS/过氧损伤相比，IV-hUC-MSCEVs 治疗可显著减少 TUNEL 阳性细胞（p = 0.0155）。在静脉注射和静脉注射ihAECEVs和hUC-MSCEVs后，大脑皮层的TUNEL阳性细胞减少，但未达到统计学意义：结论：产前炎症和产后高氧后可观察到区域特异性脑损伤。静脉注射和静脉注射ihAEC和UC-MCS EVs不会诱发或加重脑损伤，这表明在1日龄小鼠体内接触EVs是安全的。Eliana Lara Barba小姐、Yesenia Flores Elías小姐、Felipe Bustamente Barrientos先生、María Jesús Araya小姐、Yeimi Herrera Luna小姐、Noymar Luque Campos小姐、Ana María Vega Letter女士、Patricia Luz Crawford女士介绍性发言和口头报告：OF13 干细胞 EV 疗法，2024 年 5 月 10 日下午 4:00 - 5:35 第 1 次全体会议介绍：间充质干细胞是多能的成纤维细胞样细胞，具有多种生物功能，包括免疫抑制活性，因此对自身免疫性疾病的治疗具有吸引力。间充质干细胞的免疫调节活性主要由旁分泌因子介导。然而，这些细胞释放的细胞外小泡（sEVs）已被证实是间充质干细胞发挥其生物效应的主要机制。我们对人脐带间充质干细胞的研究表明，糖酵解代谢重编程可通过诱导T调节细胞（Treg），显著提高间充质干细胞对促炎性T细胞（Th1、Th17）的免疫调节能力。因此，在本研究中，我们评估了糖酵解和非糖酵解 UC-MSCs 的 sEV 在体外和体内免疫抑制特性中的作用：首先，我们获得了糖酵解或非糖酵解间充质干细胞分泌物的不同部分，包括它们的sEVs，通过NTA和FACS对特定的sEV标记进行了表征，并评估了它们对PBMCs的免疫抑制活性。此外，还评估了促炎 T 细胞和 T 调节细胞的诱导情况。此外，还通过 FACS 和共聚焦显微镜技术评估了 sEV 在 T 细胞中的内化情况。此外，我们还评估了 sEV 对有或无 sEV 培养的记忆 T-CD4 细胞的影响。我们用 FACS 评估了记忆 T-CD4 细胞中促炎细胞和抗炎细胞的表型，并用 ELISA 评估了 IL-10 的产生。最后，我们在延迟型超敏反应小鼠模型中评估了 sEVs 在体内的免疫抑制活性：结果：我们发现间充质干细胞糖酵解条件培养基及其 sEVs 在体外能显著降低 CD4+T 细胞的增殖，减少 Th1 细胞，并诱导 Treg 细胞。我们的内化实验表明，sEVs 能被整合到记忆 T-CD4+ 细胞中，降低 Th1 和 Th17 细胞的比例，而对 Treg 细胞的比例没有影响，同时 IL-10 的产生增加。体内试验表明，糖酵解间充质干细胞能显著降低炎症反应，减少促炎症T细胞，尤其是Th1细胞：结论：糖化间充质干细胞-sEVs 可以内化并特异性调节活化的 T 细胞，调节 T 细胞的增殖频率和表型，在体外和体内对 T 细胞表现出免疫调节作用，证明了这种免疫抑制工具的潜力。Dimitrios Kapogiannis, Maja Mustapic, Carlos Nogueras-Ortiz, Apostolos Manolopoulos, Francheska Delgado-Peraza, Pamela Yao, Krishna Pucha, Mark A Espeland, Luigi Ferrucci, Stephen R. Rapp, Susan M. Resnick介绍性发言和口头报告：OF14 脑疾病生物标志物，尤里卡，2024 年 5 月 10 日，下午 4:00 - 5:35简介：APOE ε4等位基因是晚发性阿尔茨海默病（AD）最可靠的遗传风险因素。然而，许多ε4携带者一直存活到老年而没有认知障碍。我们使用神经元富集胞外囊泡（NEV）生物标志物来确定预测存在e4（APOE ε4 "逃逸者"）或具有一般AD风险的ε3/ε3个体80岁后认知健康状况的生物因素：我们从676名女性健康倡议（WHI）/长寿研究（LLS）的ε4或ε3/ε3女性参与者中分离出了NEVs，这些参与者在基线和13-17年后提供了血液样本，并最终在80岁之前、80岁之后出现认知障碍（轻度认知障碍或痴呆）或保持无障碍。 Sanskriti Rai, Mr. Rishabh Singh, Dr. Prahalad Singh Bharti, Dr. Roopa Rajan, Dr. Saroj KumarIntroductory Talk and Oral Session：OF14 脑疾病生物标志物，尤里卡，2024 年 5 月 10 日，下午 4:00 - 5:35简介：微RNA（miRNA）是一类已知可自由循环或包裹在小细胞外囊泡（sEVs）中的小型非编码RNA。来自血浆源性小细胞外囊泡（PsEVs）和全血浆的miRNA是早期检测、预后和疾病监测的微创潜在生物标志物；然而，两者的miRNA表达存在异质性。本研究系统比较了 PsEVs 和血浆中 miRNA 的诊断潜力，以满足对帕金森病精确分子诊断的需求：在获得书面知情同意（伦理编号：IECPG-766/30.11.2022）后，招募 60 名受试者[帕金森病、年龄匹配（AMC）和年轻对照组（YC）各 20 名]。采用化学沉淀法分离 PsEVs，并通过透射电子显微镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）、sEVs 标记（CD-9 和 Flotillin）、Calnexin 和神经元标记（CD171）的 Western 印迹进行表征。小 RNA 测序采用 Illumina 单端测序技术，miEAA 2.0 软件用于 miRNA 富集分析和注释。在血浆和 PsEVs 中进行了定量 PCR 验证：结果：在血浆和 PsEVs 中分别鉴定出 336 个和 432 个 PsEVs 特异性 miRNA。miEAA分析表明，PsEVs具有CSF特异性miRNAs，但在血浆中没有观察到。两组均含有神经特异性 miRNA。在 245 个 miRNA 中，根据差异读数和下游分析，选出了调控涉及α-突触核蛋白代谢、神经炎症、线粒体功能和突触组装的基因的 miR-339-3p 和 miR-23b-3p。在 PsEVs 中，miR-339-3p 的表达明显上调（Log2FC = 1.6829，p = 0.0005），而在血浆中则下调（Log2FC =-1.2304）。8086；灵敏度 = 93.75%，特异度 = 68.75%；p = 0.0029）和 PsEVs 中（AUC = 0.7278；灵敏度 = 84.62%，特异度 = 69.23%；p = 0.0483）的诊断准确性更高：这是首次直接评估全血浆和PsEVs中的miRNA谱，以寻找帕金森病的生物标记物靶点。我们的研究结果表明，从 PsEVs 提取的 miRNA 的总体情况与整个血浆相当。然而，有些 miRNA 的表达却与之相反。这些发现强调了探索血浆和PsEVs对帕金森病综合诊断的重要性：关键词：SEVs、血浆、帕金森病、生物标志物、miRNAs博士吕瑶瑶、研究助理Nathalie Majeau、博士Gabriel Lamothe、研究助理Joel Rousseau、Jacques-P Tremblay教授介绍会和口头报告：OF15工程EV，105-106室，2024年5月10日，下午4:00 - 5:20简介：治疗性基因组编辑有可能通过直接纠正目标病理组织和细胞中的基因突变来治疗疾病。CRISPR/Cas9系统的最新进展为基因编辑工具带来了突破性进展，因为它具有多功能性和高效性。然而，将其安全有效地分配到患者的靶器官是一个主要障碍。我们的研究旨在利用蛋白质棕榈酰化修饰将CRISPR/Cas9核糖核蛋白封装到细胞外囊泡中，棕榈酰化修饰是在蛋白质的半胱氨酸残基上可逆地添加脂肪酸。这是一种重要的翻译后修饰，可调节蛋白质的功能，包括膜定位、蛋白质稳定性、细胞内转运、蛋白质相互作用和蛋白质构象。方法：我们从棕榈酰化底物蛋白的N端获得了不同的多肽序列，这是催化棕榈酰化的酶--棕榈酰基转移酶的理想底物。我们首先将编码这些肽的寡核苷酸与 eGFP 和 SpCas9 基因的 5'end 融合。这促进了棕榈酰化，并将所产生的蛋白质封装到 EV 中。流式细胞术和 Western 印迹法验证了棕榈酰化 eGFP 和 SpCas9 的封装效率。结果：棕榈酰化修饰使87.2%的eGFP进入EVs。N端棕榈酰化修饰不会对SpCas9的活性产生负面影响，并且能成功地被包裹到EVs中。 结果 生物物理学研究揭示了各种宿主防御肽（HDPs）所采用的不同机制。这些机制包括囊泡穿透、溶解作用和去除蛋白质电晕。生物物理研究根据其机制将宿主防御肽（HDPs）分为八类。LL37 和 Lassioglossin 能有效清除表面蛋白质。摘要这些见解概述了宿主防御肽与EVs的表面相互作用，使我们获得了分子水平相互作用的广阔视角，这可能有助于用短HDPs定制EVs表面并用于生物工程：OF15工程EVs，105-106室，2024年5月10日，下午4:00 - 5:20简介：细胞外囊泡（EVs）具有巨大的药物输送潜力，但在不影响功能的前提下优化其膜渗透性仍面临挑战。本研究介绍了强渗控制（TC）方法，利用低渗溶液瞬时渗透EV膜，以实现高效的货物装载。研究人员对 TC 方法进行了评估，以装载多柔比星 (Dox)、不同大小的葡聚糖、单链 DNA (ssDNA) 和 miRNA-497 作为货物模型，评估装载效率。方法：使用 Exodisc 从 HEK 293T 和 A549 细胞中分离出 EV，从而实现高效分离和装载。低渗溶液用于瞬时渗透，促进货物（Dox、葡聚糖、ssDNA、miRNA-497）流入。与传统装载方法（如超声、挤压）的比较分析评估了效率、膜完整性和货物保留。动态光散射证实了低渗暴露后EV的膨胀和渗透性的增加，表明货物的成功吸收。经 TC 处理的 EV 保持了粒子数、蛋白质浓度和表面标记，保留了 EV 的特征。值得注意的是，与传统方法相比，miRNA-497 装载的 EV 在抑制肺癌细胞增殖方面表现出更强的疗效。这种方法在粒子保留和货物输送方面超越了传统方法，有望成为基于 EV 的创新治疗方法，有可能彻底改变生物医学应用中的靶向有效药物输送系统：OF16 癌症生物学，109-110 室，2024 年 5 月 10 日，下午 4:00 - 5:35 引言 癌细胞分泌大量小的胞外囊泡 (EVs)，使邻近细胞浸泡在以癌症为主的微环境中。癌症衍生的EVs（CDEVs）会诱导癌症邻近的正常上皮细胞发生前期恶变，这就是所谓的癌变过程。方法 通过超速离心法分离癌细胞和正常上皮细胞的EVs，并通过NTA、WB、TEM和ExoView进行鉴定。正常细胞分别用 CDEVs 和来自正常细胞的 EVs（NDEVs）处理。利用全基因组亚硫酸氢盐测序（WGBS）和RNA-seq证明了CDEVs诱导DNA甲基化重编程和EVs接受细胞的转录调控。此外，还通过 LC-MS 和总 RNA-seq 确定了 EVs 运输的货物。小鼠模型和临床样本的 IHC、RT-PCR 和 WB 被用来研究在 CDEV 诱导的 DNA 甲基化重编程中起作用的蛋白质。结果在这项研究中，我们发现正常上皮细胞的 CpG 岛和非 CG 位点的 DNA 甲基化模式被分离出的 CDEV 重编程，从而导致癌变。在逐渐癌变的过程中，肿瘤抑制基因的高甲基化和癌基因的低甲基化同时发生。GO和KEGG分析表明，DNA甲基化重编程过程中激活了多种促癌通路，包括PI3K-AKT、MAPK、Hippo、Rap1和cGMP-PKG。 学生廖彤，博士潘伟伦，教授郑磊，教授李波介绍性发言和口头报告：OS17癌症生物标志物，全体会议1，2024年5月11日，上午10:40 - 下午12:001)引言血液中的程序性细胞死亡配体-1（PD-L1）阳性细胞外囊泡（EVs）已成为预测癌症免疫疗法结果的一种有前途的候选物质。然而，由于PD-L1标记物在EV上的特异性和丰度各不相同，在血浆中的单细胞水平上同时分析PD-L1 EV群的蛋白质和RNA表达是必要的，也是临床应用的挑战。在这项研究中，我们提出了一种名为 sEV-PREDICT 的集成技术，它无需分离过程就能原位同时检测血浆 EV 中 PD-L1 蛋白和 mRNA 的表达。它由一个锚定有 PD-L1 合体的疏水性脂膜组成，亲水性内核包裹着 CRISPR-Cas13a 单元。因此，sEV-PREDICT 可以通过表面适配体识别 EV 上的 PD-L1 蛋白，同时通过膜融合将 CRISPR-Cas13a 单元送入 EV 内部，从而促进 PD-L1 mRNA 的检测。为了实现精确定量，sEV-PREDICT 采用了纳米流式细胞术，可以在单个 EV 层面精确测定血浆中 PD-L1 阳性 EV 的比例。该系统具有出色的检测性能，可在 2 小时内对血浆中的 PD-L1 阳性 EV 进行免离心分析，样品量要求低（5 µL）。在 21 种癌症类型的临床队列（n = 164）中，sEV-PREDICT 准确区分了晚期癌症患者和健康人，曲线下面积（AUC）为 0.970，显示了出色的临床诊断效果。此外，在机器学习算法的辅助下，sEV-PREDICT 还为根据不同癌症表型预测免疫疗法结果、临床分期鉴定和疗效监测提供了精确指标。)结论总之，sEV-PREDICT提供了一种简单、无需分离、高通量的方法，可在单体水平上分析PD-L1阳性EV，从而扩展了EV亚群的分析策略，为临床决策提供更准确的疾病信息：OS18 神经生物学，尤里卡，2024 年 5 月 11 日，上午 10:40 - 下午 12:00简介：我们之前发现了阿尔茨海默病（AD）中病理tau通过细胞外囊泡（EV）转移的新机制。因此，以EV分泌为靶点来缓解tau转移是一种很有希望的AD治疗方法。P2RX7 通过嘌呤能信号调节多囊体衍生的外泌体的微囊脱落或分泌。在本研究中，我们旨在研究消减P2rx7对体外小胶质细胞或星形胶质细胞EV分泌和tau转移的影响，以及对体内PS19 tauopathy小鼠认知功能和tau病理发展的影响：方法：培养C57BL/6（WT）和P2rx7-/-小鼠的小胶质细胞和星形胶质细胞，并与人tau（hTau）培养，然后分别通过纳米颗粒追踪和ELISA评估EV和EV相关tau的分泌。对9月龄的PS19:P2rx7-/-转基因小鼠进行了恐惧条件反射测试评估，并使用针对聚集tau（Alz50）或磷酸化tau（AT8）的免疫荧光和ELISA（总tau和pTau Ser396）对其脑组织进行了海马/皮层体积和tau病理学评估：结果：与WT组相比，P2rx7的缺失显著抑制了小胶质细胞和星形胶质细胞分泌的EVs，并抑制了吞噬hTau的小胶质细胞和星形胶质细胞分泌的EVs中的hTau水平。PS19:P2rx7-/-小鼠的情境记忆和诱导记忆均有显著改善。与PS19小鼠相比，这些结果与tau病理学的显著降低相一致，表现为皮质和海马体积的保留、海马区ALZ50和AT8的降低以及Sarkosyl-不溶性组分中pTau Ser396的降低：我们的研究表明，P2RX7调节EV介导的tau从小胶质细胞或星形胶质细胞转移，而P2rx7的缺失可改善PS19小鼠的认知功能障碍和tau病理学发展，这表明P2RX7是AD的潜在治疗靶点。 于洋博士、肖文军博士、李志刚副教授介绍性演讲和口头报告：OS18 神经生物学，尤里卡，2024 年 5 月 11 日，上午 10:40 - 下午 12:00简介：阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，占全球痴呆病例的70%，对老年人的健康构成严重威胁。以往的研究强调，淀粉样蛋白-β的沉积和聚集是阿尔茨海默病大脑的主要病理改变。β-分泌酶1（BACE1）活化介导的淀粉样蛋白生成处理是这一过程的关键步骤。然而，淀粉样蛋白-β在AD大脑中持续积累的机制仍不清楚。循环中的细胞外囊泡（EVs）是器官之间的沟通媒介，可能在AD的发展过程中起着关键作用。然而，AD患者体内的循环EV是否能促进大脑中淀粉样蛋白-β的生成和聚集尚未得到阐明：我们采用大小排阻色谱法和随后的超速离心法分离野生型小鼠和APP/PS1（AD模型）小鼠（WTEVs和APPEVs）的血浆EVs。使用纳米流式细胞术、电子显微镜和 Western Blot 确认了 EV 的纯度。通过质谱蛋白质组学和生物信息学进行差异蛋白质分析，确定了 EVs 中的独特蛋白质。通过 Western 印迹和共聚焦显微镜评估了 JAK2-STAT1-BACE1 信号通路的激活情况。静脉注射后，DiR标记的EVs在各器官中的分布情况可视化。通过脑组织切片和荧光染色分析淀粉样β斑块：结果：与 WTEVs 相比，APPEVs 的浓度更高。这些 APPEVs 激活了神经元中的 JAK2-STAT1 信号通路，导致 BACE1 的表达和活性上调。这种级联反应促进了脂质筏中淀粉样前体蛋白（APP）β的裂解，诱导了大量淀粉样β的生成。蛋白质组分析表明，APPEVs 中的补体 C1q 是激活 JAK2-STAT1-BACE1 通路的关键蛋白。此外，体内实验表明，静脉注射的APPEVs可穿过血脑屏障，激活神经元中的JAK2-STAT1-BACE1信号传导，增强大脑中淀粉样蛋白-β的生成和聚集。在体外和体内实验中，抑制C1q可减轻这些影响：结论：在AD进展过程中，含有补体C1q的循环EV被输送到神经元，激活了神经元的JAK2-STAT1信号通路。这种激活上调了 BACE1 的表达，随后增强了脂质筏中 APP 的β-清除。张正荣博士、于凯文博士、包汉梅博士、迈克尔-德图尔博士、克拉拉-斯科尔斯女士、尤洋博士、池津诚子博士、丹尼斯-迪克森博士、韩先林博士、彭军民博士、池津恒也博士介绍性发言和口头报告：OS18 神经生物学，尤里卡，2024 年 5 月 11 日，上午 10:40 - 下午 12:00简介：细胞外囊泡（EV）在阿尔茨海默病（AD）细胞间的病理性蛋白质转移中发挥着至关重要的作用。虽然载脂蛋白E（APOE）ε4等位基因是与晚发性阿尔茨海默病密切相关的遗传风险因素，但它对阿尔茨海默病中EV货物组成的影响在很大程度上仍然未知。本研究的目的是根据APOE基因型（APOE3/3与APOE4/4）对脑源性细胞外囊泡（BDEV）进行全面的脂质组学和蛋白质组学分析：方法：从梅奥诊所脑库获取APOE3/3（n = 20）或APOE4/4（n = 20）型AD患者的额叶皮质组织样本。用不连续蔗糖梯度超速离心法从脑组织中分离出EV，并用透射电子显微镜（TEM）和纳米粒子跟踪分析（NTA）进行检测。对样本进行了多维质谱测试，以进行枪式脂质体分析和基于数据独立获取（DIA）的液相色谱-质谱（LC-MS）蛋白质组学分析：通过 TEM 和 NTA 分析，APOE4/4 和 APOE3/3 BDEV 的大小分布和形态无明显差异。我们在 BDEV 脂质组中发现了 17 种脂质类别和 173 种不同的脂质分子。与 APOE3/3 EV 相比，APOE4/4 EV 表现出亚油酸（18:2）和二氢-γ-亚麻酸（20:3）（促炎介质花生四烯酸（20:4）的前体）水平的增加，这与 Braak 阶段显著相关。DIA LC-MS 鉴定出了 4,000 多种独特的蛋白质。与APOE3/3女性相比，APOE4/4女性的BDEV富集于异常脂肪酸或脂蛋白转运以及小胶质细胞和星形胶质细胞的细胞类型特异性；而与APOE3/3男性相比，APOE4/4男性的BDEV富集于神经递质调节以及星形胶质细胞和神经元。 Bertrand Czarny赞助展览、海报展和午餐（周六），2024 年 5 月 11 日 12:00 - 2:00 PMExosomes 是一种细胞外膜囊泡 (EVs)，由大多数真核细胞的质膜产生，目前正在深入研究其在医学中的实际用途。迄今为止，对细菌 EVs 的研究大多集中在可从革兰氏阴性细菌中提取的外膜囊泡 (OMVs)。这种外膜囊泡主要含有外膜成分，包括内毒素（脂多糖）和主要由周质子空间成分组成的货物。由于 OMV 可诱导保护性免疫反应，因此引起了疫苗行业的极大兴趣，并被用作预防侵袭性脑膜炎球菌感染的抗原。革兰氏阳性细菌分泌的 EVs 来自质膜，这种所谓 "漂白 "的启动机制仍不清楚。据报道，一些致病性革兰氏阳性细菌（包括 A 群链球菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌（Pn））会产生细菌 EVs（BEVs），而使用革兰氏阳性细菌分泌的外泌体的一个优点是不含内毒素，这与革兰氏阴性细菌分泌的 OMVs 不同。BEVs 难以分离和表征，因此其研究和治疗用途具有挑战性，尤其是在未来的临床试验中。为了实现疫苗生产所需的 BEVs 大规模生产，我们建议通过物理过程直接从细菌中生产 BEVs，以获得细菌胞外囊泡模拟物（BEVMs）。这种方法还允许我们混合具有不同毒力特性的不同囊膜血清型的细菌。因此，与传统方法不同的是，加入大量的 BEVs 应该是有可能的，这些 BEVs 可以保护人群中流行的所有肺炎球菌--并导致疾病。这项研究还评估了不同菌株的交叉保护，结果令人鼓舞。总之，BEVs 或其模拟物在疫苗开发方面具有巨大潜力，有可能为肺炎链球菌提供更好的保护。Dinesh Kesavan 博士赞助展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号展厅，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00 肺炎链球菌是人类侵袭性和非侵袭性传染病的常见病因，在全球发病率很高，与重大疾病和死亡有关，尤其是儿童和老年人。虽然肺炎球菌可在呼吸系统中持续存在，但特定人群比其他人更容易患上肺炎球菌疾病。肺炎球菌疾病，包括肺炎、脑膜炎和菌血症，可引起急性中耳炎或鼻窦炎等侵袭性和非侵袭性疾病。接种肺炎球菌疫苗可成功预防由肺炎双球菌引起的侵袭性感染。肺炎双球菌包括 90 多种血清型，每种血清型都具有独特的抗原特性和炎症反应。从流行病学的角度来看，全球致病肺炎球菌血清型的流行率存在差异。目前有两种肺炎球菌疫苗：荚膜多糖疫苗（PPSV23）和结合疫苗（PCV13）。这些疫苗只能预防 100 种已知荚膜中的 23 种。然而，它们也存在一些问题，包括由于肺炎球菌胶囊的快速转换和重组，非疫苗血清型的发生率较高。因此，我们必须立即开发出能够预防多种血清型的新型疫苗。肺炎球菌囊泡作为治疗肺炎球菌感染的新型候选疫苗潜力巨大。这些囊泡包括来自细胞膜的多种抗原成分，与活生物体相比具有较低的致病性。最近的研究表明，以肺炎球菌囊泡为基础的疫苗接种可以引起有效的免疫反应，而不会产生不良的细胞毒性效应。在这项研究中，我们从四种血清型的肺炎双球菌中分离出了细菌EVs（BEVs）和细菌胞外囊泡模拟物（BEVMs），并研究了它们对各种免疫细胞的免疫反应。研究还涉及将几种血清型的 BEVs 和 BEVMs 结合起来，以确定它们对免疫细胞反应的影响。不同细胞因子和趋化因子的蛋白质水平和基因表达之间的关系各不相同。 显微 CT 显示，与 OA-HA 组相比，OA-HA+Exo 组的骨体积与总体积之比（BV/TV）更高（P < 0.01）。全脑逐个体素分析表明，OA-HA 组的几个区域显示出静息 RVM（喙腹外侧髓质）FC 的改变，而 OA-HA+Exo 兔的 FC 与假组相似（P > 0.05）：结论：在兔子颞下颌关节 OA 模型中，在关节内注射 HA 的同时添加间充质干细胞外泌体，在疼痛抑制、髁状突软骨&amp、软骨下骨退化和滑膜炎症方面均优于单独注射 HA。Figueroa-Valdés1, Nicolás Georges2, Catalina Adasme-Vidal1, Yeimi Herrera-Luna3, Patricia Luz-Crawford1, 3, Maroun Khoury1,2,4,5,6, Ms.1,2,4,5,6, Ms. Francisca Alcayaga-Miranda1,2,4,5,61IMPACT, Center of Interventional Medicine for Precision and Advanced Cellular Therapy, Santiago, Chile, 2Universidad de los Andes, Centro de Investigación e Innovación Biomédica (CiiB), Laboratory of Nano-Regenerative Medicine, Santiago, Chile, 3Universidad de los Andes, Centro de Investigación e Innovación Biomédica (CiiB)、3Universidad de los Andes, Centro de Investación e Innovación Biomédica (CiiB), Laboratory of Molecular and Cellular Immunology, Santiago, Chile, 4Consorcio Regenero, Chilean Consortium for Regenerative Medicine, Santiago, Chile, 5Universidad de los Andes, Faculty of Medicine, School of Medicine, Santiago, Chile, 6Cells for Cells, Santiago, Chile,Sponsor Exhibition, Poster Session and Lunch (Saturday), Exhibit hall-Doors 14-15, May 11, 2024, 12：介绍膝关节骨关节炎（OA）给全球带来了沉重负担，严重影响了生活质量。我们之前利用源自脐带间充质基质细胞（UC-MSCs）的小细胞外囊泡（sEVs）进行的研究表明，在体内缓解OA的效果很好。我们认识到需要一种符合法规要求的基于sEV的疗法，因此进行了广泛的表征和体外研究，深入研究UC-MSCs衍生的sEVs的功能能力，寻求建立疗法释放标准和药效测试。方法通过差速离心分离sEVs，并根据MISEV 2018指南使用纳米粒子跟踪分析、流式细胞术、Western印迹和透射电子显微镜进行表征。利用HTG/EdgeSeq阵列对sEV-miRNAs进行分析，然后进行生物信息学分析，以确定OA相关靶点。为了评估巨噬细胞的极化，研究人员通过流式细胞术评估了特定的标记物，包括抗炎标记物 CD206 和 CD163，以及促炎标记物 CD86 和 HLA-DR。ELISA 分析旨在确定经 sEVs 处理的巨噬细胞产生的细胞因子，如 IL1-β、TNF-α、IL-6、TGF-β、IL-10、VEGF 和 IL-12，目的是改进其表型分类并评估实验的可重复性。此外，还评估了 sEVs 对暴露于凋亡剂的软骨细胞的软骨保护作用。结果 sEVs 的平均大小约为 150nm，具有 CD63、CD81、CD9、Flotillin-1、Syntenin-1、CD90 和 CD44 标记，含有少量 HLA-A/B/C MHC I 类抗原，缺乏 Calnexin、TOMM20 和 HLA-DR/DP/DQ MHC II 类抗原。在 sEV 中观察到了特征性的杯状形态。对 sEV-miRNA 图谱的分析表明，来自三个 UC-MSC 供体的样本具有一致性，其中三个主要的 miRNA 占 miRNA 总读数的近 70%，可能靶向与免疫系统调节、血管生成和细胞外基质调节相关的基因。在功能上，sEVs诱导巨噬细胞极化向抗炎（M2）表型明显转变。此外，与未经处理的细胞相比，经 sEVs 处理的软骨细胞在暴露于凋亡诱导剂时表现出更强的软骨保护作用。sEVs能持续诱导抗炎巨噬细胞极化并增强软骨保护作用，从而加强了OA治疗的前景。Surajit Ghosh海报投稿（周六），2024年5月11日12:45-1:00，展厅-14-15号1) 简介：衰老和神经退行性疾病导致成人神经发生减少，静止神经干细胞（NSC）增加，影响大脑的再生能力。目前的治疗方法包括干细胞移植或神经退行性疾病预防，但疗效仍然有限。我们的解决方案是通过Exo-pep-11（一种细胞外囊泡）利用大脑的神经干细胞。这种新方法通过 Epha4 受体靶向 NSC，通过刺激 NSC 的增殖和分化，有望减轻疾病的严重程度，从而带来良好的治疗效果。 Gargett1,21The Ritchie Centre/Hudson Institute Of Medical Research，Clayton，Australia；2Obstetrics and Gynaecology，Monash University，Clayton，Australia；3Proteomics and Metabolomics Platform，Monash University，Clayton，Australia；4Monash Ramaciotti Centre for Cryo-Electron Microscopy，Clayton，Australia赞助商展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，12：00 PM - 2:00 PM介绍：细胞外小泡（sEVs）含有来自供体细胞的生物活性分子，作为间充质干细胞（MSCs）的现成治疗替代品，它具有类似的优点，却没有生物安全问题，因此很有吸引力。本研究探讨了人子宫内膜间充质干细胞（eMSCs）衍生的sEVs中的蛋白质组成，以了解其细胞应用性：方法：从健康妇女的子宫内膜活检组织中分离出人类 SUSD2+eMSCs ，并在使用或不使用 TGF-βR 抑制剂（A8301）的情况下进行扩增。对 sEVs 的大小、形态、浓度和蛋白质组成进行表征，并进行基于标记的定量蛋白质组学研究。结果：eMSC-sEVs呈球形，直径为121纳米，表达TSG101、Alix和Syntenin-1蛋白。蛋白质组分析进一步验证了它们的身份（CD63、CD9、CD81、flotillin 和 RAB 蛋白），并鉴定出 1892 个参与内吞、肌动蛋白细胞骨架调节、细胞粘附（CASP3、MFGE8）、迁移（整合素、YES1）、伤口愈合的蛋白质、YES1）、伤口愈合（CD151）、血管生成（表皮生长因子受体、BSG）、胶原合成和纤维组织、趋化和免疫调节（TGFβ1、Galectins、CD36、PD-L1、CD39、HLA A-C）以及抗凝血（CD46、CD55、CD59、TFPI、PTX3 和 CFI）。它们还包括各种抗菌（B2M、TMSB4X、DEFA3）和抗病毒（IFIT1、IFIT3、IFIT5、IFITM3）蛋白。eMSCs和A8301/eMSCs平均分别产生0.6+13E+12和1.6E+12 sEVs/µg蛋白。经 A8301 处理的 eMSCs 和未经 A8301 处理的 eMSCs 所产生的 sEV 有 24 种不同的表达蛋白。CD36、GGT5（免疫调节因子）、CEMIP（细胞迁移）、SUSD2（eMSC 标记）、TNS2（增殖）和 TNXB（胶原纤维组织）蛋白明显上调，而 WNT5A（成纤维细胞、纤维化）和 MRC2（增殖和抗凋亡）蛋白则下调。TNFα/IFNγ刺激的eMSC/A8301-sEVs含有额外的强效抗炎细胞因子PGE2和IDO，而LPS刺激的eMSC/A8301-sEVs含有强效抗菌素CXCL4。这项研究表明，eMSC/A8301衍生的sEVs具有血液相容性，可用于盆腔器官脱垂、慢性伤口、疤痕和感染等多种疾病。总体而言，eMSC/A8301-sEVs 具有细胞治疗潜力，减轻了母细胞的生物安全问题。William Sievert3,4, A/Prof Rebecca Lim11Hudson Institute Of Medical Research, Clayton, Australia, 2Obstetrics and Gynaecology, Monash University, Clayton, Australia, 3Gastroenterology and Hepatology Unit, Monash Health、4Centre for Inflammatory Disease, Monash University, Clayton, Australia, 5Monash Health, Clayton, Australia赞助商展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号门，2024 年 5 月 11 日，12：00 PM - 2:00 PM介绍：代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎（MASH）是一种由长期脂肪堆积引起的慢性炎症反应导致的肝脏疾病。MASH可导致肝细胞癌（HCC）。目前，MASH 或 HCC 均无法治愈。人羊膜上皮细胞（hAECs）及其细胞外囊泡（hAEC-EVs）已显示出治疗慢性肝损伤的潜力。原代 hAECs 可从胎盘中大量分离，但缺乏增殖能力。为了克服这一难题，我们从健康供体中分离出了 hAECs，并将其永生化（ihAECs）。在本研究中，我们研究了ihAEC-EVs在MASH和HCC实验模型中的作用：方法：采用实验性 "西式饮食 "和每周低剂量腹腔注射四氯化碳（CCl4）的方法诱导 6 至 8 周大的雄性小鼠患 MASH 和 HCC，分别持续 12 周或 24 周。在MASH模型中，小鼠被随机分配从第6周到第12周每周两次或三次口服10微克ihAEC EVs；在HCC模型中，小鼠被随机分配从第12周到第24周每周两次或三次口服ihAEC EVs。奥贝胆酸（10 毫克/千克）通过口服给药作为对比。对照组小鼠的饮食正常。 结论总之，口服外泌体递送小分子药物（如CUR/BDMC）可有效靶向小鼠大脑，治疗包括AD在内的神经系统疾病。李灿谷、傅庆玲教授赞助展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15号，2024年5月11日，中午12:00 -下午2:00背景：据报道，细胞外囊泡（EVs）作为药物载体显示出巨大的潜力。然而，由于缺乏大规模且经济有效的EVs纯化方法，限制了其在临床上的应用。牛乳中含有丰富的 EVs（mEVs），具有免疫原性低、生物安全性高和成本效益高等特点。先前的研究表明，miR146a-5p 能够通过抑制第 2 组先天性淋巴细胞（ILC2s）的功能来缓解过敏性气道炎症（AAR），ILC2s 是先天性淋巴细胞的一个亚群，在 AAR 的启动和维持中起着关键作用。然而，与其他寡核苷酸类似，miR146a-5p 的利用也面临着降解敏感性和难以穿过细胞膜等挑战。本研究旨在探讨在 ILC2-AAR 模型中向 ILC2 传递 miR146a-5p 的 mEVs（miR146a-5p-mEVs）的作用。采用挤压法将 miR-146a-5p 加载到 mEVs 中。在评估了miR146a-5p在mEVs中的载入效率和稳定性后，我们使用过敏性鼻炎患者的人外周血单核细胞（PBMCs）和以ILC2s为主的AAR小鼠模型评估了miR146a-5p-mEVs对ILC2s功能的治疗效果。测定了 2 型细胞因子的水平和 ILC2s 的频率。结果：我们成功地从牛乳中纯化出了高产的EVs，这种EVs具有生物相容性，能高效地将miRNA送入细胞，而且mEVs中的miR146a-5p具有很高的稳定性。在人和小鼠的 PBMCs 中，T 辅助细胞因子 2 和 ILC2 的水平都有所下降。结论：我们成功地通过挤压将 miR146a-5p 植入 mEVs，miR146a-5p-mEVs 能够预防以 ILC2 为主导的过敏性气道炎症，这表明 mEVs 有潜力成为递送 miRNA 的纳米载体。博士生 Abhinay Kumar Singh、Dr. Win-Ping Deng赞助展览、海报展和午餐（周六），2024 年 5 月 11 日 12:00 PM - 2:00 PM14-15 展厅1) 引言尽管用于结肠癌治疗的化疗药物不断进步，但由于耐药性的存在，结肠癌仍然是一种威胁全球生命的疾病。因此，开发新型结肠癌治疗药物迫在眉睫。来自蔬菜和发芽糙米（VGBR）的细胞外囊泡（EVs）含有大量生物大分子，如蛋白质、miRNAs 和 mRNA，它们可能在口腔癌中发挥抗氧化、抗炎、抗微生物和抗肿瘤活性。在本研究中，我们研究了从 VGBR 提取的 EVs（EVs-VGBR）的抗增殖、抗转移和细胞凋亡活性，以探索其对结肠癌细胞的抗癌活性及其内在机制。伤口愈合和经孔迁移试验用于评估转移情况。流式细胞术和蛋白质表达通过评估细胞周期和细胞凋亡来研究相关的分子机制。我们还通过 NTA 和 TEM 对 EVs-VGBR 进行了表征。3) 结果我们发现，EVs-VGBR 在体外能显著抑制结肠癌细胞的增殖能力和转移。此外，EVs-VGBR 还能通过上调/下调 p21 诱导结肠癌细胞的细胞周期停滞。Annexin-v检测表明，使用EVs-VGBR处理后，结肠癌细胞进入早期或晚期凋亡。此外，一项蛋白质表达机理研究显示，EVs-VGBR 可调控 p53 通路以维持细胞凋亡，并增加 Bax 和 caspase-9 的表达以抑制结肠癌细胞。在体内研究中，我们发现 EVs-VGBR 能显著降低 NOD/SCID 小鼠异种移植肿瘤的生长，且对肝肾无不良影响。 博士生 Amelie Legare、Michele Iskandar 小姐、Andre Marette、Stan Kubow赞助展览、海报展和午餐（周六），展厅--14-15 号门，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:001) 简介：在自闭症谱系障碍（ASD）患者中，多方面的行为、社交和认知缺陷往往伴随着肠胃问题。虽然人们对 ASD 的肠道-大脑相互作用机制仍知之甚少，但临床试验表明，益生菌在调节肠道微生物群和缓解 ASD 相关症状方面具有潜力。值得注意的是，富含多酚的可可益生菌与改善 ASD 儿童的行为缺陷有关。然而，重要的益生元衍生代谢物的生物利用度有限，这可能会阻碍其功效的发挥。利用细菌膜囊（MVs）似乎很有前景，因为它们可以促进将代谢物更好地输送到目标器官。在这里，我们通过将大肠杆菌 Nissle 1917 与富含多酚的可可粉共培养，产生了一种新型共生细菌膜囊：2) 方法：将益生菌株大肠杆菌 Nissle 1917 与富含多酚的可可粉或载体一起在 Luria-Bertani （LB）肉汤中培养。此外，还制作了两个阴性对照组，分别含有或不含可可的 LB。对包括对照组在内的所有组进行了受 Watson, D.C. 等人（2021 年）（EV-TRACK ID：EV210211）启发的 MVs 分离方案。简而言之，采用切向流过滤结合尺寸排阻色谱法。使用可调电阻脉冲传感对颗粒大小和浓度进行量化，并通过透射电子显微镜评估纯度。通过 UPLC-MS/MS 进行了非靶向代谢组学研究，并根据 KEGG 数据库对代谢物进行了映射：我们的初步研究结果表明，从可可处理过的大肠杆菌中提取的细菌 MV 富含多种参与色氨酸代谢的代谢物。事实上，与车辆处理组相比，5-羟基吲哚乙醛和犬尿氨酸（氨基酸受体 NMDA 的拮抗剂）似乎在可可处理过的菌体中含量更高。有趣的是，血清素前体 L-色氨酸独特地存在于可可处理的中压中：总之，在细菌囊泡中富集来源于前益生菌和益生菌的神经活性代谢物是一个令人信服的前景，表明这是一条创新的途径，有可能提高生物利用率，为治疗 ASD 带来更强大的疗效。还需要进一步研究，以阐明其蛋白质组和转录组特征，从而揭示其分子机制。HoChung Jang, Dr. Yoosoo Yang赞助展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 室，2024 年 5 月 11 日，12:00 PM - 2:00 PME 细胞外囊泡（EVs）在大分子传输和细胞间通信中发挥着至关重要的作用，越来越多的人认识到它们是用于靶向药物递送的强大纳米囊泡。虽然越来越多的证据表明，细胞外小泡具有独特的作用模式，可以到达各种靶点，但很少有研究调查了细胞外小泡口服给药后促进肿瘤靶向给药的潜在特性的内在机制。在本研究中，我们开发了一种很有前景的方法，利用牛奶衍生的EVs（mEVs）促进肠道到肿瘤的口服给药，这种EVs在胃肠道（GI）中的各种消化酶内表现出卓越的稳定性。肿瘤活化原药（FDX）由螯合蛋白 B 特异性可裂解的 FRRG 肽和多柔比星组成，与 mEVs 复合物后形成 FDX@mEVs。在结肠肿瘤小鼠体内，口服 FDX@mEVs 可通过新生 FC 受体（FcRn）介导的转囊作用在肠道内被大量吸收。随后，由于 mEVs 在血液中具有出色的稳定性，它们显著提高了原药的药代动力学（PK）特性，增加了半衰期和曲线下面积（AUC），从而通过增强的渗透性和滞留效应实现显著的肿瘤蓄积。最终，FDX@mEVs 的口服给药在结肠肿瘤模型中产生了显著的抗肿瘤疗效，同时由于 FDX 对表达相对低水平 cathepsin B 的非靶组织的细胞毒性极小，降低了潜在的副作用风险。 相比之下，天然植物纳米颗粒（PDNPs）提供了一种具有成本效益、生态友好、免疫原性低且可扩展的替代品。PDNPs 在糖尿病伤口愈合中的跨领域调控潜力仍有待探索。对姜黄衍生纳米粒子（TDNPs）进行了分离、表征、代谢物分析和靶基因预测。体外实验分析了TDNPs干预成纤维细胞和巨噬细胞的生物学现象和机制。开发了 TDNPs@气凝胶（TAG）并对其进行了表征，包括元素分析、透射电子显微镜表征、生物相容性验证和释放率测定。3) 结果代谢组学显示姜黄衍生纳米颗粒（TDNPs）具有多功能药理负载。药物靶点分析表明，TDNPs 可调节糖尿病伤口愈合中的多细胞信号网络。TDNPs 通过激活 Nrf2/HO-1 促进成纤维细胞增殖和迁移，增强抗氧化能力，减少细胞凋亡。巨噬细胞的吸收可通过抑制 TLR4/MyD88 减少促炎细胞因子。此外，TDNPs 还能恢复巨噬细胞和成纤维细胞的细胞内交流，促进细胞外基质的形成和组织重塑。在糖尿病伤口管理方面，TDNPs 被载入由纤维素纳米纤维（CNF）和海藻酸钠（SA）组成的超轻、高膨胀、透气气凝胶（TAG）中。TAG 具有可定制的伤口可及性、水适应粘附性和 TDNPs 持续释放性，在糖尿病伤口愈合中表现出卓越的体内性能。) 小结/结论这项工作凸显了 TDNPs 在再生医学中的潜力及其应用形式的意义，为临床提供了一种前景广阔的解决方案。潘伟伦博士、钟明珍硕士、郑磊教授赞助展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00皮下组织中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染因其抗生素耐药性和复发倾向而难以消除，对全球健康构成挑战。准确检测、有效治疗和适当修复受感染的皮下组织仍然是临床实践中的关键。植物源性细胞外囊泡（PDEV）具有来源广泛、功能多样等特点，已成为一种很有前景的治疗药物。通过代谢组学和药物靶点分析，我们发现姜黄源性细胞外囊泡（TEV）中含有具有卓越抗菌、抗氧化和皮肤组织修复作用的小分子。在这项研究中，我们在原位将TEV与双光子响应超小型金银纳米团簇（TEV@AuAg，TA）组装在一起，并将其装入透明质酸酶响应型溶解微针中，形成了TEV@AuAg@微针（TAM）系统。由于 MRSA 会释放大量透明质酸酶，TAM 可选择性地在感染部位触发透明质酸酶的释放，从而通过双光子成像检测活动/非活动细菌感染。此外，双光子照射 AuAg 纳米簇还能诱导大量活性氧（ROS），并与 TEV 发挥协同抗菌作用。转录组学和 PCR 结果表明，TAM 对 MRSA 有多种作用，它能抑制 MRSA 细胞壁中蛋白质的合成，诱导脂质过氧化，抑制三羧酸循环，阻碍细菌的信息放大、交流和生物膜的形成。角质细胞的转录组学显示，TAM 有能力增强内源性抗氧化系统、抗菌肽的分泌和生长因子的表达，为修复受损的皮肤组织提供了有利条件。在皮下感染模型中，TAM 能在 10 分钟内检测到细菌病变，并对感染部位进行有效治疗。免疫荧光、Giemsa 染色、组织化学和 PCR 检测证实，TAM 可快速清除细菌感染，改善氧化微环境，重编程炎性巨噬细胞，促进皮肤组织再生。通过采用原位膜工程技术与微创酶反应微针相结合，这些 PDEV 能够实现双光子监测并协同治疗皮下感染。 51 通过携带肌肉靶向分子的外泌体静脉注射向小鼠下肢靶向递送货物孙明浩博士，副主任 Mafalda Cacciottolo，首席科学家李宇佳，高级科学家 Mahrou Sadri，高级科学家 Michael LeClaire，副研究员 David Tran，首席科学官 Kristi ElliottPS05.53 用于治疗胶质母细胞瘤的核酸/药物递送的工程外泌体结合纳米抗体的开发赵绍志博士、谢明友博士、黄世伟博士、潘志明博士、赵德洋博士PS05.54 利用自体血源性细胞外囊泡作为视网膜变性的精准治疗Rakshanya Sekar 女士、Yvette Wooff 博士、Adrian Cioanca 博士、Riccardo Natoli 副教授PS05.55 利用工程干细胞衍生纳米颗粒（scNVs）作为心脏修复的可扩展细胞重编程疗法博士候选人乔纳森-洛萨诺（Jonathan Lozano）博士、贾蒙-G-利斯（Jarmon G Lees）博士、阿林-拉伊（Alin Rai）博士、凯亚-格里戈隆（Kyah Grigolon）博士、海伦-基里亚齐斯（Helen Kiriazis）博士、里卡多-纳托利（Riccardo Natoli）副教授PS05.Helen Kiriazis, Ren Jie Phang, Jonathon Cross, Haoyun Fang, Dr. Daniel Donner, Shiang Y Lim, Dr. David W. GreeningPS05.56 Engineered serum extra-cellular vesicles deliver CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins to modify the dystrophin genePh.Dr. Yaoyao Lu, Research assistant Nathalie Majeau, Ph.D Camile Bouchard, Professor Jacques-P TremblayPS05.58 用于递送治疗性小 RNAPhD 的工程化细胞外囊泡学生 Julia Anna Rädler, Giulia Corso, Antje Zickler, Noriyasu Kamei, Wenyi Zheng, Dhanu Gupta, Samir El AndaloussiPS05.57 用于递送治疗性小 RNAPhD 的工程化细胞外囊泡63 基于多功能聚集诱导发射的细胞外囊泡重塑感染伤口愈合的微环境Doc.王萍萍1，邹杭教授1，郑磊教授11南方医科大学南方医院检验医学系PS05.64 富含精氨酸的细胞穿透肽修饰微囊用于诱导大蛋白细胞诱导和增强细胞内递送中濑郁彦博士1、森本健太博士1、石飞丈次郎博士1、野口浩介博士1、吉良一博士1、高田尼中濑友香博士2、藤井郁男博士1、二泷史郎博士3、金田正光博士41Masamitsu Kanada41 日本堺市大阪都立大学理学研究科，2 日本西宫市武库川女子大学药学和制药科学学院，3 日本宇治市京都大学化学研究所，4 美国东兰辛市密歇根州立大学药理学和毒理学系05。65 用于天然多重货物运输的细胞外囊泡分拣 Motif 平台实验室主任 Gibeom Kim1，高级研究员 Inkyu Lee1,3，首席执行官 Gi-hoon Nam1,2，教授 In-San Kim3,41SHIFTBIO INC、2Department of Biochemistry & Molecular Biology, Korea College of Medicine, Seoul, South Korea, 3KU-KIST Graduate School of Converging Science and Technology.韩国首尔，高丽大学；4韩国首尔，韩国科学技术院化学与生物综合研究中心PS06.01气道基底干细胞衍生的细胞外囊泡：一种有前途的成纤维细胞调控策略Dr.罗丽思博士、杨慧杰博士、黄俊峰博士、李世悦博士PS06.06 评估GM-1神经节苷脂在神经元摄取中的作用Thitikan Jirakittisonthon小姐、Orman Snyder博士、何红博士、Mark Weiss博士PS06.08 透明质酸外衣可增强神经元摄取神经元的能力。08 透明质酸外衣增强了细胞外囊泡对CD44过表达细胞的靶向作用MSc Heikki Kyykallio, BSc Kirsti Härkönen, PhD Martina Hanzlíková, PhD Tatu Lajunen, Professor Tapani Viitala, PhD Kirsi RillaPS06.09 从卵泡生长早期和晚期采集的卵泡液中鉴定影响细胞外囊泡摄取差异的蛋白质洪蔚婷助理教授、John S. Davis教授、Lane Christenson教授PS06.10 受致癌 RAS 和 RAF 转化影响的细胞外囊泡体内差异动力学分布Shinwon Chae 女士，Chul Won Seo 先生，Haekang Yang 女士，Yoon-Jin Lee 教授，Dongsic Choi 教授PS06.11 NaTaLi：用于靶向多色 EVs 的纳米抗体-标记配体点击策略Dr.Andrea Galisova, Dr. Jiri Zahradnik, Dr. Daniel JirakPS06.12 NHE7的上调通过增强肝细胞癌中巨细胞素体的成熟而促进小细胞外囊泡的摄取姚悦博士，徐毅博士，任伟平博士PS06.13 结节流转移多发性骨髓瘤的研究13结节流转移多囊卵巢素决定小鼠左右不对称田中洋介博士，森泉爱博士，广川信孝博士PS06.16黑色素瘤自发转移小鼠模型中自体血清源性小EVs的生物分布研究用于开发癌症转移的核酸载体渡濑大辅博士，榛川舞博士，山田绫乃博士，古贺光久博士PS06.17自体血清源性小EVs在黑色素瘤自发转移小鼠模型中的生物分布研究用于开发癌症转移的核酸载体渡濑大辅博士，榛川舞博士，山田绫乃博士，古贺光久博士PS06. 间充质干细胞（MSCs）通过分泌细胞外囊泡（EVs）具有旁分泌效应，可对细胞修复和恢复产生积极影响。因此，本研究旨在探讨牙科干细胞衍生外泌体（DSCs-EXO）疗法对缺血性中风后大鼠神经功能恢复和脑血流量的促进作用：方法：根据 "MISEV2018 "指南分离和鉴定牙科干细胞外泌体。通过双侧颈总动脉闭塞诱导大鼠脑缺血。雄性 Sprague-Dawley 大鼠分为三组：假组、双侧颈总动脉闭塞组（BCCAO）和双侧颈总动脉闭塞加 DSCs-EXO（100µg）治疗组（BCCAO）。DSCs-EXO在BCCAO术后3小时静脉注射。在 BCCAO 和治疗后的第 1、7 和 14 天，使用平衡能力的改良神经严重程度评分 (mNSS) 评估神经功能缺损情况。第 14 天的脑 CT 扫描确定动脉阻塞和血流不足。所有动物实验方案和程序均获得玛希隆大学研究所动物护理和使用委员会（COA.NO.IMB-ACUC 2022/004）批准：差速离心法和 TEM 图像显示，DSCs-间充质干细胞培养基中的外泌体大小约为 100 nm，形态呈杯状。纳米颗粒追踪分析（NTA）显示外泌体的大小在 40.5 nm - 749.5 nm 之间（平均为 178.9 +/-2.6 nm）。Western印迹分析显示了外泌体蛋白标记物的表达，它们是在EVs中回收的跨膜蛋白CD81和细胞膜蛋白TSG101和HSP70。注射造影剂后，DSCs-EXO治疗可明显降低神经功能缺损测试的横梁平衡评分，增加CTA成像三维渲染的脑血流Hounsfield单位：我们的研究结果表明，DSCs-EXO 具有促进缺血性中风后大鼠神经功能恢复和增加脑血流量的治疗功能。Olivia Cardenas- Trowers、Ralph Perkerson、Tammee Parsons、Nabanita Halder、Nisha Durand、Abba Zubair、Jing Zhao、Takahisa Kanekiyo赞助商展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，下午 12:00 - 2:00简介：阴道脱垂是指阴道异常下垂，它影响着数百万女性的生活。不幸的是，手术矫正后的脱垂复发率高达 30-46%。来自诱导多能干细胞衍生间充质干细胞（iPSC-derived MSCs）的胞外囊泡（EVs）有望作为脱垂手术的辅助治疗，可能通过抑制炎症和纤维化。我们介绍了建立可扩展且有效的iPSC衍生间充质干细胞EVs供应链的方法，以此作为治疗阴道脱垂的潜在疗法。然后将细胞在去FBS培养基中培养48-72小时，收集条件培养基并短暂离心以去除细胞碎片。切向流过滤（TFF）用于通过两个孔径分别为 0.65 µm 和 500 kDa 的连续过滤器处理条件培养基，以浓缩 EV 产物。重滤步骤是将细胞培养基换成含 25mM 曲哈糖的 0.9% 氯化钠溶液。使用纳米粒子追踪分析法（NTA）估算粒子大小和浓度。使用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 10x RIPA 提取样品中的蛋白质，并通过 Nanodrop 评估浓度。使用 Western 印迹、多重免疫测定和流式细胞术对 EV 表面标记物进行分析。结果：用于 EV 纯化的 TFF 可将 250 mL 细胞培养基浓缩到 8-10 mL 的重滤产物。在 Western 印迹和多重免疫测定中检测到了 EV 标记，如 ALIX、CD9、CD63 和 CD81。在改良的THP-1细胞系中，100 ng/mL LPS刺激可抑制NF-kβ通路的激活，从而显示出对免疫反应的调节作用。Jisook Moon教授赞助展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，12:00 PM - 2:00 PME 细胞外囊泡（EVs）可调节多种生物现象，但由 EV 介导的正常衰老调节尚待深入研究。 通过纳米跟踪分析对 sEV 的大小和数量进行了量化。CD9和GM130的表达通过免疫印迹得到证实。造血干细胞在体外被 TGF-β（5 ng/mL）激活。在使用transwell培养系统共同培养hCLiPs和造血干细胞、将造血干细胞暴露于hCLiP-sEV以及将hCLiP-sEV衍生的总RNA转染到造血干细胞后，评估了造血干细胞中αSMA的mRNA表达，这是活化的指标：结果：hCLiP移植组的纤维化在病理上得到了改善，基因表达也发生了合理的变化。特别是，hCLiP移植降低了αSMA等嗜碱性标志物的mRNA表达。与hCLiPs间接共培养可减少TGF-β激活的造血干细胞中αSMA的表达，这一点在与永生化的hCLiPs共培养时也得到了证实。暴露于 hCLiP-sEVs 后，造血干细胞中 αSMA 的表达明显下降。为了测试 sEV 中的 RNA 货物是否是 hCLiPs 作用的原因，我们将 hCLiP-sEV 衍生的总 RNA 转染给 TGF-β 激活的造血干细胞。令人吃惊的是，转染的 RNA 使造血干细胞失活的程度几乎与 hCLiP-sEV 暴露的程度相同：我们的研究结果表明，hCLiP-sEV可作为一种抗纤维化模式，通过其RNA载体治疗肝纤维化。何碧欣博士，傅庆玲教授，方书兵博士方书兵博士赞助商展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00 简介 17 型辅助 T 细胞（Th17）主导的中性粒细胞气道炎症在类固醇耐药气道炎症（如严重哮喘）的发病机制中至关重要。从人类间充质干细胞（MSCs）中提取的细胞外小泡（sEV）在许多疾病中显示出广泛的治疗效果和优势。方法 我们用卵清蛋白（OVA）和脂多糖（LPS）致敏，并用5%的OVA进行挑战，成功建立了中性粒细胞气道炎症小鼠模型。流式细胞术分析了肺组织中T辅助细胞和炎症细胞的水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）分析了支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-17A（IL-17A）的水平。mCherry 标记的间充质干细胞-sEV 用于评估 CD4+ T 细胞对间充质干细胞-sEV 的吸收效应。用或不用 MSC-sEV 刺激人 CD4+ T 细胞，将其极化为 Th17 细胞，以研究 MSC-sEV Th17 极化的影响。研究人员使用 RNA 测序（RNAseq）来探索 MSC-sEV 介导的 Th17 极化抑制所涉及的信号通路。通过Western印迹研究了MSC-sEV抑制Th17的机制，并用p-STAT3激活剂colivelin进行了证实。结果 我们发现，MSC-sEV能显著缓解支气管周围间质组织中炎性细胞的浸润，并降低中性粒细胞性气道炎症小鼠BALF中炎性细胞，尤其是中性粒细胞的水平。同样，间充质干细胞-SEV 能显著降低 BALF 中 IL-17A 和肺组织中 Th17 的水平。此外，mCherry 标记的间充质干细胞-sEV 在培养 12 小时后最明显地被人类 CD4+ T 细胞吸收。更重要的是，通过RNA测序和Western印迹，发现JAK2-STAT3通路在间充质干细胞-SEV抑制Th17极化的过程中发挥了重要作用。结论 MSC-sEV能够通过抑制JAK2-STAT3通路改善Th17为主的中性粒细胞气道炎症，表明MSC-sEV可能是治疗中性粒细胞气道炎症的一种潜在治疗方法。Hala Saneh 博士、Heather Wanczyk、Joanne Walker、Christine Finck 博士赞助商展览、海报展示和午餐（周六），2024 年 5 月 11 日 12:00 PM - 2:00 PMB 背景：尽管新生儿护理取得了进步，但早产儿支气管肺发育不良（BPD）的发病率仍然很高。人类诱导多能干细胞（hiPSCs）在修复支气管肺发育不良动物模型的损伤方面显示出前景。有证据表明，它们是通过旁分泌机制发挥其作用的。我们在此旨在评估从hiPSCs及其肺泡原代（diPSCs）中提取的细胞外囊泡（EVs）在早产儿肺移植模型中减轻高氧损伤的效果：方法：在胚胎 17.5 天收获小鼠肺叶，并将其保存在空气-液体界面中。暴露于95%的氧气中24小时后，在培养基中加入5x106颗粒/毫升的EVs，这些EVs是通过大小排阻色谱法从hiPSCs或diPSCs中分离出来的。 此外，还进行了基于细胞的试验，评估 CMi-EV 促进血管生成和人类内皮细胞迁移、抑制心脏纤维化和炎症的潜力。为确保细胞外囊泡结构的完整性，进行了透射电子显微镜（TEM）分析。结果NTA结果显示两种样本的颗粒大小分布相似，第10天和第11天的颗粒数分别为6.75E9和8.10E9个/天。Western 印迹证实，EV 相关标记物（CD63 和 CD9）呈阳性，纯度很高，Argonaute 2 和 Calnexin 均未检出。与阴性对照组相比，基于细胞的检测结果呈阳性。TEM 图像显示了 EV 特有的杯状结构。本研究强调了 hiPSC-CMi 作为一种有价值的细胞平台，在生产针对心脏再生治疗的 EV 方面具有广阔的前景。目前，我们正在开发新型的整合式可扩展 EV 纯化方法，为增强心脏再生医学领域的可转化性和临床应用性铺平道路。Aslan (mehdi) Dehghani，高级科学家 Eric Black，高级科学家 Zheng Zhao，高级科学家 Namitha Haridas，工艺开发高级经理 Sunandan Saha，工艺开发高级经理 David Splan，工艺开发服务主管 Mark Szczypka，高级生物工艺主管 David Pollard赞助商展览、海报展示和午餐（周六），2024 年 5 月 11 日 12：介绍间充质干细胞（MSCs）衍生的细胞外小泡已在多项临床试验中进行了治疗应用研究。方法USP包括在使用微载体的一次性生物反应器中进行为期10天的扩增、生长和收集阶段。在 MSC NutriStem® 培养基中，间充质干细胞以 3000 cells/cm2 的密度播种，微载体密度为 10 cm2/mL。第 4 天，进行 50% 的培养基交换，第 7 天，开始 EV 收集阶段，切换到 EV 贫化培养基。然后使用 750 KDa 中空纤维进行切向流过滤，以实现 5 倍浓缩和重过滤。在阴离子交换色谱步骤中进一步去除杂质。结果第10天收获的间充质干细胞最终细胞密度为1-5[ ×10]^6 cells/mL，NTA散射模式测量的颗粒浓度为1-5[ ×10]^9 particles/mL。在整个上游处理过程中，测得的细胞存活率超过 93%。在 DSP 的每个单元操作之前和之后，我们使用了多种分析技术来测量回收率和纯度。根据 MISEV 指南的建议，我们使用 NTA（散射和荧光）和流式细胞仪等正交单颗粒分析技术对每个步骤进行了优化。我们还使用分析型高效液相色谱法（Analytical HPLC）进一步分析了每个样品，这是一种半定量技术，可使用 3 种不同的检测器：多角度光散射、紫外和荧光来表征 EV 样品。在整个过程中，通过监测蛋白质和 DNA 的浓度来评估纯度。Western 印迹显示了四跨蛋白标记和货物蛋白的存在。然后，通过以剂量依赖的方式测量伤口恢复情况，证实了纯化的间充质干细胞-EV 的功能。Kartini Asari 博士、Kol Thida Mom、Amirah Fitri、Sadman Bhuiyan、Ramin Khanabdali 博士、Gregory Rice 教授赞助商展览、海报展示和午餐（周六），展览厅--14-15 号门，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00简介：细胞外囊泡（EVs）是细胞分泌的脂质双层膜结合微粒，最近的研究表明其可用于诊断和治疗。尽管其潜力巨大，但从细胞条件培养基中以更高的产量获得功能性 EVs 仍具有挑战性。本研究的目的是开发一种经济有效的无血清/无氧EV收集培养基，以最大限度地提高HEK293细胞的EV产量和纯度。方法：HEK293天真细胞和工程细胞在生长培养基（MEM + 1x GlutaMAX + 10% FBS）中培养，培养基置于37°C、5% CO2的湿化室中。当细胞达到 80% 的汇合度时，用 1x PBS 冲洗单层细胞，去除生长培养基。 01），Saa1/2 在 6 小时时显著增加（118.50±75.77 倍，p<0.01）。VCAM-1 WT 和 KO EC-EV 对 TSG101 和 CD9 呈阳性。注射 VCAM-1 KO EC-EV 可减轻 Cxcl1 和 Saa1/2 的诱导作用。我们的数据表明，EC-EV 在肝脏中诱导早期 APR，导致小鼠探索行为减少，这取决于 EC-EV-VCAM-1。Rebecca Raven 小姐1、Jessica Williams 博士1、Keith Morris 教授1、Philip James 教授11英国卡迪夫城市大学心血管健康与衰老中心赞助商展览、海报展示和午餐（周六），2024 年 5 月 11 日 12:00 - 2:00 展览厅-14-15 号展厅简介：缺血性脑卒中的一个主要特征是组织缺氧和血脑屏障（BBB）功能障碍。构成血脑屏障的神经血管单元（NVU）对维持大脑微环境的平衡至关重要。内皮细胞和星形胶质细胞是神经血管单元中最不可或缺的两种细胞类型。细胞外囊泡 (EVs) 在这方面的作用直到最近才被认识到。对 BBB 的破坏会导致渗漏，EVs 不仅可以双向穿越 BBB，而且在这一病理生理学中起着至关重要的作用。本文旨在利用体外 BBB 模型确定缺氧后 NVU 原代细胞中 EV 的产生是否发生改变，以及屏障完整性是否受到影响：方法：将原代永生人脑内皮细胞（HBECs）和星形胶质细胞（SVGs）暴露在缺氧（1%O2）和常氧（21%O2）条件下24小时。使用差速超速离心法从培养上清液中分离出EVs，并根据ISEV指南通过纳米颗粒追踪分析（NTA）、流式细胞术（FC）和时间分辨荧光（TRF）对其进行表征。将 HBECs 和 SVGs 培养在跨孔插入物上，创建 BBB 体外模型。使用跨内皮电阻（TEER）和 FITC-葡聚糖测定法测量屏障完整性/通透性的变化：这些研究结果表明，缺氧 24 小时后，HBECs 中的 EV 浓度增加（5211±145EVs/Cell vs 3443±213EVs/Cell, p <0.001），但星形胶质细胞中的 EV 浓度没有增加。缺氧后，两种细胞系产生的 EVs 平均大小没有差异。体外屏障模型显示，与常氧相比，缺氧 24 小时后 TEER 明显降低（21.40±2.76 Ω.cm2 vs 76.35±2.38 Ω.cm2, p <0.0001），表明屏障完整性受到破坏。此外，与常氧条件相比，在缺氧条件下暴露 24 小时后，FITC-葡聚糖通过屏障的渗透性增加（10.34%±038% vs 5.34%±0.22%，p < 0.001）：缺氧会选择性地增加 HBECs 中的 EV，但不会增加星形胶质细胞中的 EV。TEER 的减少和屏障通透性的增加表明，缺氧/缺血事件发生后，EV 有可能在脑实质和血液之间以双向方式渗漏。Petra Ilvonen1, Sanna Susila1,2, Reetta Pusa1, Ulla Impola1, Tuukka Helin3, Lotta Joutsi-Korhonen3, Saara Laitinen1, Jouni Lauronen1, Minna Ilmankunnas1,4,51芬兰赫尔辛基，芬兰红十字血液服务、2Emergency Medical Service and Emergency Department, Päijät-Häme wellbeing services county, Lahti, Finland, 3epartment of Clinical Chemistry, HUS Diagnostic Center, Helsinki University Hospital and University of Helsinki、5Meilahti 医院血库、临床化学系、HUS 诊断中心、赫尔辛基大学医院和赫尔辛基大学，赫尔辛基，芬兰赞助商展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，12：00 PM - 2:00 PM介绍：细胞外囊泡（EVs）具有促凝血特性。众所周知，EVs会在储存的血液制品中积聚，因此我们比较了白细胞减少的冷藏全血（CSWB）中的EV含量和凝血能力，以及目前的院前和院内成分疗法，以了解EVs在老化的CSWB止血能力中的作用：从 12 名 O 型 RhD 阳性男性献血者处获得血液。所有研究程序均按照世界医学协会《赫尔辛基宣言》的要求进行。 为了证实AMs靶向EVs的途径，我们通过共聚焦显微镜验证了TLR4受体和SP-A相关EVs的荧光染色。此外，我们的研究还表明，SP-A-EVs 是通过 TLR4 介导的内吞途径内化的，与天然 EVs（主要在 AMs 内进行溶酶体降解）相比，SP-A-EVs 的降解明显延迟。在一项功能性研究中，抗炎 microRNA Let-7b 被转染到 SPA-EVs 中，以减少 LPS 诱导的肺部炎症并抑制 AM 的激活。Madhusudhan Bobbili 先生、Nuria Gimeno 女士、Stefan Vogt 先生、Florian Rüker 先生、Gordana Wozniak-Knopp 女士、Johannes Grillari 先生赞助展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00 简介：尽管脂质纳米粒子（LNPs）在药物递送方面取得了最新进展，但LNPs可能显示出毒性，并限制了药物的靶向递送。因此，无效给药问题亟待解决，而细胞外囊泡 (EVs) 可以解决这一问题。EVs具有与生俱来的治疗潜力，可作为靶向给药载体，能够调节宿主受体细胞的增殖、迁移、分化和其他对宿主生物体健康至关重要的特性。为了加强电动汽车的靶向给药，我们采用了一种内在超量表达的蛋白质 CD81 来识别所需的靶抗原：方法：酵母文库显示了 CD81 细胞外大环的突变变体，这些突变变体与人胎盘层粘连蛋白、表皮生长因子受体（EGFR）和 Her2 等靶标结合。它们与层粘连蛋白、表皮生长因子受体和 HER2 的特异性相互作用已在哺乳动物展示系统中得到证实。衍生序列被重新格式化为全长 CD81，并在由 HeLa 细胞产生的 EVs 中表达为层粘连蛋白结合体；由 HEK293 细胞产生的 EVs 中表达为表皮生长因子受体（EGFR）和 HER2：为了评估与抗原结合的 CD81 LEL 变体的新功能，我们评估了这些 EVs 在表皮生长因子受体（EGFR）和 HER2 过度表达细胞系中的内化情况。野生型 CD81 生产细胞系的 EVs 被列为对照。事实上，与表皮生长因子受体阴性细胞相比，我们观察到靶向表皮生长因子受体的 EVs 在表皮生长因子受体过度表达细胞中被明显内化。HER2 靶向 EV 也观察到了类似的结果。此外，与 WT EVs 相比，负载小分子的靶向 EVs 在负载细胞毒性药物时会诱导细胞凋亡：据我们所知，这是第一个通过体外分子进化利用 EV 膜蛋白作为新靶抗原识别介质的例子，为其在各种治疗领域的广泛应用开辟了前景。本文介绍的方法的优势在于它可以快速递送任何抗原的粘合剂，这些粘合剂可以简单地 "点击 "到重组表达在 EV 表面的全长 CD81 上，从而实现由 EV 介导的向各种细胞和组织的特异性递送。我们的研究团队致力于开发基于分离的细胞外囊泡 (EV) 和肽化学的治疗技术，将治疗/诊断分子送入靶细胞。由于EVs作为治疗分子细胞内递送的载体具有药物优势，我们正试图开发 "盒式 "技术，在EVs膜上轻松修饰生物功能肽，以实现 "按需 "受体靶向和增强细胞对EVs（PepEVs）的摄取。本报告将介绍生物功能肽的修饰技术，如富含精氨酸的细胞穿透肽（CPPs，诱导大蛋白细胞吞噬）[1]、人工盘绕肽（受体靶标）[2]、膜融合肽（胞浆释放）[3,4]。此外，还将介绍和讨论新开发的以细胞穿透性 sC18 肽（源自阳离子抗菌蛋白 CAP18 [5]）和膜曲率识别肽（nFAAV5）装饰的 EVs，并将其应用于基于 EV 的未来疗法中。因此，我们的研究小组开发了利用化学连接剂或酰化技术改造 EV 膜上富含精氨酸的 CPPs 的方法，这可以诱导蛋白多糖（如辛迪加-4）的聚合和大蛋白吞咽信号转导[1]。 黄春仁教授、张超元博士、庄庆伟博士赞助展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:001) 简介：吸入性肺炎（指吸入胃内容物导致的急性肺损伤）对体弱和老年人构成严重威胁，炎症和氧化应激是导致高死亡率的关键因素。微小核糖核酸（miRNA）let-7i-5p 具有强大的抗炎和抗氧化特性。本研究探讨了使用负载有 let-7i-5p miRNA 的工程外泌体减轻小鼠模型中胃内容物吸入导致的急性肺损伤。利用气管内给药胃内容物模拟物（一种由黄原胶增稠剂（12 毫克/毫升）、胃蛋白酶（2 毫克/毫升）和脂多糖（2.5 毫克/毫升）组成的混合物）建立了吸入性肺炎小鼠模型。小鼠被分为两组，一组只接受胃内容物模拟物（AP 组），另一组接受工程外泌体（1x10⁹颗粒/只小鼠，气管内给药；APEEXo 组）。48 小时后对肺损伤进行评估3） 结果：组织学和肺损伤评分测定显示，AP 组的肺损伤程度明显高于 APEEXo 组（p <0.001）。与 APEEXo 组相比，AP 组支气管肺泡灌洗液中的总细胞数和差异细胞数也明显升高（均 p < 0.001）。肺功能评估显示，与 APEEXo 组相比，AP 组的吸气能力明显下降（p = 0.006）。此外，与 APEEXo 组相比，AP 组的动态顺应性更低，阻力更大（均 p < 0.01）。4) 结论：气管内给予负载有 let-7i-5p miRNA 的工程外泌体可减轻小鼠因胃内容物吸入而诱发的急性肺损伤。沃尔夫-霍尔索纳（Wolf Holnthoner）赞助展览、海报展和午餐（周六），2024 年 5 月 11 日 12:00 - 2:00 展览厅-14-15 号厅淋巴管多年来一直未受到科学界的广泛关注，尽管它对高等生物的发育和平衡至关重要。为了在创伤和疾病后重建真正的组织稳态，治疗策略需要考虑淋巴系统的再生。血管内皮生长因子 C（VEGF-C）与淋巴特异性血管内皮生长受体 3（VEGFR-3）结合并激活后，是淋巴管生成的关键介质。人们主要在淋巴水肿和癌症等情况下对其进行研究。然而，这种受体配体的大多数测试应用都没有考虑到其高度复杂的生物合成过程。不同的蛋白水解过程会产生不同的变体，显示出不同程度的受体特异性和亲和性，这影响了它的所有应用。为了增强血管内皮生长因子-C 的促淋巴效应及其系统性，最近有人提出了将其与富含于细胞外囊泡 (EVs) 中的四跨蛋白（如 CD9、63、81）等蛋白质连接起来的可能性。在本项目中，我们的目标是建立稳定的脂肪衍生基质/干细胞（ASC）系，这些细胞系能表达与 CD81 相连的 VEGF-C 的不同变体。这种融合蛋白应能发挥受体激活和组织特异性归巢的双模功能。融合蛋白的表达和亚细胞定位分别通过 Western 印迹法和免疫荧光法得到了证实。利用表达 VEGFR3/EpoR 嵌合体的 BaF3 细胞系，我们测试了不同的 CD81-VEGFC 变体在激活活性方面的差异。在这项研究中，我们证明了可以在 EV 表面生成不同配体的融合蛋白变体，并在随后的受体激活实验中测试它们的生物活性，为下一步测试它们在各种体内创伤模型中增强淋巴管生成的治疗潜力铺平了道路。特聘教授 KS Clifford Chao、主治医师黄志贤、助理研究员颜诗璇、助理研究员张新宇、助理研究员杨佩珍、副教授 Kevin Chih-Yang Huang赞助商展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00简介：辐射诱导的肺损伤（RILI）会导致DNA损伤和活性氧（ROS）积累，从而诱发炎症反应，造成肺泡上皮细胞损伤。 此外，我们还成功推出了临床级 EV 产品，包括 EV-SOX9，该产品目前正在进行治疗犬 OA 的临床试验。我们的最终目标是将 EV-SOX9 定位为治疗 OA 的创新药物。Patricia Wongsodirdjo 小姐、Ya Hui Hung 博士、Fazel Shabanpoor 博士、Laura Vella 博士、Rebecca Nisbet 博士赞助商展览、海报展示和午餐（周六），2024 年 5 月 11 日 12:00 PM - 2:00 PM14-15 号展厅神经系统疾病影响着全球约十亿人，是全球十大死亡原因之一（世界卫生组织）。近年来，信使核糖核酸（mRNA）技术为药物输送带来了革命性的变化。mRNA 的优势在于其用途广泛且安全性极高。然而，中枢神经系统靶向 mRNA 药物开发面临的主要挑战之一是，传统脂质纳米粒子制剂的血脑屏障（BBB）渗透性有限，而且容易引发脑部炎症反应。该项目利用我们现有的临床前神经治疗管线、获得专利的 BBB 通透性肽和细胞外囊泡 (EV) 方面的专业知识，生成含 mRNA 的 EV，以增强脑部递送和优化脑细胞翻译。于紫彤、张慧涛、郝睿博士、博士生胡诗、陈思慧、杨辉教授赞助商展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00 简介小细胞外囊泡（sEVs）是所有细胞类型产生的纳米级（30-200 nm）脂质层囊泡。它们已成为治疗药物递送系统的理想候选物质。越来越多的证据表明，细胞内蛋白质功能障碍是许多疾病的根源。鉴于其保护货物蛋白质的卓越能力、体内应用的多功能性、生物相容性、穿越生物屏障的能力以及靶向行为，sEVs 已引起越来越多的关注。然而，它们目前的应用主要局限于输送低分子量有效载荷，如化疗药物和 siRNA。为携带生物大分子而对 sEV 进行基因或化学工程改造的尝试在很大程度上效率不高，而且在扩大临床试验和商业生产规模方面具有挑战性。因此，开发一种直接高效的技术将生物大分子装载到 sEVs 上，对于加快临床验证、药物生产和推动产业转型来说势在必行。方法我们提出了一种外泌体纳米工程平台（ExoNP），可直接高效地将生物大分子包装到 sEVs 中。野生型 p53 肿瘤抑制蛋白是一种与人类癌症相关的细胞内关键靶标，我们利用它作为有效载荷。我们利用激光共聚焦扫描显微镜评估了 sEVs 的细胞内输送效率和内/溶酶体逃逸能力。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）对 ExoNP 的负载能力进行量化，而 CCK-8 试验则评估了 sEVs 运送的 p53 蛋白抑制 p53 缺失的非小细胞肺癌 H1299 细胞生长的能力。共聚焦显微镜和共定位分析表明，大多数荧光标记的 sEVs 定位于细胞质中，这表明内细胞摄取效率高，内/溶酶体逃逸效率高。此外，我们的定量结果表明，ExoNP 平台能成功地将 p53 蛋白装入外泌体，使用标准临床剂量的外泌体，在几分钟内就能达到毫克量。这种创新方法提高了生物大分子利用工程 sEVs 进行细胞内递送的潜力。博士候选人 Liouba Le Roux 博士、Adityas Purnianto 博士、Laura Vella 博士、Ya Hui Hung 赞助展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00引言尼曼-皮克病 C1 型（NP-C1）是一种儿童痴呆症。一种基于 mRNA 的基因疗法可恢复 NPC1 基因突变导致的蛋白质缺乏症，是一种潜在的治疗方法。要恢复 NP-C1 患者的神经功能，治疗用 mRNA 必须进入大脑。然而，裸mRNA容易被循环核糖核酸酶消化，无法穿过血脑屏障（BBB）。细胞外载体（EV）是蛋白质和核酸等生物分子的天然纳米载体。 方法利用基因工程技术在HEK293细胞中构建稳定过表达的CXCR7；利用纳米颗粒追踪分析（NTA）和透射电子显微镜（TEM）表征CXCR7-EVs的大小、数量和形态；利用转录组分析、RT qPCR和WB分析研究CXCR7-EVs对OA软骨细胞的作用机制；利用荧光成像技术评估CXCR7-EVs对OA软骨细胞的作用；最后，通过体外和动物模型评估了CXCR7-EVs对骨关节炎的治疗效果。结果：NTA结果表明，CXCR7-EVs的平均粒径为178.7 nm（± 3.0 nm），纳米颗粒数为1.44 × 10 ^ 10颗粒/毫升，TEM显示CXCR7-EVs呈现典型的盘状形态；荧光成像显示CXCR7-EVs能被软骨细胞有效吸收；转录组分析结果表明CXCR7-EVs能通过显著增加软骨细胞中chi3l1的表达发挥软骨保护作用。WB、RT qPCR和组织学评估结果表明，CXCR7-EVs能有效缓解SDF1处理后软骨细胞的炎症反应，促进OA大鼠模型软骨组织的修复和再生。关节内注射过表达的 CXCR7-EVs 可有效穿透软骨基质，显著促进 KOA 大鼠模型的软骨修复。研究结果表明，CXCR7-EVs 是一种治疗骨关节炎的有效方法。Gopalakrishna Iyer赞助商展览、海报展和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00 引言使用酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）靶向野生型表皮生长因子受体（EGFR）从未在大多数癌症中取得预期的成功，这些癌症在很大程度上依赖于表皮生长因子受体。我们以前曾研究发现，一种新型 lncRNA 会导致表皮生长因子受体（EGFR）剪接变体异构体 D（IsoD）过度表达，从而影响表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）的内在敏感性。我们还证实，在对 TKI 敏感的患者来源培养物中，这种蛋白会分泌到细胞外囊泡 (EV) 中，而且表皮生长因子受体-TKI 敏感细胞的内在敏感性可通过这些表达 IsoD 的 EV 转移到耐药株。因此，本研究旨在研究外泌体表皮生长因子受体 IsoD 作为辅助药物，使表皮生长因子受体驱动的癌症对表皮生长因子受体-TKI 靶向敏感。用 Zeocin 挑选稳定表达 IsoD 的细胞系，用空 pBob 载体感染的 293T 作为对照（293T-pBob）。293T-IsoD 株系表达了高水平的 IsoD，IsoD 被包装并分泌到这些株系产生的外泌体部分中。使用 50 kDa Amicon® Ultra-15 离心过滤装置纯化外泌体，然后将其转移到靶向抗性表皮生长因子受体（EGFR）驱动的癌系上，并与不同的 EGFR-TKIs 联合处理。细胞活力将使用 CellTitre-Glo® 发光测定法进行评估。为了保持一致性，我们使用 Zetaview 验证了 EV 的大小和纯度。所有实验中 IC50 值的计算都是基于剂量反应曲线，在每种情况下使用 10 种不同的药物剂量。EV中的表皮生长因子受体IsoD是转移多种癌症和药物表型的必要条件和充分条件。我们提出了一种新的治疗策略，使用含有 EGFR IsoD 的外泌体作为辅助药物，将 TKI 疗法的使用范围扩大到 EGFR 驱动的癌症。Scott Tsai赞助商展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 号展厅，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00细胞外囊泡 (EVs) 由于清除速度快、半衰期短，其变革性影响和治疗潜力在体内逐渐减弱[1]。细胞外囊泡是分泌到细胞外环境中的脂质膜结合颗粒，其中含有用于细胞间通讯的脂质、蛋白质和核酸[2]。虽然人们对基于细胞外小泡的治疗应用的认识有了长足的进步，但在有效递送系统方面仍存在文献空白[3]。目前的方法面临着一些限制，如 EV 稳定性差、在靶区的滞留率低以及 EV 释放不受控制，这阻碍了这些疗法从实验室到临床的转化。 4) 总结/结论对 EV 异质性的不完全了解凸显了合成方法（如我们的 Craftgen@EV）在功能筛选和将特定载体加载到 EV 亚型上的潜力。参与 HLA 和 T 细胞受体相互作用的 EV 往往是大型 EV，这一发现为这一领域的未来研究提供了重要启示。孙明浩，副主任 Mafalda Cacciottolo，首席科学家 李雨佳，高级科学家 Mahrou Sadri，高级科学家 Michael LeClaire，助理研究员 David Tran，首席科学官 Kristi Elliott赞助商展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日 12：00 PM - 2:00 PMDuchenne 肌营养不良症（DMD）是一种严重的进行性 X 连锁疾病，会影响骨骼肌和心肌，严重缩短预期寿命。治疗 DMD 的主要策略是使用反义寡核苷酸 (ASO) 来排除外显子，从而使 DMD 蛋白的功能得到部分恢复。在过去 6 年中，美国食品与药物管理局已批准了 4 种外显子撇除药物。反义药物面临的主要挑战是，由于不能很好地输送到靶组织，因此疗效有限。据估计，只有 1%的反义药物能到达正确的细胞区，因此限制了功能的恢复。为了克服靶向限制，我们利用 StealthXTM 技术在外泌体表面设计了肌肉靶向分子。首先，用远红荧光染料对携带靶向分子的外泌体进行染色，然后静脉注射到野生型Balb/c雌性小鼠体内，结果显示注射后24小时在下肢检测到标记的外泌体。值得注意的是，除了预期的清除途径（肾脏和肝脏）外，携带肌肉靶向分子的外泌体在任何其他组织中都未被检测到。为了进一步评估将外泌体用作靶向递送工具的可能性，将荧光标记的ASO装入携带肌肉靶向分子的外泌体中，然后静脉注射到小鼠体内。有趣的是，在小鼠的下肢也检测到了标记的 ASO。进一步的剂量研究表明，通过静脉注射重复给药能更好地靶向下肢肌肉细胞，并且在给药 3 次后能观察到靶向效应的累积。总之，这里收集的数据有力地表明，Capricor 开发的 StealthXTM 技术有可能与目前的疗法搭配使用，从而有效地向肌肉输送药物，改善功能的恢复：多形性胶质母细胞瘤（GBM）恶性程度极高，主要是由于O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）引起的。该基因是导致癌细胞耐药的主要原因。外泌体目前被认为是最有前景、最适用于临床的医疗工具。由于外泌体具有高亲和力，富含蛋白质和核酸，大小仅为纳米级，非常适合作为药物载体进行治疗：2) 方法：本研究的重点是以基因工程模式设计和功能验证表达纳米抗体的工程靶向外泌体，这些纳米抗体具有亲和性、特异性和功能鉴定性。它在外泌体膜外侧实现了靶点特异性效应。此外，工程外泌体同时携带核酸药物/化疗药物，外泌体携带的核酸药物通过调节 MGMT 的表达，降低 GBM 细胞对 TMZ 的耐药性：首先，利用外泌体吸收试验评估药物吸收效率非常重要。用工程外泌体处理 GBM 细胞系 U87 和原代星形胶质细胞不同时间点。可以发现，与星形胶质细胞相比，U87 细胞对工程外泌体的吸收率更高，这表明工程外泌体对 GBM 细胞具有靶向特异性。我们进一步进行了波长分析，以确认工程外泌体成功载入了TMZ。我们发现TMZ在320纳米处有一个峰值，而在工程外泌体组中没有发现峰值。然而，可以看到 TMZ@ 工程外泌体在 320 纳米范围内有轻微的升高，这表明 TMZ 成功地载入了工程外泌体：这些结果表明，工程外泌体可被修饰并进一步载入TMZ，从而提高其作为靶向疗法在未来临床应用中的潜力。 我们研究了诱导大磷细胞吞噬对细胞摄取中空粒细胞的影响。激活表皮生长因子受体（EGFR）诱导 A431 细胞的大吞噬作用，增强了细胞对中空蛋白的摄取，表明癌症相关大吞噬受体及其激活在细胞中空蛋白摄取和细胞间通讯中的关键作用。在实验条件下，R8-MVs 有效地提高了细胞对大核吞噬标志物--FITC-葡聚糖（70 kDa）的摄取，而大核吞噬抑制剂之一的 5-（N-乙基-N-异丙基）氨基苯甲酸盐会降低 R8-MVs 的摄取。我们在此成功地发现，大蛋白细胞吞噬作用是提高细胞摄取 MVs 的关键，而对 R8 肽的修饰可显著提高基于 MVs 的细胞内递送。实验室主任 Gibeom Kim1，高级研究员 Inkyu Lee1,3，首席执行官 Gi-hoon Nam1,2，教授 In-San Kim3,41研究与开发部，SHIFTBIO INC、2Department of Biochemistry & Molecular Biology, Korea College of Medicine, Seoul, South Korea, 3KU-KIST Graduate School of Converging Science and Technology.赞助商展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00引言：本研究深入研究了细胞外囊泡（EVs）的新型工程学，引入了先进的 EV 分选图案（ESM），彻底改变了将天然配体和货物分子整合到 EVs 上的方法。我们发现了天然配体跨膜结构域（TMD）中对EV分选至关重要的关键氨基酸序列，从而创建了一种优于现有技术的高效ESM支架。此外，我们还通过ESM在膜蛋白、分泌蛋白、转录因子和核酸中的应用实例，展示了ESM的适应性。方法：我们的方法包括通过Western印迹（WB）、JESS系统和ELISA表达水平评估EV货物分拣效率。纳米粒子跟踪分析（NTA）和动态光散射（DLS）用于EV的特征描述，同时WB检测EV/非EV标记物，冷冻透射电子显微镜（Cryo-TEM）用于纳米粒子分析。结果：在我们的研究中，我们首先阐明了TMD在天然EV相关配体中对EV分选的关键作用，其作用超过了外质/胞质结构域，并通过随机突变这些TMD构建了一个高效的支架。其次，我们强调了EV货物分拣所必需的关键氨基酸序列特征，即ESM。第三，我们通过基于人工智能的室内研究确定了ESM及其伙伴的结合序列，并通过与CD9和CD81的相互作用进一步阐明了ESM的分拣机制。最后，我们应用ESM技术设计了用于蛋白质和核酸多重装载的EVs，证明了其针对以前无法治疗的途径的潜力。这项研究不仅强调了工程化 EVs 在重新定义药物输送和疾病治疗领域的潜力，还重申了创新方法在推动医学科学发展方面的重要性。ESM平台的特异性、多功能性和创新性应用允许开发复杂的治疗策略，标志着靶向给药领域的重大进展。2024 年 5 月 11 日 12:00 - 2:00 PMA 气道基底干细胞衍生的细胞外囊泡：一种有前景的成纤维细胞调控策略引言气道或肺间质纤维化是呼吸系统疾病中常见且重要的病理变化，其治疗仍是一项挑战。气道基底干细胞（BSC）和成纤维细胞在组织修复和再生中发挥着关键作用。 特别是，癌细胞衍生的 EV 可调节其新生肿瘤微环境，还可通过全身循环调节转移龛。然而，根据癌症类型或致癌转化的生物分布尚未得到很好的研究。在这项研究中，我们揭示了来自不同 RAS 和 RAF 突变状态的结直肠癌和肺癌细胞的 EVs 分布情况：以下细胞系用于分离 EV：结直肠癌细胞系 Caco-2（野生型）、WiDr、HT29（BRAF 突变型）、LoVo、HCT116（KRAS 突变型）；肺癌细胞系 H292、H1703（野生型）、H358、A549（KRAS 突变型）。细胞在含 EV 的去 FBS 培养基中培养 3 天。收集的条件培养基经 100 kDa 过滤浓缩，然后用尺寸排阻色谱法分离。用亲脂性荧光染料 DiR 标记 EV，然后用尺寸排阻色谱法去除未标记的染料。DiR-EVs （5.0E+09 颗粒）经尾静脉注射到 BALB/c 小鼠体内。IVIS成像系统测量了EVs在10分钟、1-、4-、8-和24小时的生物分布动力学。基于质谱的定量蛋白质组学揭示了EVs独特的表面蛋白质组特征：结果：总的来说，在肝脏和脾脏中，所有的EVs在1小时时间点的检测量最大，在24小时时间点的检测量最大。令人印象深刻的是，结直肠癌细胞衍生的EVs相对富集于肠道，而肺癌细胞衍生的EVs则富集于肺部，这表明EVs与同胞细胞之间存在同亲作用。通过定量蛋白质组分析，根据细胞来源和致癌突变（RAS 和 RAF）确定了不同的整合素分布。结合层粘连蛋白的 ITGB4 和 ITGA6 在突变细胞系的 EVs 中明显富集。将EVs与整合素抑制剂肽联合注射显示了EVs在体内的不同分布，这意味着整合素是组织特异性EV在全身循环中去向的关键调控因子：我们首次发现了不同细胞来源和致癌突变状态下 EVs 的不同动力学分布。我们的研究结果表明，EVs 可受其表面整合素修饰的影响而进入特定组织。Andrea Galisova 博士、Jiri Zahradnik 博士、Daniel Jirak 博士赞助商展览、海报展示和午餐（周六），展厅-14-15 室，2024 年 5 月 11 日，中午 12:00 - 下午 2:00 简介：针对特定癌症生物标志物的功能化细胞外囊泡 (EV) 可作为多重诊断工具或靶向药物输送载体。我们介绍了纳米抗体-标签-配体表面系统 NaTaLi，在该系统中，纳米抗体以近乎共价的亲和力与标签特异性结合，并显示在 EVs 表面。然后，只需简单混合，就能将 EV 与任何感兴趣的标记配体（如肿瘤穿透肽）结合在一起。此外，该系统还使用各种荧光标记，可进行多色编码。最重要的是，NaTaLi 允许一个工程细胞系产生可与许多不同靶向单元耦合的 EVs，从而大大减少了检测新机制的工作量和时间。方法：采用标准超速离心法（100,000g；2 小时）结合超滤法（100kDa）分离表面稳定表达抗 ALFA 标记纳米抗体的 HEK293 细胞的 EVs。从细菌中分离纯化出含有 ALFA 标记的荧光蛋白 mNeonGreen/dTomato。标记蛋白质与细胞/EV-纳米抗体共同培养（1 小时，RT），形成 NaTaLi 系统。通过荧光显微镜和表面等离子体共振（SPR）检测标签与纳米抗体-细胞的结合情况。根据 MISEV 指南（Western 印迹和 NTA）对显示 ALFA 纳米抗体的 EV 进行了表征。结果：细胞表面显示的纳米抗体特异性地结合了标记的蛋白质，细胞表面定位的mNeon/dTomato荧光信号表明了这一点。在活细胞上测得的结合常数（Kd）估计为 40nM (SPR)。NaTaLi EVs 显示了预期大小（169.7±3.4nm）和 EV 标记（CD81、Alix）的表达。经评估，标记蛋白（40nM）对 EV 纳米抗体的 EC50 为 3E09 EV/mL。对照组标记蛋白未与 EV-nanobody 发生任何结合，这证实了 NaTaLi 系统的特异性。我们还制备了几种肿瘤靶向肽，用于进一步的多色癌细胞靶向研究。标签蛋白与细胞/EV-纳米抗体的结合具有很强的特异性。 方法：用REG-1将抗KRAS ASO或immRNA载入RBCEV。研究人员对载入 EV 的生物物理和生物化学特性（包括大小、形状、表面电荷、载入效率和蛋白质组成）进行了表征。在多个携带 KRAS 突变的癌细胞系和患者衍生的器官组织中评估了 EV 组合的体外抗癌效果。结果：使用 REG-1 试剂将 ASO 和 immRNA 有效地载入 RBCEV，粒径和 EV 形态没有发生显著变化。RBCEV能有效地将这些核酸递送到癌细胞中。装载了 KRAS ASO 的 RBCEV 能有效抑制 KRAS 突变体，而野生型 KRAS 基因细胞则不受影响，从而导致特异性肿瘤细胞死亡。此外，我们还证明，RBCEVs 释放的 KRAS ASO 和 immRNA 能协同激活 RIG-I，从而在体外和体内诱导 KRAS 依赖性癌症中的肿瘤细胞死亡和 I-IFNs 上调，且无任何可观察到的不良反应。博士后研究员 Golnaz Morad、Brenda Melendez、Sarah Johnson、Manoj Chelvanambi、Matthew Wong、Ashish Damania、Nadim Ajami、Jennifer Wargo介绍性发言和口头报告：OS21 癌症免疫疗法，全体会议 1，2024 年 5 月 11 日，下午 4:00 - 5:35简介：最近的试验证明了粪便微生物群移植（FMT）在增强癌症免疫疗法（尤其是免疫检查点阻断疗法（ICB））反应方面的益处。然而，由于筛选标准的严格性和所需粪便材料的数量，FMT 的临床应用受到了限制。我们的研究旨在确定 FMT 材料中的活性成分，以开发基于微生物组的可扩展策略，改善对 ICB 的反应。我们假设粪便（滤液）和粪便细胞外囊泡（fEVs）中的微生物衍生物可以增强对 ICB 的反应：我们制备了对 ICB 完全应答（CR）或无应答（NR）的黑色素瘤患者的粪便滤液。随后使用密度梯度超速离心法分离出粪便滤液，并通过电子显微镜、纳米颗粒追踪分析和标记物评估对其进行表征。无胚芽的 C57BL/6 小鼠口服 CR 和 NR 患者的 FMT、滤液或 fEV。经过五天的移植期后，小鼠皮下注射 BP 黑色素瘤肿瘤细胞并接受 ICB 治疗。使用卡尺测量肿瘤体积。通过数字空间谱分析（DSP）评估肿瘤和结肠免疫概况。质谱法用于鉴定滤液和 fEVs 的成分：结果：使用 CR FMT、滤液和 fEVs 治疗可显著改善对 ICB 的反应，这表明粪便滤液和 fEVs 可能足以诱导对 ICB 的反应。相反，使用 NR FMT、滤液和 fEVs 治疗则反应不佳。肿瘤和结肠样本的 DSP 显示，先天性免疫细胞和 B 细胞系的增加与 CR 滤液处理有关。CR滤液和fEVs的蛋白质组学分析表明，免疫球蛋白和来自Bacteroides菌种的细菌蛋白富集，这表明特定细菌菌种和B细胞反应参与了滤液/fEV诱导的黑色素瘤对ICB反应的增强：总之，这些研究表明，FMT 中的 EV 部分可能会改善对 ICB 的反应，但还需要进一步的研究来确定最佳治疗靶点并深入了解其机理。Tatiana Cuellar-Gaviria、Ethan Stamas、Jad Hussein、Diego Alzate-Correa、Yuyan Yu、Cintia Gomez、Heather Powell、Daniel Gallego-Perez、Natalia Higuita-CastroIntroduction Talk and Oral Session：OS21 癌症免疫疗法，全体会议 1，2024 年 5 月 11 日，下午 4:00 - 5:35简介：神经纤维瘤病1型（NF1）是一种常染色体显性遗传疾病，由NF1基因突变导致神经纤维瘤蛋白功能丧失引起。神经纤维瘤蛋白功能缺失会导致 RAS 通路过度激活，从而导致细胞增殖失控和肿瘤发生。NF1 患者罹患恶性周围神经鞘瘤（MPNST）的几率较高，这种肿瘤侵袭性强，存活率低。由于 NF1 基因体积庞大，使用病毒载体治疗 NF1 的基因疗法受到限制。 42 利用 PS 亲和法大规模纯化细胞外囊泡的方法的开发阿夫申伊拉姆博士、增田正太郎博士、鬼塚花博士、池川亮博士、泽尻英龙博士、泽尻英龙博士、泽尻英龙博士、泽尻英龙博士、泽尻英龙博士、泽尻英龙博士Ryo Ukekawa, PhD.Takahiro NishibuPT03.43 从小鼠粪便上清液中分离细菌胞外囊泡的适用方法的开发魏书进，邢万里教授PT03.44 EV纯度是否会影响下游功能？46 EV富集方案的演变：从最小信息到蛋白质组学Felicity Dunlop博士、Shaun Mason博士、Taeyoung Kang博士、Suresh Mathivanan教授、Aaron Russell教授PT03.47 ExoCAS-2：使用磁珠通过阴离子交换快速纯化分离外泌体Jaeeun Lee学生PT03.48 ExoFilter：在连续流中使用正电荷网状过滤器大容量提取EV金容宇学生PT03.49 miRQuick：PT03.49miRQuick：一种创新的基于电荷的EV分离方法，可从液体样本中高效提取EV-miRNA学生 Lee KangminPT03.50 高通量分离和分选纳米颗粒负载的外泌体博士 Hye Sun Park, Taewoong Son, Mi Young Cho, Hyunseung Lee, Eun Hee Han, Dr. Kwan Soo HongPT03.51高通量分离和分选纳米颗粒负载的外泌体博士 Hye Sun Park, Taewoong Son, Mi Young Cho, Hyunseung Lee, Eun Hee Han.Kwan Soo HongPT03.52 使用Exoview平台研究透明质酸酶对类风湿性关节炎和骨关节炎患者滑液中细胞外囊泡(EVs)四蛋白表达的影响Edveena Hanser夫人、Prof. Dr. Diego KyburzPT03.53 使用Exoview平台研究透明质酸酶对类风湿性关节炎和骨关节炎患者滑液中细胞外囊泡(EVs)四蛋白表达的影响Dr.Diego KyburzPT03.54 用于后续生物学研究的具有双阳性膜蛋白的细胞外囊泡的分离和富集林慧娴博士，刘春晨博士，李波教授，郑磊教授PT03.55 基于分子印迹聚合物的人工肽（MIPap）可在血清中分离星形胶质细胞特异性细胞外囊泡（asEV）Yong Shin，Eun Jae Lee教授PT03.56 亲和捕获和释放sEV的新策略段伟教授，Rajindra Napit先生，Rocky Chowdhury博士，Satendra Jaysawal先生PT03.57 优化分离方法以获得高产量高纯度的尿液细胞外囊泡Beatriz Martín-Gracia, 优化分离方法以获得高产量高纯度的尿液细胞外囊泡Håkon Flaten, 优化分离方法以获得高产量高纯度的尿液细胞外囊泡Krizia Sagini, 优化分离方法以获得高产量高纯度的尿液细胞外囊泡Alicia LlorentePT03.58 在中小规模三分离生物反应器中利用系列纯化方法优化从原代细胞中高通量分离细胞外囊泡Dr.赵铮博士PT03.59 用于捕获小细胞外囊泡的柱状交错电极艾玛-莫里斯小姐、卡尔-哈桑副教授、克雷格-普利斯特教授、关斌博士、蕾妮-戈勒姆博士PT03.60 细胞外囊泡捕获的方案优化PT03.60 细胞外囊泡捕获的方案优化60 细胞外囊泡分离和表征的方案优化：超速离心、尺寸排阻色谱和带电核珠色谱方法的评估Farha Ramzan博士、Hui Hui Phua博士、Vidit Satokar博士、Shikha Pundir博士、Anastasia Artuyants博士、Cherie Blenkiron博士、Chris Pook博士、Mark Vickers教授、Ben Albert博士PT03.62 血浆细胞外囊泡的快速高效分离平台：EV-FISHER潘伟伦博士、郑磊教授、陈金祥教授、李波教授PT03.63 唾液细胞外囊泡分离方法对生物标志物检测稳健性的影响Jérémy Boulestreau博士Sys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma, Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière, CS 40182, 34184, Montpellier, CEDEX 4, France、Dr Laurence MolinaSys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma, Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière, CS 40182, 34184, Montpellier, CEDEX 4, France, Alimata OuedraogoSys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma, Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière、法国蒙彼利埃 CEDEX 4, 34184, CS 40182, Louen LaramySys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma, Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière, CS 40182, 34184, Montpellier, CEDEX 4, France, Ines GrichSys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma、Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière, CS 40182, 34184, Montpellier, CEDEX 4, France, Dr Thi Nhu Ngoc VanSys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma, Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière, CS 40182, 34184, Montpellier, CEDEX 4, France；SkillCell, Montpellier, France, Dr Franck MolinaSys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma, Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière, CS 40182, 34184, Montpellier、Dr Malik KahliSys2Diag UMR9005 CNRS/ALCEN, Cap Gamma, Parc Euromédecine, 1682 rue de la Valsière, CS 40182, 34184, Montpellier, CEDEX 4, FrancePT03.64 利用离子交换色谱法对分馏粒子群的 EV 生物物理特性进行单粒子多重分析PT03.Takanori Ichiki 教授、Chiharu Mizoi 教授、Kento Toyoda 教授、Naohiro Seo 教授。 一些小动物研究表明，绒毛膜羊膜炎引起的损伤具有治疗潜力。目的：我们将绵羊作为大型动物模型，旨在评估在绒毛膜羊膜炎的实验环境中静脉注射 hAEC-EV 对胎儿生理和器官结构的影响。在妊娠 99/152 天（dGA）时，通过手术将动脉、静脉和羊膜导管植入胎羊体内，并与压力传感器连接，以进行连续的宫内生理记录。胎儿被随机分为三组：1）对照组；2）损伤组；3）损伤+治疗组。第 2 组和第 3 组的胎儿通过静脉注射脂多糖（LPS）诱发绒毛膜羊膜炎。第 3 组接受静脉注射 hAEC-EV。第1组（对照组）接受生理盐水。对胎儿进行持续监测，直至113 dGA。结果表明：给予 hAEC-EV 后，血压、心率和动脉血氧饱和度无明显差异。肺泡厚度和上皮脱落（肺损伤指数）以及小胶质细胞活化（神经炎症和损伤指数）在LPS挑战后增加，但在服用hAEC-EV后减少：结论：生理参数的稳定性表明，胎儿急性暴露于 hAEC-EVs 是安全的。结论：生理参数的稳定性表明，胎儿急性暴露于 hAEC-EVs 是安全的。脑和肺损伤指数的降低表明，hAEC-EVs 具有治疗实验性绒毛膜羊膜炎的潜力。讲师：何聪1,2、邵光新2、李玉敏博士4、肖云博士5、孙波博士4、肖中党教授4、孙北成教授31江苏省妇幼保健院副院长、教授、博士生导师。江苏第二师范学院生命科学与化学学院生物功能分子江苏省重点实验室，南京；南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科，南京、3 安徽医科大学第一附属医院肝胆外科，合肥，中国； 4 东南大学生物科学与医学工程学院生物电子学国家重点实验室，南京，中国； 5 常州医科大学附属第二人民医院普外科，南京，中国； 6 南京医科大学附属第二人民医院肝胆外科，南京，中国； 7 南京医科大学附属第二人民医院肝胆外科，南京，中国； 8 南京医科大学附属第二人民医院肝胆外科，南京，中国； 9 南京医科大学附属第二人民医院肝胆外科，南京，中国； 10 南京医科大学附属第二人民医院肝胆外科，南京，中国。南京医科大学附属常州第二人民医院普外科：2024年5月12日上午10:30-11:30，全体会议1，治疗（晚间休息）：免疫抑制性肿瘤微环境（TME）削弱了肿瘤浸润淋巴细胞的效应功能，这给HCC的免疫治疗带来了挑战。细胞外囊泡（EVs）作为功能性细胞间通讯工具，能够通过呈现抗原和辅助刺激因子诱导免疫反应：本研究中，我们设计了EVs，通过HN3-GPC3轴向GPC3过表达的HCC癌细胞特异性递送编码协同刺激因子OX40L的mRNA，以原位调控TME并增强肿瘤杀伤力。在我们之前的研究中，HN3 scFv 与 LAMP2b 蛋白（N-末端）融合以获得特异性靶向效率。在此，我们将RNA结合蛋白LA7e与LAMP2b的C端连接，并在OX40L基因的3'-UTR中插入Box C/D元件，假设编码OX40L的转录本可以通过LA7e RNA结合蛋白与Box C/D元件之间的相互作用结合到EV中：结果：我们的数据表明，我们成功构建了携带OX40L mRNA的工程EVs，它具有GPC3+ HCC癌细胞靶向能力，同时也验证了OX40L在靶向HCC细胞中的表达。此外，在体外共培养模型中，靶向 HCC 细胞中 OX40L 的表达分别促进了 CD8+/CD4+T 细胞中细胞因子的分泌，并增强了 CD8+T 细胞的活化和增殖。此外，工程EVs通过增加Teff的比例和减少Treg的比例，显著降低了HCC肿瘤小鼠的肿瘤生长：总之，我们的研究结果证实了工程EVs可以传递成本刺激mRNA来调节肿瘤微环境，从而提高抗肿瘤免疫反应，这预示着未来HCC免疫治疗将成为一种天然的新型传递系统。 在猕猴艾滋病模型中，我们发现血浆 EV U6 小核 RNA（snRNA）与急性感染病毒峰值之间存在一种未报道的关联。作为主要位于细胞核中的剪接体成分，U6 snRNA 只会在细胞质中与核糖核蛋白短暂结合。目前对 U6 snRNA 在细胞核、细胞质和 EV 之间穿梭的了解还很有限，尤其是在 SIV 感染期间。因此，我们旨在探索 U6 snRNA 及其相关蛋白机制在细胞组分和 EVs 中的关联：2) 方法：用 SIV B670 和 SIV 17E-Fr 感染 CEMx174 细胞。感染后 3 天收集细胞培养基，通过尺寸排阻色谱和超滤进行 EV 分离。同时进行培养基处理对照，以评估培养基成分可能造成的污染。根据 MISEV2018 对 EVs 和 MCs 进行了全面鉴定。收集 SIV 感染和未感染的 CEMx174 细胞，并将其分成细胞质和细胞核部分。使用 RT-qPCR 评估 EVs、细胞质和细胞核中的 U6 和 U1 snRNA 水平。通过纳米流、蛋白质组学和 Western 印迹检测了 EVs、细胞质和细胞核中的蛋白质分析物：3）结果：在 HIV 感染期间，我们观察到 U6 snRNA 的独特分布模式，其特点是在细胞核中减少，而在 EVs 中增加。在 SIV 感染期间，我们还在这三个组分中发现了不同的蛋白质分布模式。此外，在受 SIV 感染的细胞核和细胞外液中，与剪接体通路相关的蛋白质也发生了变化。感染 SIV 后，EV 和细胞中与 U6 机制相关的蛋白质也发生了变化。4) 小结：在 HIV 感染期间，U6 snRNA 从细胞核到 EVs 的明显易位似乎受到细胞内 U6 snRNA 浓度和与剪接机制相关的蛋白质的影响。U6 snRNA和RNA剪接相关蛋白的改变表明了潜在的调控作用，也可能为逆转录病毒感染建立了独特的特征。Yeonho Choi1韩国首尔高丽大学生物医学工程系；2韩国九老区高丽大学韩国人工器官中心；3韩国九老区高丽大学胸心血管外科；4韩国首尔Exopert公司；5韩国九老区高丽大学内科；6韩国首尔高丽大学生物医学工程学院口述会议：2024 年 5 月 12 日上午 10:30 - 11:30，105-106 厅，疾病生物标志物（晚间开场）本摘要介绍一种利用液体活检检测蛋白质突变的新技术，该技术通过纳米光谱和深度学习分析血浆外泌体：外泌体在血浆中含量丰富，携带着来自原细胞的完整蛋白质，是一种很有前景的生物标记物。事实证明，这种技术在区分健康对照组（n = 17）、表皮生长因子受体野生型（n = 14）和表皮生长因子受体突变型（n = 20）的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的表皮生长因子受体（EGFR）突变方面特别有效。其目的是监测突变状态，包括主要的表皮生长因子受体突变，如 L858R、E19del、L858R + T790M 和 E19del + T790M：研究小组利用拉曼光谱获取了外泌体突变蛋白结构变化的分子信息。为了从复杂的拉曼光谱中提取突变蛋白质的独特特征，研究团队开发了一种分类算法，其中包含两个深度学习模型。该算法分为两步，分别用于野生型与突变、原发性突变（E19del、L858R）与继发性突变（+T790M）的鉴别诊断：我们的方法通过细胞、患者血浆和患者监测三个不同步骤进行了验证。首先，利用该模型对细胞源性外泌体中的野生型蛋白和突变型蛋白进行了分类，准确率很高（AUC 0.99）。其次，从非突变个体中识别出突变蛋白患者（n = 23），AUC 为 0.85。最后，我们通过定期监测测试明确证实了早期检测的潜力。我们对原发性突变患者进行了随访，以检测发生继发性突变时的差异，结果发现，发生继发性突变时，突变值是原发性突变的 2.47 倍：本研究提出了一种通过液体活检提高蛋白质突变检测诊断准确性的新方法。 结果我们发现了一个由 182 种蛋白质（ADAM10/STEAP23/STX7）和 52 种脂类（PS/PIPs/Hex2Cer/PAs）组成的高度保守小组，深入调查了循环 EV 的标志性特征和生物学途径，以及它们在循环系统中不同 EV 亚群（CD81+/CD63+/CD9+）中的保守性。我们还绘制了表面组多样性图谱，确定了 126 种在 EV 表面保守的蛋白质。这项多组学研究还揭示了循环 EV 中保留的核心蛋白和脂质的纳米级脂质-移植组合。我们进一步建立了一套 42 种蛋白质和 114 种脂类的特征，作为非 EV 颗粒的标志性特征；重要的是，利用集合机器学习，我们提交了 ADAM10 和 PS(36:1)，作为保守的 EV 生物标记，可以精确区分 EV 和非 EV 颗粒，并可用于直接跟踪血浆中的 EV 分离情况和评估其纯度水平。我们的研究还广泛覆盖了疾病队列中循环EV中的低丰度疾病蛋白，揭示了冠状动脉病理学的新见解：我们首次提供了人类循环EVs的高可信度蛋白质组和脂质组草案，确定了普遍的蛋白质和脂质特征。这些发现可以通过开源、免费的 Shiny 网络工具进行探索，并为研究界提供了一个宝贵的资源库，有助于他们更清晰地了解循环 EV 生物学。Hema Saranya Ilamathi博士1,2、Doste Mamand博士1,2、Anna Maria Zimbo3、Samir El Andaloussi博士1,2、Oscar Wiklander博士1,21瑞典胡丁格卡罗林斯卡医学院实验室医学系生物分子与细胞医学科、2Center for Cell Therapy and Allogeneic Stem Cell Transplantation (CAST)，Karolinska University Hospital，Stockholm，Sweden，3Department of Experimental and Clinical Medicine，Magna Graecia University of Catanzaro，ItalyOral Session：2024年5月12日上午10:30 - 11:30，109-110室，技术（晚间休息）引言细胞外囊泡（EVs）是一种具有潜在疾病诊断和治疗用途的纳米囊泡。将细胞外小泡用于治疗应用面临两个挑战：将其靶向作用点以及在细胞内有效传递药物载荷。我们小组最近的研究表明，通过对带有 Fc 片段的 EVs 进行工程设计，用抗体装饰其表面，可以实现高效的癌症靶向。EV一般通过内吞途径被细胞吸收。然而，内吞系统限制了药物或其他货物在细胞胞浆内的成功输送。病毒致病原通常被用来促进内吞逃逸，但它们与免疫反应风险的增加有关。方法通过重组技术设计出携带与正电荷或两性电荷氨基酸序列融合的四聚乙二醇蛋白的定制载体。我们用不同的定制载体转染 HEK 细胞，并通过切向流过滤从这些细胞中分离出 EVs。通过动态光散射测量了 EVs 的净电荷。然后根据 mNeonGreen 信号用流式细胞仪测量 EV 的吸收。为了监测内质体逃逸，我们使用了基于荧光素酶的 HEK 报告细胞。结果我们的数据表明，与携带正电荷氨基酸的EV相比，两亲性氨基酸序列的细胞EV摄取量增加了。此外，我们还发现带两性电荷的电动体能有效地逃逸内体。与未修饰和带正电荷的电动体相比，带两性电荷的电动体的逃逸效率分别提高了 15 倍和 10 倍以上。我们的工作表明，改变电荷和亲油性可促进内体的高效逃逸和货物分子的成功递送。 结论我们的工作表明，设计具有较高正电荷和亲油性的 EV 可促进从内体区室的高效逃逸。我们预测，内体的酸性环境会进一步增强 EVs 的净正电荷，EVs 的亲脂区域会与内体膜融合，并将货物释放到细胞质中。Andrea Capuano博士1、Meia Numan2、Thomas Hankemeier教授11荷兰莱顿莱顿大学，2EXIT071 B.V.，荷兰莱顿口腔会议：技术（晚间休息），2024年5月12日109-110室，上午10:30 - 11:30引言虽然超速离心和微过滤等技术通常用于确保细胞外囊泡(EVs)的高纯度，但基于电泳迁移率的分离策略，特别是耗竭区等渗电泳，可以提供更高的纯度。 这是因为电动体具有基于电荷和大小的独特电泳迁移率，在样品制备过程中，可以利用这一特性将电动体与带电污染物分离开来。方法通过利用耗尽区等渗电泳（dzITP）原理，我们采用了一种方法，用离子耗尽区取代等渗电泳中常用的尾电解质，形成阴离子无法穿过的屏障。因此，当施加外部电场时，被困在离子贫化区和前导电解质之间的带负电荷的分析物会根据其电泳迁移率的不同而集中在微流体通道中占据不同位置的条带上，从而反映出经典等速电泳的功能。DzITP 是在我们的合作伙伴 SINTEF（挪威奥斯陆）生产的新型硅玻璃微芯片上实现的。 结果我们展示了同时浓缩和分离来自细胞培养物（HEK 293 和人类神经母细胞瘤细胞系）和血浆的外泌体。有趣的是，尽管这项研究中使用的外泌体样本是通过基于密度和大小的技术（如切向流过滤和超速离心）预先纯化的，但 dzITP 仍能进一步将它们与蛋白质或已裂解外泌体的残留物等污染物分离。事实上，大约 70 分钟后，微流体通道中的 EVs 就会与样品污染物集中在一个独立的区域。此外，在对被分离的 EVs 的带宽进行评估（基于荧光）后，该装置中的 EVs 浓度达到了约百万倍，与文献中描述的同类装置一致。 结论 总之，在这项工作中，我们使用 dzITP 证明，即使经过超速离心和切向流过滤预处理，EV 样品（来自细胞培养物和血浆）中仍含有污染物残留物，这些残留物的电泳迁移率高于 EVs，而我们的技术可以在空间上分离它们。因此，与最先进的方法相比，我们的设备可以进一步纯化 EV，同时将样本浓缩百万倍。 瑞典哥德堡大学 Sahlgrenska 学院医学研究所风湿病与炎症研究部，瑞典哥德堡 41346 2. 瑞典斯科夫德大学生物科学学院系统生物学研究中心，瑞典斯科夫德 SE-54128，穆罕默德-纳瓦兹博士1。哥德堡大学 Sahlgrenska 学院医学研究所风湿病与炎症研究部，瑞典哥德堡 41346，兼职教授 Sepideh Heydarkhan-Hagvall2。瑞典斯科夫德大学生物科学学院系统生物学研究中心，瑞典斯科夫德 SE-54128，Jane Synnergren 教授2。瑞典斯科夫德大学生物科学学院系统生物学研究中心，瑞典斯科夫德 SE-54128 3.哥德堡大学 Sahlgrenska 学院医学研究所分子与临床医学系，瑞典哥德堡 41345，Hadi Valadi 副教授1。系风湿病学和炎症研究，医学研究所，Sahlgrenska 学院，哥德堡大学，哥德堡 41346，瑞典PT05.18 金属蛋白酶 ADAM10 在细胞外囊泡的分泌、组成和靶向中的作用MSc Christopher C. Reimann, MSc Feizhi Song, Dr. rer. nat.Dipl.Biol. Hermann C. Altmeppen, Dr. Lesley Cheng, Prof. Markus Glatzel, Prof. Marina Mikhaylova, Prof. Andrew F. HillPT05.20 小细胞外囊泡释放的 "撕裂袋机制 "通过整体释放的大细胞外囊泡的限制膜破裂Tamás Visnovitz博士, Dorina Lenzinger女士, Anna Koncz女士, Tünde Bárkai女士, Dr. Krisztina Vukuk博士.Krisztina V Vukman 博士、Alicia Galinsoga 女士、Krisztina Németh 博士、Kelsey Fletcher 女士、Péter Lőrincz 博士、Gábor Valcz 博士、Edit I Buzás 教授PT05.23β-catenin 通过调节衰老调节小细胞外囊泡的生物生成和分泌姜泰英博士PT05.24 RNA 结合蛋白24 RNA结合蛋白NPM1是外泌体机制的组成成分，通过与特定RNA分子结合控制mRNA分拣张凯翔同学1,2, 张颖同学1, 尹航同学1,21清华大学药学院, 北京, 中国, 2清华大学-北京生命科学中心, 北京, 中国PT05.25 糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白促进细胞膜运输并增强细胞外囊泡的产生赵彤研究员1，赵伟副研究员1，徐胜亚副研究员1，杨慕萱副研究员11北京泰瑞特生物科技有限公司PT05.26 利用 Micregen 的无细胞分泌物组技术平台生成的 AFSC 条件培养基的免疫调节作用与神经保护的联系Robert Mitchell 博士1、Andrew Parnell 先生1、Ben Mellows 博士1、Ketan Patel 教授1、Steve Ray 博士11Micregen 有限公司，英国雷丁Dr.Ruediger Gross, Hanna Reßin, Pascal von Maltitz, Dan Albers, Laura Schneider, Hanna Bley, Markus Hoffmann, Mirco Cortese, Dhanu Gupta, Miriam Deniz, Jae-Yeon Choi, Jenny Jansen, Christian Preußer, Kai Seehafer, Stefan Pöhlmann, Dennis R Voelker、Christiane Goffiniet, Elke Pogge-von Strandmann, Uwe Bunz, Ralf Bartenschlager, Samir El Andaloussi, Konstantin MJ Sparrer, Eva Herker, Stephan Becker, Frank Kirchhoff, Jan Münch, Janis A MüllerPlenary Session 1 and Featured Abstract, Plenary 1, May 9, 2024, 9：00 AM - 10:15 AM引言包括寨卡病毒和登革病毒在内的几种人类病毒病原体存在于人类体液中，但却很少通过性传播或口腔传播。一种可能的解释是精液和唾液中的细胞外囊泡 (EV)，它们已被证明能抑制黄病毒感染。我们在此提出，这些细胞外囊泡的抗病毒活性涉及与磷脂酰丝氨酸（PS）受体的竞争性结合。磷脂酰丝氨酸受体通常被用作 EV 的附着因子，也是细胞凋亡的感应器，一些病毒家族会利用这种现象进行所谓的 "病毒凋亡模仿"，从而导致病毒的吸收和随后的感染。我们利用 NTA 对它们进行了生物物理表征，并对 PS 的丰度（枪弹式脂质组学）和暴露量（珠子辅助和纳米流式细胞术）进行了量化。针对各种凋亡模拟病毒和已知使用其他附着模式的病毒进行了抗病毒活性测试。为了阐明 PS 对抗病毒活性的特异性，我们对暴露的脂质小叶进行了酶切修饰，并使用共聚焦显微镜对它们与 PS 受体的相互作用进行了成像。结果以寨卡病毒作为病毒凋亡模拟模型，我们发现所有使用来源的 EVs 都能抑制细胞系和原始组织的感染，而缺乏 PS 的合成对照囊泡则没有活性。 从EV标记物来看，CD40、CD42a、CD56、CD41b、CD31和CD49e在ECP周期与反应之间存在显著的交互作用，而HLA-DPDQDR、CD14、CD20和CD44在ECP后显著下调，CD8、CD44、CD142和CD146在PR与CR中的表达水平显著升高。Arunima Panda 女士、Ilaria Casari 夫人、Abir Halder 博士、Walid Abu Shawish 博士、Danielle Dye 博士、Krish Ragunath 教授、David Greening 教授、Marco Falasca 教授介绍性发言和口头报告：OT01 走向临床，全体会议 1，2024 年 5 月 9 日，上午 10:40 - 12:00引言胰腺癌（PC）是侵袭性最强的恶性肿瘤之一，发病率不断上升，致死率很高。胰腺癌的特点是缺乏早期症状、诊断延迟以及对常规化疗的耐药性，这使其具有挑战性。PC标记物Ca19.9缺乏效率和有效性。因此，早期检测和有效治疗是应对这一挑战的关键。癌细胞利用细胞外小泡（sEVs）进行细胞内交流并促进癌症进展。我们根据表型、生理和功能特征对来自 PC 和患者异种移植（PDX）细胞系的 sEVs 进行了表征。为了支持我们的功能性结果，我们进行了 CRISPR 基因敲除。我们收集了 30 名疑似 PC 患者和 14 名无症状患者的血浆样本。使用 PC 患者和年龄匹配的健康参与者的人体血液样本已获得伦理批准（珀斯皇家医院 RGS4208）。有趣的是，源自人类 PC 细胞系和 PDX 细胞的 sEVs 含有独特的载体，包括转移调节因子和对 PC 进展至关重要的关键信号分子。此外，我们对来自人类 PC 细胞系和 PDX 细胞系的 sEV 进行的蛋白质组学分析表明，参与肌醇合成和代谢的关键酶的表达量较高，其中包括转运体 SLC5A3。SLC5A3 在肌醇转运和生成 4,5-二磷酸磷脂酰肌醇等重要信号分子中发挥作用。SLC5A3 可作为 PC 的预后因子。我们的研究结果在PC的sEVs、PDX细胞系、PDX细胞系的基因敲除以及PC和健康参与者的血浆样本中得到了验证。结论SLC5A3等无性蛋白可作为潜在的PC生物标志物，并改善PC诊断的诊断前景：OT01 迈向临床，全体会议 1，2024 年 5 月 9 日，上午 10:40 - 12:00 引言螺旋藻（S. platensis，SP）是一种天然食用微藻，因其具有抗氧化、抗炎和免疫调节作用等多种有益特性而备受关注。然而，由于其微米级的尺寸导致皮肤难以吸收，以及可能引起皮肤过敏等问题，阻碍了其在皮肤病治疗中的应用。作为纳米级磷脂双分子层囊泡，SP 细胞外囊泡（SP-EVs）含有来自原始细胞的成分，有望继承 SP 的应用价值，用于皮肤病的治疗。本研究采用差速超速离心法分离 SP-EVs，并利用透射电子显微镜、原子力显微镜和动态光散射法测定其结构和大小。为了增强该系统的粘附性，SP-EV 被加入到羧甲基壳聚糖（CMCS）和海藻酸钠（SA）的混合物中，随后与基因素交联形成水凝胶复合物。为了确保最佳的生物安全性和粘附性能，我们从不同的浓度配比中选择了最终浓度为 0.04% 的基因素水凝胶，用于随后的细胞和动物实验。 结果我们的研究结果表明，用 SP-EVs 处理可有效缓解受 H2O2 刺激或暴露于紫外线照射的角质形成细胞中活性氧的生成、DNA 损伤和线粒体的改变。 O03 ESCRT-II 成分 VPS25 的突变改变了致死性新生儿脑病中细胞外小泡的处理Ioannis Isaioglou, Lama AlAbdi, Yossef Lopez de los Santos, Muhammad Tehseen, Mansour Aldehaiman, Gloria Lopez-Madrigal, Norah Altuwaijri, Maya Ayach、Ashraf Al-Amoudi、Rachid Sougrat、Vlad-Stefan Raducanu、Amani Al-Amodi、Hessa Alsaif、Firdous Abdulwahab、Amal Jaafar、Tarfa Alshidi、Adriana Montaño、Kara Klemp、Ellen Totten、Wesam Kurdi、Samir Hamdan、Stephen Braddock、Fowzan Alkuraya、Jasmeen MerzabanOF12.O04 在酿酒酵母中表达人类蛋白质组作为推进细胞外囊泡生物学的模型约瑟夫-特拉尼（Joseph Trani）先生、Aashiq H. Kachroo 博士、克里斯托弗-L. 布雷特（Christopher L. Brett）博士OF12.O05 细胞凋亡过程中死亡足迹的意外形成Stephanie Rutter 女士、Amy Hodge 女士、Dilara Ozkocak 女士、Julian Ratcliffe 博士、Taeyoung Kang 博士、Niall Geoghegan 博士、Pradeep Rajasekhar 博士、Georgia Atkin-Smith 博士、Ivan Poon 博士OF13.O02 剪切应力诱导的细胞外钙离子流入：一个放大间充质干细胞衍生的细胞外囊泡生成的关键触发器博士候选人 Youngju Seo1，Ibio hyejin Kang，Ibio，机械工程 Jaesung Park1Postech，韩国OF13.O03 利用脐带间充质干细胞衍生的细胞外小泡或线粒体进行细胞疗法，作为骨关节炎的新疗法Cynthia Garcia Guerrero 小姐、Patricia Luz-Crawford、Ana Maria Vega-Letter、Carolina Pradenas、Alexander Ortoff、Jose Barraza、Fernando Figueroa、Maroun Khoury、Aliosha Figueroa、Yeimi HerreraOF13.O04 使用与人类 GMP 兼容的胚胎血管祖细胞外泌体改善啮齿类动物缺血性中风模型的神经功能恢复科学家 Jieun LeeOF13.O05 在啮齿类动物围产期脑损伤模型中研究永生化人羊膜上皮细胞衍生的细胞外囊泡的功效。Mr Naveen Kumar1, Dr Ishmael Inocencio, Dr Tamara Yawno, Dr Dandan Zhu, Associate Professor Rebecca Lim1Hudson Institute Of Medical Research, Clayton, AustraliaOF13.O06 来自代谢重编程间充质干细胞/基质细胞的细胞外小泡作为一种潜在的免疫抑制机制Eliana Lara Barba 小姐, Yesenia Flores Elías 小姐, Felipe Bustamente Barrientos 先生, María Jesús Araya 小姐, Yeimi Herrera Luna 小姐, Noymar Luque Campos 小姐, Ana María Vega Letter 女士, Patricia Luz Crawford 女士OF14.O02 来自神经元富集 EV 的生物标志物可预测 APOE ε4 等位基因存在时对阿尔茨海默病的恢复力：一项大型纵向研究的发现Dimitrios Kapogiannis, Maja Mustapic, Carlos Nogueras-Ortiz, Apostolos Manolopoulos, Francheska Delgado-Peraza, Pamela Yao, Krishna Pucha, Mark A Espeland, Luigi Ferrucci, Stephen R. Rapp, Susan M. Resick.拉普、苏珊-M-雷斯尼克OF14.O03 基于单个细胞外囊泡近距离条形码分析的 PECAM1+ 和 ITGB1+ 血浆细胞外囊泡作为未破裂颅内动脉瘤生物标志物的鉴定田浩博士、蔡艳玲博士、王芳女士、段传智教授、孙海涛博士OF14.O04 一种液体活检方法：基于神经网络通过 SERS 特征识别脑肿瘤外泌体斯坦福大学和科茨大学博士 Ugur Parlatan、Chris Nguyen、学士 Tim Valencony、硕士 Furkan Kaysin、博士 Ozgur Albayrak，医学博士 Ibrahim Kulac，医学博士，博士候选人 Oguz Baran，医学博士，博士候选人 Goktug Akyoldas，医学博士 Ihsan Solaroglu，博士 Utkan Demirci，博士，DVM Demir Akin，博士 Mehmet Ozgun OzenOF14.Thamara Dayarathna博士、Austyn Roseborough博士、Janice Gomes博士、Reza Khazaee博士、Dr.Shaun Whitehead 博士、Hon Sing Leong 博士、Stephen Pasternak 教授OF14.O06 血浆源性细胞外小泡和全血浆源性 miRNAs 作为帕金森病生物标志物靶点的比较分析Sanskriti Rai, Mr. Rishabh Singh, Dr. Prahalad Singh Bharti, Dr. Roopa Rajan, Dr. Saroj KumarOF15.O02 通过蛋白棕榈酰化将 CRISPR/Cas9 的组分封装到细胞外囊泡中Ph.O03 超高通量纳米流体平台用于细胞外小囊泡的多功能装载杨辉，博士生郝睿，博士生于子彤，博士生石虎，博士生洪彦航，教授张毅，陈思辉OF15.O05 基于亲和力的囊泡相互作用中抗菌肽和细胞穿透肽的分类博士 Tamas Beke-Somfai、Tasvilla Sonallya、博士 Imola Cs.Szigyarto 博士、Tunde Juhasz 博士、Kinga Ilyes 博士、Priyanka Singh 博士、Delaram Khamari 博士、Edit Buzas 博士、Zoltan Varga 博士OF15.O06 细胞外囊泡工程的张力驱动渗透货物装载Yoon-Kyoung Cho 教授、Chaeeun Lee 博士、Sumit Kumar 博士OF16.O17 细胞外囊泡工程的张力驱动渗透货物装载 我们的方法包括利用现有的肽鉴定数据集优化目标物的相对定量，然后利用稳定同位素标记的肽进行绝对定量。对多重方法的评估包括分析选择性、携带、基质效应和线性度。总结：设想中的多生物标记物面板旨在区分癌症和良性样本，并对组织学亚型进行分类，不仅有望提高诊断准确性，还能补充或取代目前的EC临床工具，从而彻底改变子宫内膜癌患者的早期诊断结果。牛学明小姐、张震博士、周全先生、Alain Wuethrich 博士、Richard Lobb 博士、Matt Trau 教授赞助商展览、海报展和午餐（星期四），2024 年 5 月 9 日 12:00 PM - 2:00 PM14-15 号展厅小胶质细胞是位于中枢神经系统（CNS）中的一种特化的先天性免疫细胞群。针对其微环境中的生理和病理变化，体外研究发现了两种经典的炎症相关表型：促炎或抗炎表型小胶质细胞。小胶质细胞促炎和抗炎极化之间的平衡可作为中枢神经系统各种脑部病变的潜在生物标志物。在这里，我们对来自小胶质细胞的细胞外小泡（sEVs）进行了蛋白质组学分析，以确定指示促炎和抗炎表型变化的 sEVs 生物标志物。方法我们利用纳米颗粒跟踪分析、纳米流式细胞术、Western 印迹和质谱分析来表征 sEVs，并研究了在脂多糖或 IL-4、IL-10 和 TGFβ 鸡尾酒细胞因子刺激下，从人类小胶质细胞系纯化的 sEVs 蛋白质组的变化。细胞形态变化和炎症基因表达验证了活化的小胶质细胞模型。结果我们的分析表明，与对照组相比，LPS 和 IL-4/10/TGFβ 处理过的细胞释放的 sEVs 中发现了一种独特的蛋白质谱，这种蛋白质谱影响着参与炎症的特定生物通路。通过质谱分析，LPS-sEVs 中鉴定出 188 个蛋白质，IL-4/10/TGFβ-sEVs 中鉴定出 242 个蛋白质。根据GO分析，我们在LPS-sEVs中发现了一些与免疫反应相关的蛋白质。此外，IL-4/10/TGFβ-sEVs 还富集了抗炎和肿瘤相关蛋白。这些结果表明，通过 LPS 和 IL-4/10/TGFβ 激活小胶质细胞可导致 sEVs 的分泌，而这些 sEVs 可反映其衍生细胞的促炎和抗炎表型。尽管超出了本研究的范围，但临床分析 LPS- 和 IL-4/10/TGFβ-sEVs 中富集的蛋白质，可以在使用先进方法检测痕量 sEVs 水平时提供重要信息。这可以为生物标记物的发现提供重要的洞察力，从而监测中枢神经系统疾病的发病机理。博士 Natalia Szpilbarg、Matías Nicolás Sierra、医学博士 Juan Sebastián Sar、博士 Alicia Ermelinda Damiano赞助商展览、海报展和午餐（星期四），2024 年 5 月 9 日 12:00 PM - 2:00 PMIntroduction：子痫前期（PE）是一种与胎盘功能不全有关的人类妊娠综合征。在最严重的病例中，滋养细胞迁移受阻，胎盘不能充分形成。滋养细胞合胞体从妊娠第六周开始向母体循环释放胞外囊泡（EVs），直至足月。此外，有报道称胎盘 EVs 在 PE 中的数量会增加，含量也会改变。因此，有人提出它们可以作为生物标记物。有报道称，水蒸气素 3（AQP3）参与滋养细胞迁移，而其在 PE 胎盘中的表达量减少。本研究的目的是验证一种检测来自(i)母体血浆和(ii)培养胎盘外植体上清液的EVs中AQP3的方法，以评估AQP3作为PE生物标记物的潜在作用：本研究已获阿根廷布宜诺斯艾利斯市佩德罗-马洛海军医院伦理委员会批准。在获得知情同意的情况下，收集正常妊娠和 PE 妊娠的 EDTA 抗凝母体血液和胎盘。胎盘在剖腹产后一小时内立即采集并处理。正常胎盘和 PE 胎盘的切片在 37°C 下培养 18 小时并收集上清。 通过差速离心、过滤和超速离心获得血浆和外植体 EVs。通过 DLS、NTA、透射电子显微镜和 Western 印迹分析 CD63 和 HSP70 的存在。还测定了 AQP3 蛋白的表达。对胎盘碱性磷酸酶（PLAP）（一种合胞滋养细胞标记物）进行了分析，以确认血浆 EVs 样品中是否存在胎盘来源的 EVs：初步结果显示，获得了富含EVs的样本，血浆EVs部分中存在胎盘来源的EVs。结果：初步结果显示，获得了富集的 EVs 样品，血浆 EVs 部分中存在胎盘来源的 EVs，血浆和外植体 EVs 样品中均可检测到 AQP3：这项工作为评估正常和病理情况下胎盘释放的EVs中AQP3是否有不同表达奠定了基础。Ramin Khanabdali 博士、Scott Zhu 博士、Mathew Moore 博士、Gregory Rice 博士赞助商展览、海报展示和午餐（星期四），2024 年 5 月 9 日，12:00-2:00，展厅-14-15 室简介：细胞外囊泡（EVs）及其分子谱分析一直被视为开发生物标志物的理想候选者，可用于早期检测不同疾病的诊断应用。目前，临床转化的主要障碍是缺乏高效、稳健和高通量的 EV 分离及下游分析方法，而这种方法又很容易集成到临床实验室的工作流程中。在这项研究中，我们使用了一种高通量的基于珠子的自动免疫亲和系统，从确诊为乳腺癌的女性血清样本中分离出 EVs 并鉴定差异表达的 miRNAs，从而鉴定与 EV 相关的生物标记物，以便更早地检测乳腺癌，改善疾病预后：使用EXO-NET EV分离试剂盒，在高通量自动KingFisher Apex系统上从500 µL的血清样本中分离出EV，样本来自确诊为乳腺癌的女性（I、II、III、IV期，每期12人）和年龄匹配的正常健康女性（48人）。在同一系统上使用 Promega Maxwell® HT miRNA 血浆和血清试剂盒分离小 RNA，进行小 RNA 测序和 RT-PCR 分析：结果：从 96 份血清样本中高通量分离出 EVs 及其相关 miRNAs 的过程不到 2 小时。小 RNA 序列分析确定了正常健康女性和确诊乳腺癌女性之间前 50 个显著差异表达的 miRNA（log2 = 2，p < 0.01）。数据建模包括 GO 和 KEGG 通路分析，确定了与乳腺癌和 EV 区间相关的分子通路：我们建立了一个高效、稳健、适用的高通量自动化系统，用于在同一系统上进行 EV 及其相关 RNA 和蛋白质的分离，并进行下游分析，这为将 EV 诊断转化为常规临床实践带来了巨大希望。研究生 Amélie Nadeau、研究生 Thupten Tsering、博士 Kyle Dickinson、博士 Daniela Quail、博士 Peter Siegel、博士 Julia V Burnier赞助展览、海报展和午餐（周四），2024 年 5 月 9 日 12:00 PM - 2:00 PMIntroduction：虽然原发性疾病通常都能得到很好的控制，但转移性乳腺癌（mBC）却是致命的，而有机体转移的基本机制在很大程度上仍然未知。细胞外囊泡（EVs）携带多种生物大分子，参与器官特异性转移，但它们作为生物标志物的作用仍在探索之中。我们的目的是研究具有不同转移潜能和器官向肺部、骨骼、肝脏和大脑转移的小鼠 mBC 细胞系的 EV 相关载体。这将使我们能够确定基因组和蛋白质组驱动因素，这些因素有可能被用作转移性疾病的信息生物标志物：方法：利用离心过滤和超速离心法，从转移性 4T1 和非转移性 67NR 亲本细胞系，以及肺转移细胞系（533、537）、骨转移细胞系（592、593）、肝转移细胞系（2776、2792）、脑转移细胞系（BP、LM）和正常细胞系（NMuMg）的细胞培养基中分离出 EVs。通过纳米粒子跟踪分析、透射电子显微镜和 Western 印迹法确认并鉴定了 EVs 的存在。使用 DNA 纯化试剂盒和 EZ2 ccfDNA 试剂盒分别分离了 EV-DNA 和细胞游离（cf）DNA。两者均使用 Qubit 进行量化。使用数字 PCR 检测 EV-DNA 和 cfDNA 中的 DNA 突变。采用无标记质谱对所有细胞系的EV蛋白进行了蛋白质组学分析：结果：在所有亲代细胞和转移细胞衍生的EV中都检测到了不同水平的EV-DNA和cfDNA。 对EV提取的DNA和RNA进行初步浓度分析后发现，肿瘤组织和非肿瘤组织的DNA浓度分别为37.4ng/µL和39.4ng/µL，RNA浓度分别为2.9ng/µL和8.5ng/µL：在此，我们展示了一种肺组织消化技术，可从肿瘤和非肿瘤肺组织中分离出EVs。从肺组织 EVs 中获得了高浓度的 DNA 和 RNA，从而可以进行下游测序实验，研究肺癌肿瘤生物标记物的 EV 特异性特征：血液中的前列腺特异性抗原（PSA）水平用于筛查前列腺癌患者，但缺乏特异性。在转诊进行诊断性活检的患者中，有三分之一是癌症阴性患者。我们需要能区分低风险、高风险或良性前列腺疾病的微创液体生物标志物，以减少不必要的活组织检查。肿瘤衍生的细胞外囊泡 (EV) 是癌细胞生物标记物的指纹。由于癌细胞表现出糖基化异常，我们推测前列腺液（DRE-尿液）中前列腺源性EVs的糖基景观可能为早期检测和疾病进展提供独特的标记物：采用密度梯度超速离心法从低危（Gleason <7；n = 25）、高危（Gleason >7；n = 25）前列腺癌患者和良性对照组（n = 25）的DRE-尿液样本中富集EVs，并通过纳米粒子追踪分析（NTA）和透射电子显微镜（TEM）对其进行表征。免疫印迹证实了 EV 标记。为了验证我们的假设，我们使用荧光连接凝集素和前列腺癌标记物 PSMA 抗体，通过多参数流式细胞术分析和比较了前列腺癌患者和对照组前列腺衍生 DRE 尿液富集 EVs 的糖基化模式：所有75份患者样本都有1x 10¹⁰ EV颗粒。患者EV的典型大小范围为50-150纳米，并呈现出特征性的杯状形态。对单个前列腺衍生EV上凝集素/抗体强度的计算分析表明了与前列腺癌相关的聚糖模式。利用随机森林分类器中的聚糖生物标志物，我们可以将患者归入相关群组，而且灵敏度和特异性都很高。此外，夏普利分析法量化了每个聚糖生物标志物的贡献，并显示出前列腺癌患者和对照组不同的聚糖特征：总之，我们的数据表明，EV糖基化特征可以将高危和低危前列腺癌患者从良性/筛查阴性疾病状态中区分出来，这表明EV糖基化是一种很有前景的前列腺癌检测生物标记物：根据 OHSU 和 VA 诊所机构审查委员会（IRB#18048, VAIRB#4214）的规定，从同意为 CEDAR 生物库采集人体样本：CEDAR- Full 2020-1251, Full 2023-1688Dr Alicja Głuszko, Dr. hab.米罗斯瓦夫-什切潘斯基（Mirosław Szczepański）博士、安杰伊-切查诺维奇（Andrzej Ciechanowicz）博士、特雷莎-怀特赛德（Theresa Whiteside）教授、尼尔斯-路德维希（Nils Ludwig）博士赞助展览、海报展示和午餐（周四），2024 年 5 月 9 日 12:00 - 下午 2:00 展览厅-14-15 号门简介：缺氧是包括头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）在内的实体瘤的特征之一，它在分子和功能上调节着癌细胞的活性。在之前的实验中，我们证实暴露于缺氧环境中的 HNSCC 细胞系会释放出更多的细胞外小泡（sEVs）。本研究旨在通过将 HNSCC 细胞培养物在常氧和缺氧条件下释放的 sEVs 的脂质体和蛋白质组图谱与 HNSCC 患者和正常捐献者的血浆样本进行比较，从而分析新陈代谢的转变：我们从 HNSCC 和正常供体的血浆中收集了 sEVs，还从暴露于 21% （常氧）和 1% （缺氧）供氧条件下的 HNSCC 细胞（PCI-30）和正常对照细胞（HaCaT 角质细胞）的上清液中收集了 sEVs。使用尺寸排阻色谱法（SEC）从血浆和上清液中分离出 sEVs，并通过纳米粒子跟踪分析、电子显微镜、免疫印迹以及细胞系衍生 sEVs 的高分辨率质谱脂质体和蛋白质组分析对其进行表征：结果：分析的 sEVs 平均直径为 125-135 nm，携带 CD63 和 CD9，但不携带 Grp94。 值得注意的是，肝细胞核因子4α、血管紧张素、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6的表达随着疾病的进展而增加。结论：这项研究利用蛋白质组学分析探讨了尿液外泌体中不同疾病阶段的潜在非酒精性脂肪肝生物标志物，为非侵入性检测和监测非酒精性脂肪肝的进展提供了见解。Hannah Nazri 博士、Raphael Heilig 博士、Roman Fischer 副教授、Benedikt Kessler 教授、Kavita S Subramaniam 博士、Christian Becker 教授、Thomas Tapmeier 博士赞助商展览、海报展示和午餐（周四），2024 年 5 月 9 日 12:00 PM - 2:00 PM14-15 展厅简介：子宫内膜异位症被定义为异位的子宫内膜样组织，会导致 10% 的育龄妇女疼痛和/或不孕。由于病因不明，导致诊断方法（没有临床相关的生物标志物）和治疗方法不完善。方法：在牛津大学纳菲尔德妇女与生殖健康系子宫内膜异位症CaRe中心的ENDOX研究（REC 09/H0604/58）中，通过腹腔镜诊断对腹痛/盆腔痛和/或不孕症进行调查的18-49岁女性（n = 63）被采集了腹腔液（PF）样本。根据 WERF EPHect 标准，按照周期阶段（增殖期/分泌期/月经期）和子宫内膜异位症严重程度（ASRM I+II/III+IV 期）对 PF 进行收集和分类。排除标准包括激素治疗、恶性肿瘤、怀孕、哺乳以及无法理解同意书。结果：通过纳米颗粒追踪分析（NTA）、免疫印迹和质谱分析，我们证实了处于不同子宫内膜异位症阶段的女性和处于不同月经周期阶段的无病女性的PF中存在sEVs。富集的 sEVs 对 ALIX、CD9 和 syntenin 呈阳性。子宫内膜异位症 PF 衍生的 sEV 模式大小为 130±8.7 nm（n = 44），而对照组为 134±2.12 nm（n = 19）。与月经周期阶段无关，sEV浓度在III-IV期子宫内膜异位症中最高（n = 19），其次是I-II期子宫内膜异位症（n = 25）和对照组（P = 0.0210）（n = 19）。蛋白质组分析发现，sEVs 中的 CD44 是子宫内膜异位症特有的蛋白质，对区分子宫内膜异位症样本和对照样本贡献最大（高变量重要性预测，VIP 评分）。将这些发现与血液或尿液等其他易于获取的生物液体进行比对，将有助于我们了解子宫内膜异位症并确定子宫内膜异位症生物标记物。医学博士 Cahyani Gita Ambarsari，教授 MW Taal，MRCPCH MD（res）JJ Kim，助理教授 Dong-Hyun Kim，助理教授 AM Piccinini赞助展览、海报展示和午餐（周四），展厅-14-15 号，2024 年 5 月 9 日，下午 12:00 - 2:00 引言尿液细胞外囊泡（uEVs）是具有潜在临床价值的生物标记物，尤其是在肾脏和尿路问题患者中。uEVs包裹着核酸、蛋白质和代谢物等货物，保护它们不被酶降解。我们采用以往研究中报道的收集、储存和保存 uEV 的方法，检测了储存 6 个月的随机晨尿样本中颗粒浓度的稳定性。在每个尿液容器中加入两片 cOmpleteä 迷你蛋白酶抑制剂鸡尾酒片剂（产品编号：11836153001 Roche）。在收集样本后 4 小时内，使用摇摆式离心桶转子在 4°C 下以 800xg 的转速离心 10 分钟，以去除细胞和细胞碎片。在采集后的 0 个月和 6 个月，将样本分成每份 10 mL 的等分样品，分别用于分离 uEV，并保存在 -80°C 温度下。我们使用三种不同的商业试剂盒分离uEV，它们分别使用沉淀法（尿液外泌体总分离试剂盒（TEIR；Invitrogen））、pH和沉淀法（尿液外泌体纯化试剂盒（UEPK；Norgen））以及基于尺寸排阻色谱法（SEC）的方法（IZON）。无细胞尿液样本在 4°C 冰上解冻过夜，以进行 uEV 分离和定量。 我们使用Zetaview PMX-120进行了纳米粒子跟踪分析（NTA），对uEV进行了表征，包括定量和粒度分布评估。在使用的三种试剂盒中，总外泌体分离（来自尿液）试剂盒（TEIR；Invitrogen公司）的uEV浓度最高，其次是SEC（IZON公司）和尿液外泌体纯化试剂盒（UEPK；Norgen公司）。摘要/结论蛋白酶抑制剂的保存、样本采集后4小时内的预处理以及-80°C的储存可能对未来的长期uEV衍生生物标记物研究有用。Kelly Tian Mun Chee 博士、Kwun M Fong 教授、Ian A Yang 教授、Rayleen V Bowman 副教授赞助商展览、海报展和午餐（周四），展览厅-14-15 号，2024 年 5 月 9 日，下午 12:00 - 2:00 简介恶性胸膜间皮瘤（MPM）是一种罕见的癌症，影响体腔内的浆膜，最常见的是胸膜。胸腔积液的细胞外囊泡 (EV) 区室可选择性地富含导致胸腔积液的病理实体所特有的蛋白质。目前尚未对胸腔积液所含 EV 的蛋白质含量进行广泛研究。因此，我们研究了胸腔积液EV中的蛋白质载体，目的是确定MPM的特异性蛋白质候选物，以便将其与其他原因引起的胸腔积液区分开来。胸腔积液在4⁰C下以800 x g离心10分钟，然后在4⁰C下以100,000 x g（w2t = 5.46e10）超速离心1小时40分钟，以分离出EV。对 19 个胸腔积液病例进行了所有理论片段-离子谱的顺序窗口获取-质谱分析（SWATH-MS），包括 MPM（6 例）、转移至胸膜的肺腺癌（LUAD；5 例）、转移至胸膜的乳腺癌（BRCA；4 例）和非恶性病症（NM；4 例）。结果对所有 19 个 PFEV 样品的分析显示，在 5% 的局部 FDR 下，共检测到 830 个蛋白质、10477 个肽段和 76042 个光谱。在每种疾病状态下检测到的蛋白质数量分别为 630 个（MPM）、439 个（LUAD）、406 个（BRCA）和 625 个（NM）。四个蛋白（LG3BP、FCGBP、MXRA5 和 STOM）显示出作为 MPM 候选蛋白标记物的最大潜力。LG3BP 在 MPM 中的水平高于其他任何胸腔积液病因：P 值为 0.0087（MPM-LUAD）和 0.0095（MPM-BRCA），以及 0.0095（MPM-NM）。结论候选蛋白质值得进一步检测，以确定它们是否能成为对胸腔积液患者有诊断作用的蛋白质生物标志物的有用组成部分。张欣博士、马思思博士、Syeda Iffat Naz、Janet Huebner、Erik Soderblom 博士、Noor Alnemer、Constantin Aliferis 博士、Virginia Kraus 博士赞助展览、海报展示和午餐（星期四），2024 年 5 月 9 日下午 12:00 - 2:00 展览厅-14-15 室简介：我们以前曾报道过，在健康人和小鼠中，多种与免疫细胞相关的循环细胞外囊泡 (EV) 亚群会随着年龄的增长而减少。在这项研究中，我们旨在确定在健康衰老过程中免疫系统相关血浆 EVs 的系统性变化：方法：从年轻（18-31 岁，n = 6）和年长（47-83 岁，n = 22）健康捐献者的血液中分离血浆，在 4°C 下以 3000 rpm 离心 15 分钟以去除细胞和碎屑，然后保存在 -80°C 下。冷冻血浆完全解冻后，在 4°C 下以 2000 g 离心 10 分钟，以除去残余碎片；用聚合物沉淀法分离 EVs 和 EV 贫化上清液。经验证，EVs 具有双层结构和大小多样性，并携带线粒体、传统 EV 标记（CD81、CD9、CD63、CD29）和不同频率的造血细胞相关标记（CD4、CD8、CD56、CD15、CD14、CD68、CD19、CD235a、CD41a、CD31、CD34、HLA-ABC、HLA-G、HLA-DRDPDQ）。我们用酶联免疫吸附法测定了内EV（EVs中）和外EV（EV-depleted supernatants中）细胞因子的浓度。通过高分辨率质谱对内源性 EV 蛋白质组进行了量化。高分辨率流式细胞术用于量化携带测试表面标记的 EV 亚群的频率，以及 WI-38 成纤维细胞对 PKH67 预标记 EV 的内化及其增殖变化。 结果与匹配的外显子EV上清液相比，内含子EV的TNF-α和IL-27较高，IL-6、IL-11、IFN-γ和IL-17A/F较低，IL-1β、IL-21和IL-22的浓度相似。内、外EV TNF-α、IL-27、IL-6、IL-1β和IFN-γ存在明显的相关性。内-外EV IFN-γ和外-EV IL-17A/F和IL-21随着年龄的增长而显著下降。年龄与 EV 多肽有明显的正相关（n = 37）和负相关（n = 257）；与年龄相关的 EV 蛋白主要富集在肝脏和先天性免疫系统中。WI-38 成纤维细胞（>95%）内化了相似数量的年轻和年老 EV。与不吸收PKH67-EVs的细胞相比，含有PKH67-EVs（内化了EVs）的细胞，尤其是年轻EVs，细胞增殖更快：我们的研究结果确定了反映健康衰老过程中免疫衰老的 EV 表型，以及年轻供体血浆 EV 在体外刺激受体细胞增殖的能力。这些EV生物标志物是未来衰老研究的候选对象。Sittiruk Roytrakul、Raphatphorn Navakanitworakul 副教授赞助商展览、海报展和午餐（星期四），展览厅-14-15 号，2024 年 5 月 9 日，中午 12:00 - 下午 2:00简介：尿液细胞外囊泡（uEVs）能够反映疾病和治疗过程中的病理状态，因此有望成为各种癌症疾病的非侵入性生物标志物。因此，本研究旨在评估BC患者手术前后的uEVs浓度和uEVs蛋白质组：方法：收集 BC 患者（n = 30）在手术前和手术后两个时间点的尿液样本。采用差速超速离心法分离出uEVs，然后用Western印迹和TEM对其进行表征。纳米粒子跟踪分析（NTA）测量了 uEV 的浓度。利用 LC-MS/MS 对 uEVs 进行蛋白质组分析：结果：比较了个别BC患者手术前后的uEVs浓度。与手术前相比，我们观察到手术后uEVs水平有两种趋势：与手术前相比上升和下降。八名 BC 患者的 uEV 水平升高，而 22 名 BC 患者术后的 uEVs 浓度下降。uEVs的蛋白质组学分析明确了手术前和手术后样本中的差异表达蛋白（DEPs），并将其分为上升趋势（sig-up 26，sig-down 35）和下降趋势（sig-down 121，sig-up 121）。手术前后样本的热图显示了蛋白质表达的显著模式。值得注意的是，手术后样本中癌症相关蛋白下调，uEVs浓度呈下降趋势，而手术后样本中显著上调的蛋白与KEGG数据库注释的癌症相关通路中的蛋白映射，可能与手术后uEVs的增加有关：结论：手术前后uEVs浓度的变化揭示了uEVs蛋白质组的差异性，可能与乳腺癌患者的病理变化有关。黎安德博士、Dominic Guanzon 博士、Shayna Sharma 博士、Katherin Scholz-Romero 女士、何耀武博士、黄卫东先生、Tanja Pejovic 博士、Carmen Winters 博士、Terry Morgan 教授、Jermaine Coward 教授、Amy McCart Reed 副教授、Sunil Lakhani 教授、Andreas Obermair 教授、Amanda Barnard 教授、Anna deFazio 教授、Lewis Perrin 教授、John Hooper 教授、Gregory Rice 教授、Carlos Salomon 教授赞助商展览、海报展和午餐（星期四），展厅-14-15 号门，2024 年 5 月 9 日，12：00 PM - 2:00 PM介绍：细胞外囊泡（EVs）含有生物活性分子，是疾病生物标记物的有力候选者。由于缺乏临床上有用的早期检测生物标志物，过去二十年来卵巢癌（OVCA）的存活率一直停滞不前。本研究旨在利用机器学习（ML）评估生物标志物在准确分类卵巢癌女性患者方面的敏感性和特异性：方法：在2016年至2022年期间，共对926名患者进行了分析。收集血浆样本，并将患者随机分配到三组：1）带有交叉验证模型的训练集（n = 220）；2）验证集（n = 235）；3）测定完善（n = 471）。使用尺寸排阻色谱法和与常规病理检测兼容的捕获免疫亲和磁珠系统分离 EV，并根据 MISEV2018 进行表征。EV 内容（miRNA、蛋白质、lncRNA、miscRNA、MtrRNA、MttRNA、rRNA、scaRNA、snRNA 和 tRNA）被用作 ML 分类器。 Karen Gylys赞助展览、海报展和午餐（星期四），2024 年 5 月 9 日 12:00 - 2:00 展览厅-14-15 号展厅简介：类器官培养模型的开发进展为研究细胞外囊泡（EV）的生物发生、载体及其在健康和疾病中的细胞间通信作用开辟了一条新途径，它提供了一个更自然的三维环境，而不会因组织解离而导致EV样本污染细胞内囊泡。我们的总体目标是利用类器官tau病模型，评估EVs在免疫细胞重编程中的作用，从而为tau病理学扩散和神经元回路破坏创造有利环境：我们比较了从大脑类器官培养基中分离EV的四种不同方法，包括超速离心法、聚合物沉淀法、尺寸排他性层析法和免疫沉淀法。我们评估了从tau R406W（额颞叶痴呆突变）和同源对照人类iPSCs衍生的皮质（CTX）、神经节突起（GE）和融合CTX+GE类器官培养物中分离出的EV中外泌体标志物和免疫检查点分子的水平：利用外泌体中富集的三种四蛋白（CD63、CD9和CD81）进行泛外泌体免疫沉淀，被选为最成功的类器官EV分离分析方法。我们观察到从类器官培养物中分离出的外泌体中 CD63 和 CD47 表达的区域和基因型特异性变化。与同源对照相比，突变型 CTX 和 CTX+GE 有机体培养物的 EV 产物中 CD63 表达明显上调，而突变型 GE 衍生的 EV 中 CD63 水平下降。这些结果表明，tau R406W突变对兴奋性（CTX）和抑制性（GE）神经元的EV生物发生和/或细胞活力有不同的影响，以及/或对神经胶质细胞有区域特异性影响。在从突变的 CTX+GE 融合类器官培养物（第 120 天）中分离出的 EV 中，CD47（而非另一种免疫检查点分子 PDL-1）上调，这表明外泌体 CD47 可能通过与其同源受体信号调节蛋白α（SIRPα）相互作用，在免疫细胞调节中发挥作用。小结：大多数神经退行性疾病（包括 tau 病）的特点是内溶酶体功能障碍和细胞间通信失调。Ursula Sandau 博士、Trevor McFarland 博士、Sierra Smith 医学博士、Douglas Galasko 医学博士、Joseph Quinn 医学博士、Randy Woltjer 博士、Julie Saugstad 赞助展览、海报展示和午餐（周四），2024 年 5 月 9 日 12:00 PM - 2:00 PM14-15 展厅：阿尔茨海默病（AD）是最常见的痴呆症，也是 65 岁及以上人群的第五大死因。美国食品及药物管理局（FDA）仅批准了六种疗法，但没有一种能治愈该病，因此迫切需要确定新的治疗靶点。脑脊液（CSF）中含有脑源性 EVs，其载体反映了疾病的改变。因此，我们对来自AD和对照组（CTL）供体的人类CSF EV miRNA数据进行了靶点预测分析，以确定我们发现在人类AD大脑中发生改变并可能导致发病机制的相关基因靶点：活体供体（AD n = 28；CTL n = 28）的CSF经尺寸排阻色谱法分馏，并通过透射电子显微镜、免疫印迹检测EV和非EV标记物（如flotillin、CD81、脂蛋白）以及可调电阻脉冲传感进行表征。利用引物-探针阵列通过 qPCR 评估了 190 个 miRNA，并将在 AD 中发生显著变化（FDR 校正）的 miRNA 用于目标预测和 Ingenuity Pathway 分析。用AD和CTL的人类死后额叶皮层（FC）和海马进行miR-16-5p染色，并对SNAP-25和MUNC18-1进行免疫印迹分析：结果：与CTL相比，AD CSF EV中四种miRNA（miR-16-5p、-331-3p、-409-3p和-454-3p）的表达显著增加。研究还发现，CSF EV miR-16-5 的表达与性别和基因型有关，APOE4 阳性的 AD 女性表达明显增加。我们还发现，miR-16-5p 在人脑中也有表达，而且与 CTLs（n = 3）相比，在 AD（n = 4）白质中的表达呈上升趋势。与 AD 中的突触功能障碍有关，miR-16-5p 预测的靶标包括突触传递不可或缺的 mRNA（SNAP-25、MUNC18-1）。与对照组女性（海马和 FC，n = 11）相比，AD 女性海马（n = 17）和 FC（n = 12）中的 SNAP-25 和 MUNC18-1 均显著减少。