Cladosporium cladosporioides No.9の酢酸エステル分解酵素

Nippon Nogeikagaku Kaishi-journal of The Japan Society for Bioscience Biotechnology and Agrochemistry Pub Date : 1990-06-15 DOI:10.1271/NOGEIKAGAKU1924.64.1135

Toshinori Iwase, Mayumi Miura, O. Akita, T. Obata, S. Hara, G. Tamura, K. Yoshizawa

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Abstract

Cladosporium cladosporioides No.9の無細胞抽出液より硫安沈殿,ブチルートヨパール, DEAE-トヨパールおよびトヨパールHW55のクロマトグラフィーにより酢酸エステルを特異的に分解する酢酸エステル分解酵素(Est I, Est II)を単離精製した. 各精製酵素の分子量はゲルクロマトグラフィーによりEst Iは約6.3万, Est II は約6.6万と推定された. また,各酢酸エステル分解酵素の至適反応温度はEst Iは35°C, Est IIは30°Cであった.熱安定性はともに50°C, 30分処理で完全に失活した.至適pHはEst IはpH 9.1, Est IIはpH 9.3であった. pH安定範囲は,前者がpH 7～9,後者がpH 5～6であった.両酵素ともにDFP, PMSFに阻害され,エゼリンで阻害されないことによりセリン残基を有するカルボキシエステラーゼと推定された.SH基阻害剤であるPCMB, DTNBおよび金属イオンキレート剤であるEDTAでは阻害されなかった.また, Ag2+および2価の重金属イオンのCu2+, Hg2+で強く反応を阻害された. エチルエステルに対する基質特異性は,酢酸エステルに比較して最大でも約10～20%の相対活性しかなかった.トリグリセリド,モノグリセリドの長鎖脂肪酸を持つものにはまったく作用せず,短鎖脂肪酸を持つものにわずかに活性を示した.酢酸エステルに対してはEst Iは酢酸イソアミルに対してEst IIは酢酸イソブチルに対して最大の活性を示し,酢酸β-フェネチルに対しても高い分解活性を示した.本酵素はアルコールの酢酸エステルを特異的に分解するカルボキシエステラーゼであった.

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乙酸酯分解酶Cladosporium cladosporioides No.9

从Cladosporium cladosporioides No.9的无细胞提取液中得到硫酸铵沉淀，丁醇和珍珠，通过DEAE-托代泊和托代泊HW55的色谱法，分离纯化了能特异性分解乙酸酯的乙酸酯分解酶(Est I, Est II)。通过凝胶色谱法推测，Est I和Est II各精制酶的分子量分别约为6.3万和6.6万。另外，Est I各乙酸酯分解酶的至适反应温度为35°C，Est II是30°C。热稳定性均为50°C, 30分钟处理后完全失效。Est I的至适pH为9.1,Est II的至适pH为9.3。pH稳定范围前者为7 ~ 9，后者为5 ~ 6。两种酶均受DFP、PMSF的抑制，而不受ezelin的抑制，因此推测为具有丝氨酸残基的羧化酯酶。DTNB和金属离子螯合剂EDTA中未受到抑制。另外，Ag2+和二价重金属离子Cu2+，在Hg2+的情况下反应受到了强烈的阻碍。对乙基酯的基质特异性与醋酸酯相比，最多只有约10 ~ 20%的相对活性。对具有三酸甘油酯、单酸甘油酯长链脂肪酸的基质完全不起作用，对具有短链脂肪酸的基质完全不起作用。显示出了些许活性。Est I对乙酸异氨基酯和Est II对乙酸异丁酯的活性最大，对乙酸β-苯基酯的分解活性也很高。本酶是特异性地分解酒精的乙酸酯的羧化酯酶。

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