Novel Ret Mutations in Macedonian Patients with Medullary Thyroid Carcinoma: Genotype-Phenotype Correlations/ Нови Ret-Мутации Кај Македонски Пациенти Со Медуларен Карцином На Тироидната Жлезда: Генотипско-Фенотипски Корелации

Abstract Medullary thyroid carcinomas (MTCs) are rare neoplasms comprising 2-10% of all thyroid malignnancies. More than 75% are sporadic tumors and the remainder is familial and MEN2 related. Both sporadic and syndromic MTCs frequently show mutations in the RET proto-oncogene. It has been noted that some MTC cases present an indolent, and some an aggressive clinical course. Ki-67 expression is generally low, with documented exceptions, whereas high expression of Bcl-2 has been reported in majority of the cases. Some studies have shown that Ki-67 and Bcl-2 expressions have prognostic value, as well as RET mutational status. We analyzed 20 unrelated MTC cases for Ki-67, Bcl-2 expression and RET mutations and tested their intercorrelations, correlations to the morphologic features and stage of the tumors, as well as their influence on survival. In 13 of the 20 analyzed cases we found 23 sequence changes distributed in exons 8, 10-13 and 16. There were 11 different missense mutations, single nucleotide deletion with frameshift, and 8 different synonymous mutations. Only 4 of the sequence changes have been previously published. Twelve patients (60%) had tumors expressing one or more missense mutations or single nucleotide deletion and 7 of them (35%) had at least one damaging or possibly damaging RET mutation. Most of the tumors had low Ki-67 expression (mean 6.48% of cells) and high Bcl-2 expression (mean 68.3%). Significantly better survival was observed in cases with low Ki-67 (< 6.5%; p < 0.05), high Bcl-2 expression (> 68.3%; p < 0.01) and younger age at diagnosis (< 51 years; p < 0.05). Медуларните карциноми на тироидната жлезда (MTC) се ретки неоплазми што сочину- ваат 2-10% од сите малигни тумори на тироид- ната жлезда. Повеќе од 75% се јавуваат како спорадични тумори, а останатите се јавуваат во склоп на MEN2 синдром или како фамилијарни случаи. Како фамилијарните/синдромските, така и спорадичните тумори често покажуваат мута- ции во RET-протоонкогенот. Забележано е дека некои од туморите покажуваат индолентен кли- нички тек, додека други се агресивни. Експреси- јата на Ki-67, главно, е ниска, со документирани исклучоци. Наспроти тоа, во повеќето тумори се наоѓа висока експресија на Bcl-2. Неколку сту- дии покажаа дека нивото на експресија на Ki-67 и Bcl-2 има прогностичко значење, како што има и мутациониот статус на RET-протоонко- генот. Во оваа студија ја анализиравме експре- сијата Ki-67 и Bcl-2 и присуството на RET-му- тации во 20 несродни случаи на MTC, нивните меѓусебни корелации и корелациите со морфо- лошките особини на туморите и стадиумот на болеста, како и преживувањето на пациентите. Во 13 од анализираните примероци најдовме вкупно 23 промени во секвенцата на RET дис- трибуирани во егзоните 8, 10-13 и 16. Најдовме 11 различни missense-мутации, еднонуклеотид- на делеција и 8 различни синонимни мутации. Само 4 од овие промени се претходно објавени, останатите се новооткриени. Дванаесет паци- енти (60%) имаа тумори со една или повеќе missense-мутации или еднонуклеотидна делеци- ја, а седуммина од нив (35%) имаа барем една оштетувачка или веројатно оштетувачка мута- ција во RET-протоонкогенот. Повеќето тумори имаа ниска експресија на Ki-67 (средна вред- ност 6,48% од клетките) и висока експресија на Bcl-2 (средна вредност 68,3%). Воочивме зна- чително подобро преживување на пациентите чии тумори имаа пониска експресија (< 6,5%) на Ki-67 (p < 0,05), повисока експресија (> 68,3%) на Bcl-2 (p < 0,01) и помлада возраст (< 51 го- дини) при иницијалната дијагноза (p < 0,05).