Purificación y caracterización de una nueva PLA2 del veneno total de Micrurus spixii

Purificación y caracterización de una nueva PLA2 del veneno total de Micrurus spixii Purification and characterization of a new PLA2 of whole venom of Micrurus spixii Valeriano-Zapana J.A, Cari-Cari Y.M, Arenas-Chavez C, Vera-Gonzales C, Martins-de-Souza D, Ponce-Soto L.A y Marangoni S Department of Biochemistry, Institute of Biology (IB), State University of Campinas (UNICAMP), Campinas, São Paulo, Brazil Immunology Research Group (GII), Faculty of Medicine (FM), National University of San Agustin (UNSA), Arequipa, Peru University Catolica of Santa Maria, Arequipa, Perú; Department of Chemistry National University of San Agustin Arequipa (UNSA) Arequipa, Perú Max Planck Institute of Psychiatry, Munich, Germany DOI: https://doi.org/10.33017/RevECIPeru2012.0017/ Resumen Fue purificado una nueva PLA2, con actividad miotóxica del veneno de Micrurus spixii con un alto grado de pureza y homogeneidad molecular, mediante dos pasos cromatográficos: cromatografía de exclusión molecular G-75 (1 cm x 60 cm) y cromatografía liquida de alta presión de fase reversa (RP-HPLC). La electroforesis en SDS-PAGE muestra una masa molecular ~14 KDa, que fue confirmado por la espectrometría de masa MALDI-TOF con una masa molecular de 14149.005 Da. Esta nueva PLA2 mostró un potente efecto miotóxico local (vía intramuscular) así como sistémico (vena caudal) en ratones, a una concentración de 20ug/ml y una elevada actividad inflamatoria a una concentración de 5ug/ml. La reproductibilidad de la actividad biológica, a través de los efectos farmacológicos, solo es posible con la utilización de fracciones químicamente homogéneas que mantengan la integridad de la función biología. Descriptores: PLA2, Micrurus spixii, miotoxicidad, actividad formadora de edema. Abstract A new PLA2, with myotoxic activity, was purified from de venom of Micrurus spixii, with a high degree of purity and molecular homogeneity by two chromatographic steps: molecular exclusion chromatography G-75 (1 cm x 60 cm) and high performance liquid chromatography pressure reverse phase (RP-HPLC). The SDS-PAGE electrophoresis shows a molecular mass ~ 14 kDa, which was confirmed by mass spectrometry MALDI-TOF with a molecular mass of 14149,005 Da. This new PLA2 showed a potent myotoxic local effect (intramuscular way) and systemic too (tail vein) in mice, at a concentration of 20ug/ml compared to other snake of the same gender and high inflammatory activity at a concentration of 5ug / ml. The reproducibility of biological activity through the pharmacological effects is only possible with the use of chemically homogeneous fractions that keep the integrity of the biology activity. Keywords: PLA2, Micrurus spixii, myotoxic, edema-forming activity.