{"title":"常见细胞错误的质量控制：微等离子体污染表、Sitocome B和Sitocome氧化酶Alt unit I类分析的性能","authors":"Habibe Kahya, Tuğçe Karaduman","doi":"10.38079/igusabder.1114239","DOIUrl":null,"url":null,"abstract":"Amaç: Laboratuvarlarda sık kullanılan serviks epitelyal karsinom (HeLa), insan periferal kan promiyelösitik lösemi (HL-60), fare C3/bağ dokusu (L929), Madin Darby köpek böbrek (MDCK), fare nöroblastom (Neuro-2a) gibi bazı hücre hatlarının mikoplazma kontaminasyon kontrollerinin yapılması, kimlik doğrulamalarının gerçekleştirilmesi ve klonalitelerinin belirlenmesidir.Yöntem: Bu çalışmada üç farklı türe ait beş hücre hattı kullanılmıştır. Çalışılan tüm hatların Bisbenzimid (Hoechst 33258) ile deoksiribonükleik asit (DNA) floresan işaretlemesi yapılarak mikoplazma kontaminasyonu kontrolleri gerçekleştirilmiştir. Hücre hatlarından DNA izolasyonları yapılmış, elde edilen DNA örneklerinden sitokrom B (CYTB) geninin bölgesel amplifikasyonu için L14816 ve H15173 primerleri; sitokrom oksidaz alt birim I (COI) geni için ise LCO 1490 and HCO 2198 primerleri kullanılmıştır. İlgili amplifikasyonların DNA dizi analiz sonuçları, biyoinformatik araçlar kullanılarak referans dizilerle karşılaştırmalı olarak değerlendirilmiştir.Bulgular: Çalışmada ilgili hücrelerin, Bisbenzimid (Hoechst 33258) ile üretici firmanın protokollerine göre belirlenen konsantrasyon ve sürede yapılan boyama sonucunda mikoplazma kontaminasyonuna rastlanılmamıştır. Ayrıca CYTB gen bölgesi için veritabanında yer alan referans dizi ile yapılan karşılaştırma sonucu HL-60 için %97; \"HeLa, L929, MDCK, Neuro-2a” hücre hatları için ise %98 oranında benzerlik bulunmuştur. COI gen bölgesi için ise bu benzerlik oranları “HeLa, HL-60, L929, MDCK ve Neuro-2a” hücre hatları için sırasıyla %95, %99, %96, %96 ve %98 olarak bulunmuştur.Sonuç: Bu bağlamda, çalışmadan elde edilen Bisbenzimid (Hoechst 33258) işaretleme ve DNA dizi analiz sonuçları, pek çok araştırmada kullanılan bu hücre hatlarının kalitesi konusunda kabul edilebilir bir belirteç ve güven sağlamıştır. ","PeriodicalId":34582,"journal":{"name":"Istanbul Gelisim Universitesi Saglik Bilimleri Dergisi","volume":null,"pages":null},"PeriodicalIF":0.0000,"publicationDate":"2022-12-31","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":"0","resultStr":"{\"title\":\"Sık Kullanılan Bazı Hücre Hatları için Kalite Kontrol: Mikoplazma Kontaminasyon Tespiti, Sitokrom B ve Sitokrom Oksidaz Alt Birim I Genlerinin DNA Dizi Analizlerinin Gerçekleştirilmesi\",\"authors\":\"Habibe Kahya, Tuğçe Karaduman\",\"doi\":\"10.38079/igusabder.1114239\",\"DOIUrl\":null,\"url\":null,\"abstract\":\"Amaç: Laboratuvarlarda sık kullanılan serviks epitelyal karsinom (HeLa), insan periferal kan promiyelösitik lösemi (HL-60), fare C3/bağ dokusu (L929), Madin Darby köpek böbrek (MDCK), fare nöroblastom (Neuro-2a) gibi bazı hücre hatlarının mikoplazma kontaminasyon kontrollerinin yapılması, kimlik doğrulamalarının gerçekleştirilmesi ve klonalitelerinin belirlenmesidir.Yöntem: Bu çalışmada üç farklı türe ait beş hücre hattı kullanılmıştır. Çalışılan tüm hatların Bisbenzimid (Hoechst 33258) ile deoksiribonükleik asit (DNA) floresan işaretlemesi yapılarak mikoplazma kontaminasyonu kontrolleri gerçekleştirilmiştir. Hücre hatlarından DNA izolasyonları yapılmış, elde edilen DNA örneklerinden sitokrom B (CYTB) geninin bölgesel amplifikasyonu için L14816 ve H15173 primerleri; sitokrom oksidaz alt birim I (COI) geni için ise LCO 1490 and HCO 2198 primerleri kullanılmıştır. İlgili amplifikasyonların DNA dizi analiz sonuçları, biyoinformatik araçlar kullanılarak referans dizilerle karşılaştırmalı olarak değerlendirilmiştir.Bulgular: Çalışmada ilgili hücrelerin, Bisbenzimid (Hoechst 33258) ile üretici firmanın protokollerine göre belirlenen konsantrasyon ve sürede yapılan boyama sonucunda mikoplazma kontaminasyonuna rastlanılmamıştır. Ayrıca CYTB gen bölgesi için veritabanında yer alan referans dizi ile yapılan karşılaştırma sonucu HL-60 için %97; \\\"HeLa, L929, MDCK, Neuro-2a” hücre hatları için ise %98 oranında benzerlik bulunmuştur. COI gen bölgesi için ise bu benzerlik oranları “HeLa, HL-60, L929, MDCK ve Neuro-2a” hücre hatları için sırasıyla %95, %99, %96, %96 ve %98 olarak bulunmuştur.Sonuç: Bu bağlamda, çalışmadan elde edilen Bisbenzimid (Hoechst 33258) işaretleme ve DNA dizi analiz sonuçları, pek çok araştırmada kullanılan bu hücre hatlarının kalitesi konusunda kabul edilebilir bir belirteç ve güven sağlamıştır. \",\"PeriodicalId\":34582,\"journal\":{\"name\":\"Istanbul Gelisim Universitesi Saglik Bilimleri Dergisi\",\"volume\":null,\"pages\":null},\"PeriodicalIF\":0.0000,\"publicationDate\":\"2022-12-31\",\"publicationTypes\":\"Journal Article\",\"fieldsOfStudy\":null,\"isOpenAccess\":false,\"openAccessPdf\":\"\",\"citationCount\":\"0\",\"resultStr\":null,\"platform\":\"Semanticscholar\",\"paperid\":null,\"PeriodicalName\":\"Istanbul Gelisim Universitesi Saglik Bilimleri Dergisi\",\"FirstCategoryId\":\"1085\",\"ListUrlMain\":\"https://doi.org/10.38079/igusabder.1114239\",\"RegionNum\":0,\"RegionCategory\":null,\"ArticlePicture\":[],\"TitleCN\":null,\"AbstractTextCN\":null,\"PMCID\":null,\"EPubDate\":\"\",\"PubModel\":\"\",\"JCR\":\"\",\"JCRName\":\"\",\"Score\":null,\"Total\":0}","platform":"Semanticscholar","paperid":null,"PeriodicalName":"Istanbul Gelisim Universitesi Saglik Bilimleri Dergisi","FirstCategoryId":"1085","ListUrlMain":"https://doi.org/10.38079/igusabder.1114239","RegionNum":0,"RegionCategory":null,"ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":null,"EPubDate":"","PubModel":"","JCR":"","JCRName":"","Score":null,"Total":0}
引用次数: 0
摘要
目的是建立某些细胞系的微等离子体污染控制，如HL-60、小鼠C3/结缔组织（L929）、Madin-Darby狗癌症（MDCK）、小鼠神经母细胞瘤（Neuro-2a），并验证身份验证和克隆性。方法：在本研究中，使用了三种不同类型的细胞系。已经通过形成由联苯胺（Hoechst 33258）和脱氧核糖酸（DNA）标记的磷来控制微等离子体污染。来自细胞系的DNA分离的用于细胞色素B（CYTB）的局部扩增的样品L14816和H15173由获得的DNA样品制成；LCO 1490和HCO 2198引物用于细胞色素氧化酶亚基I（COI）基因。Ilgili扩增了yonların DNA dizi analiz sonuçları，biyoinformatik araçlar kullanılarak指的是dizilerle karşılaştırmalıolarak değerlendirilmiştir。研究结果是：由于支原体污染，尚未观察到联苯胺（Hoechst 33258）和制造商的方案的细胞浓度和逐渐绘画。此外，在CYTB基因区域数据库中，HL-60与HL-97%参考序列的比较结果；总体而言，L929、MDCK、Neuro-2a细胞系的98%相似。对于COI基因区域，HeLa、HL-60、L929、MDCK和Neuro-2a'细胞的比较分别为95%、99%、96%和98%。因此，在没有功的情况下获得了联苯胺（Hoechst 33258）签名和DNA序列分析结果为许多研究中使用的这些细胞系的质量提供了指示和信心。
Sık Kullanılan Bazı Hücre Hatları için Kalite Kontrol: Mikoplazma Kontaminasyon Tespiti, Sitokrom B ve Sitokrom Oksidaz Alt Birim I Genlerinin DNA Dizi Analizlerinin Gerçekleştirilmesi
Amaç: Laboratuvarlarda sık kullanılan serviks epitelyal karsinom (HeLa), insan periferal kan promiyelösitik lösemi (HL-60), fare C3/bağ dokusu (L929), Madin Darby köpek böbrek (MDCK), fare nöroblastom (Neuro-2a) gibi bazı hücre hatlarının mikoplazma kontaminasyon kontrollerinin yapılması, kimlik doğrulamalarının gerçekleştirilmesi ve klonalitelerinin belirlenmesidir.Yöntem: Bu çalışmada üç farklı türe ait beş hücre hattı kullanılmıştır. Çalışılan tüm hatların Bisbenzimid (Hoechst 33258) ile deoksiribonükleik asit (DNA) floresan işaretlemesi yapılarak mikoplazma kontaminasyonu kontrolleri gerçekleştirilmiştir. Hücre hatlarından DNA izolasyonları yapılmış, elde edilen DNA örneklerinden sitokrom B (CYTB) geninin bölgesel amplifikasyonu için L14816 ve H15173 primerleri; sitokrom oksidaz alt birim I (COI) geni için ise LCO 1490 and HCO 2198 primerleri kullanılmıştır. İlgili amplifikasyonların DNA dizi analiz sonuçları, biyoinformatik araçlar kullanılarak referans dizilerle karşılaştırmalı olarak değerlendirilmiştir.Bulgular: Çalışmada ilgili hücrelerin, Bisbenzimid (Hoechst 33258) ile üretici firmanın protokollerine göre belirlenen konsantrasyon ve sürede yapılan boyama sonucunda mikoplazma kontaminasyonuna rastlanılmamıştır. Ayrıca CYTB gen bölgesi için veritabanında yer alan referans dizi ile yapılan karşılaştırma sonucu HL-60 için %97; "HeLa, L929, MDCK, Neuro-2a” hücre hatları için ise %98 oranında benzerlik bulunmuştur. COI gen bölgesi için ise bu benzerlik oranları “HeLa, HL-60, L929, MDCK ve Neuro-2a” hücre hatları için sırasıyla %95, %99, %96, %96 ve %98 olarak bulunmuştur.Sonuç: Bu bağlamda, çalışmadan elde edilen Bisbenzimid (Hoechst 33258) işaretleme ve DNA dizi analiz sonuçları, pek çok araştırmada kullanılan bu hücre hatlarının kalitesi konusunda kabul edilebilir bir belirteç ve güven sağlamıştır.
求助内容：
应助结果提醒方式：
京公网安备 11010802042870号
