获得突变型人类α-突触核蛋白 G51D 蛋白及其部分特征,并制备其多克隆抗体。

Mauricio Rey Buitrago, Mauricio Gantiva Gantiva
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摘要

α-突触核蛋白(SNCA)是一种参与形成聚集体的蛋白质,它的存在是所有α-突触核蛋白病和某些成瘾症的显著特征。编码 SNCA 的基因和该蛋白合成的改变与聚集过程有关,聚集过程改变了 SNCA 的构象,使其具有自我聚集能力,这与 SNCA 存在于多巴胺能神经元中有关,可能是导致疾病进展的重要病理生理因素。最常见的 SNCA 基因变异之一是 G51D,它可能是长效神经元疾病和成瘾的解剖病理学标志。本研究介绍了重组 SNCA G51D 蛋白的表达、纯化和表征技术,以及聚集试验。此外,还详细介绍了获得针对 SNCA G51D 的多克隆抗体的情况。我们还使用 pET30a 载体优化了该变体的克隆,该载体提供了最高的硅可溶性。通过重组蛋白,我们获得了抗 SNCA G51D 的多克隆抗体,并对其进行了部分鉴定,该抗体可作为一种重要的免疫学工具,用于确认相关样本中是否存在突变蛋白。
本文章由计算机程序翻译,如有差异,请以英文原文为准。
Obtención y caracterización parcial de la proteína humana mutante α-sinucleína G51D y la producción de su anticuerpo policlonal
La α-sinucleína (SNCA) es una proteína que participa en la formación de agregados, cuya presencia es distintiva para todas las α-sinucleinopatías y algunas adicciones. Las alteraciones en el gen que codifica la SNCA y en la síntesis de esta proteína han sido relacionadas con procesos de agregación que alteran su conformación y adquieren capacidad autoagregante, lo cual está relacionado con su presencia en las neuronas dopaminérgicas y podría ser un factor fisiopatológico significativo en la progresión de enfermedades. Una de las variantes génicas más comunes de la SNCA es la G51D, la cual podría ser un indicador anatomopatológico para enfermedades neuronales y adicciones de larga duración. En el presente estudio se exponen las técnicas de expresión, purificación y caracterización de la proteína recombinante SNCA G51D, además de ensayos de agregación. Así mismo, se detallan las circunstancias para la obtención del anticuerpo de tipo policlonal dirigido hacia la SNCA G51D. También se realizó la optimización para la clonación de esta variante, utilizando el vector pET30a, el cual nos brindó la mayor solubilidad in silico. La proteína recombinante permitió la obtención de un anticuerpo policlonal anti SNCA G51D, que se caracterizó parcialmente y podría ser una herramienta inmunológica significativa en la confirmación de la existencia de proteínas mutantes en muestras de interés.
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