{"title":"产气荚膜梭菌β-葡萄糖醛酸酶","authors":"Yoshiaki Sakaguchi, Kenjiro Murata","doi":"10.1016/S0174-3031(84)80056-6","DOIUrl":null,"url":null,"abstract":"<div><p>GAM broth was cultured for 5 days at 37°C to obtain maximum yields of extracellular β-glucuronidase from smooth colonies of <em>Clostridium perfringens</em> (Hobbs' type 4) isolated from the feces of a patient. A crude enzyme preparation was obtained by 20–80% ammonium sulfate precipitation of the broth. The β-glucuronidase was purified using DEAE cellulose column chromatography, gel filtration on Sephadex G-200, and affinity chromatography on Sepharose 4B-bound glucuronolactone. We obtained two kinds of β-glucuronidase. Properties of the purified β-glucuronidase I were an optimum pH of 7.2, a pH stability range below 7.0, and a molecular weight of 115,000. The purified β-glucuronidase II had an optimum pH of 6.0, pH stability at around 6.0, and a molecular weight of 195,000.</p><p>Cu<sup>++</sup> and Hg<sup>++</sup> were strong inhibitors, which inhibition was restored by cysteine. EDTA did not influence enzyme activity. The Michaelis constants of β-glucuronidase I and β-glucuronidase II for p-nitrophenyl glucuronide were 1.25 × 10<sup>-3</sup> M and 4.17 × 10<sup>-4</sup> M, for naphthol AS-BI glucuronide 1.35 × 10<sup>-4</sup> M and 1.14 × 10<sup>-4</sup> M, and for phenolphthalein glucuronide 7.46 × 10<sup>-5</sup> M and 2.50 × 10<sup>-4</sup> M.</p></div><div><p>Glatte Kolonien von <em>Clostridium perfringens</em> (Hobbs' Typ 4), das aus dem Stuhl eines Patienten isoliert worden war, wurden in GAM-Bouillon 5 Tage bei 37°C gezüchtet, um maximale Ausbeuten an extrazellulären β-Glucuronidase zu erhalten. Ein Rohenzympräparat wurde durch Fällung mit 20–80% Ammoniumsulfat aus der Bouillon gewonnen.</p><p>Die β-Glucuronidase wurde gereinigt mittels DEAE-Cellulose-Säulenchromatographie, Gelfiltration über Sephadex G 200 und Affinitätschromatographie an Sepharose-4B-gebundenem Glucuronolacton.</p><p>Wir erhielten 2 Arten von β-Glucuronidase. Die Eigenschaften der gereinigten β-Glucuronidase I waren: ein pH-Optimum von 7,2, ein pH-Stabilitätsbereich unter pH 7,0 und ein Molekulargewicht von 115 000. Die gereinigte β-Glucuronidase II hatte ein pH-Optimum von 6,0, eine pH-Stabilität um pH 6,0 und ein MG von 195 000.</p><p>Cu<sup>++</sup> und Hg<sup>++</sup> waren starke Inhibitoren. Die Inhibition wurde durch Cystein aufgehoben. EDTA beeinflußte die Enzymaktivität nicht.</p><p>Die Michaelis-Konstanten von β-Glucuronidase I und β-Glucuronidase II waren für p-Nitrophenyl-glucuronid 1,25 × 10<sup>-3</sup> M und 4.17 × 10<sup>-4</sup> M, für Naphthol-AS-BI-glucuronid 1,35 × 10<sup>-4</sup> M und 1,14 × 10<sup>-4</sup> M, sowie für Phenolphthalein-glucuronid 7,46 × 10<sup>-5</sup> M und 2,50 × 10<sup>-4</sup> M.</p></div>","PeriodicalId":79282,"journal":{"name":"Zentralblatt fur Bakteriologie, Mikrobiologie und Hygiene. 1. Abt. Originale A, Medizinische Mikrobiologie, Infektionskrankheiten und Parasitologie = International journal of microbiology and hygiene. 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摘要
GAM肉液在37℃下培养5天，从患者粪便中分离出的产气荚膜梭菌(Hobbs’4型)光滑菌落中获得细胞外β-葡萄糖醛酸酶的最大产量。用20-80%硫酸铵沉淀得到粗酶制剂。采用DEAE纤维素柱层析、Sephadex G-200凝胶过滤和Sepharose 4b结合的葡萄糖醛酸内酯亲和层析纯化β-葡萄糖醛酸酶。我们得到了两种β-葡萄糖醛酸酶。纯化得到的β-葡萄糖醛酸酶I的最适pH值为7.2,pH稳定范围在7.0以下，分子量为11.5万。纯化后的β-葡萄糖醛酸酶II的最适pH为6.0,pH稳定性在6.0左右，分子量为19.5万。Cu++和Hg++为强抑制剂，半胱氨酸可恢复其抑制作用。EDTA对酶活性无影响。β-葡萄糖醛酸酶I和β-葡萄糖醛酸酶II的米氏常数分别为1.25 × 10-3 M和4.17 × 10-4 M，萘酚AS-BI葡萄糖醛酸酶为1.35 × 10-4 M和1.14 × 10-4 M，酚酞葡萄糖醛酸酶为7.46 × 10-5 M和2.50 × 10-4 M. glatte Kolonien von perstridium perfringens (Hobbs’4型)，das aus dem Stuhl eines patientisoliert worden war，在GAM-Bouillon 5 Tage bei 37°C gezchet中测定。um maximale Ausbeuten和extrazellulären β-葡萄糖醛酸酶。Ein Rohenzympräparat wurde durch Fällung mit 20-80%硫酸铵aus der Bouillon gewonnen。Die β-葡萄糖醛酸酶(β-Glucuronidase)， Gelfiltration ， Sepharose-4B-gebundenem Glucuronolacton, DEAE-Cellulose-Säulenchromatographie。β-葡糖苷酸酶。Die Eigenschaften der gereinigten β-Glucuronidase I waren: in pH- optimal von 7,2, ein pH-Stabilitätsbereich under pH 7,0和ein分子量为115,000。Die gerinigte β-Glucuronidase II hatte in pH- optimum von 6,0, eine pH-Stabilität um pH 6,0和in MG von 195,000。Cu++和Hg++不具有明显的抑制作用。半胱氨酸的死亡抑制作用。EDTA beeinflußte die Enzymaktivität night。β-葡糖醛酸酶I和β-葡糖醛酸酶II的研究:萘酚- as -双-葡糖醛酸1,35 × 10-4和1,14 × 10-4，苯酚-葡糖醛酸7,46 × 10-5和2,50 × 10-4。
GAM broth was cultured for 5 days at 37°C to obtain maximum yields of extracellular β-glucuronidase from smooth colonies of Clostridium perfringens (Hobbs' type 4) isolated from the feces of a patient. A crude enzyme preparation was obtained by 20–80% ammonium sulfate precipitation of the broth. The β-glucuronidase was purified using DEAE cellulose column chromatography, gel filtration on Sephadex G-200, and affinity chromatography on Sepharose 4B-bound glucuronolactone. We obtained two kinds of β-glucuronidase. Properties of the purified β-glucuronidase I were an optimum pH of 7.2, a pH stability range below 7.0, and a molecular weight of 115,000. The purified β-glucuronidase II had an optimum pH of 6.0, pH stability at around 6.0, and a molecular weight of 195,000.
Cu++ and Hg++ were strong inhibitors, which inhibition was restored by cysteine. EDTA did not influence enzyme activity. The Michaelis constants of β-glucuronidase I and β-glucuronidase II for p-nitrophenyl glucuronide were 1.25 × 10-3 M and 4.17 × 10-4 M, for naphthol AS-BI glucuronide 1.35 × 10-4 M and 1.14 × 10-4 M, and for phenolphthalein glucuronide 7.46 × 10-5 M and 2.50 × 10-4 M.
Glatte Kolonien von Clostridium perfringens (Hobbs' Typ 4), das aus dem Stuhl eines Patienten isoliert worden war, wurden in GAM-Bouillon 5 Tage bei 37°C gezüchtet, um maximale Ausbeuten an extrazellulären β-Glucuronidase zu erhalten. Ein Rohenzympräparat wurde durch Fällung mit 20–80% Ammoniumsulfat aus der Bouillon gewonnen.
Die β-Glucuronidase wurde gereinigt mittels DEAE-Cellulose-Säulenchromatographie, Gelfiltration über Sephadex G 200 und Affinitätschromatographie an Sepharose-4B-gebundenem Glucuronolacton.
Wir erhielten 2 Arten von β-Glucuronidase. Die Eigenschaften der gereinigten β-Glucuronidase I waren: ein pH-Optimum von 7,2, ein pH-Stabilitätsbereich unter pH 7,0 und ein Molekulargewicht von 115 000. Die gereinigte β-Glucuronidase II hatte ein pH-Optimum von 6,0, eine pH-Stabilität um pH 6,0 und ein MG von 195 000.
Cu++ und Hg++ waren starke Inhibitoren. Die Inhibition wurde durch Cystein aufgehoben. EDTA beeinflußte die Enzymaktivität nicht.
Die Michaelis-Konstanten von β-Glucuronidase I und β-Glucuronidase II waren für p-Nitrophenyl-glucuronid 1,25 × 10-3 M und 4.17 × 10-4 M, für Naphthol-AS-BI-glucuronid 1,35 × 10-4 M und 1,14 × 10-4 M, sowie für Phenolphthalein-glucuronid 7,46 × 10-5 M und 2,50 × 10-4 M.
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