CYTOTOXIC AND GENOTOXIC ACTIVITY OF PHENOLIC FRACTIONS FROM Ulomoides dermestoides FAIRMAIRE, 1893 (COLEOPTERA, TENEBRIONIDAE), IN HACAT CELLS

Dary Luz Mendoza-Meza, Pierine España-Puccini
{"title":"CYTOTOXIC AND GENOTOXIC ACTIVITY OF PHENOLIC FRACTIONS FROM Ulomoides dermestoides FAIRMAIRE, 1893 (COLEOPTERA, TENEBRIONIDAE), IN HACAT CELLS","authors":"Dary Luz Mendoza-Meza,&nbsp;Pierine España-Puccini","doi":"10.1016/j.recqb.2016.06.001","DOIUrl":null,"url":null,"abstract":"<div><p><em>Ulomoides dermestoides</em> (Fairmaire, 1893) is a beetle used in alternative medicine treatments in some South American countries. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic and genotoxic effects of phenolic fractions (PF) from <em>U. dermestoides</em>. The PF were separated from crude extracts in acetone (PFAc) and ethanol (PFEtOH). The total phenolic content (TPC) was determined by Folin-Ciocalteu test. Volatile and semi-volatile compounds presents in crude extracts were identified by GC-MS; moreover, phenolic fractions were analyzed by HPLC-MS. The cellular viability, after exposition to phenolic fractions, was determined by Trypan blue exclusion test and MTT reduction assay on immortalized human keratinocyte cell line (HaCat); the degree of DNA damage was detected by alkaline comet-DNA assay. The TPC in PFAc and PFEtOH were: 11.34±0.88 mgGAE/g and 6.52±1.28 mgGAE/g, respectively (mean.dif: 4.951; p value = 0.0000). In both samples, HPLC-MS showed a pseudo-molecular ion [M-H]<sup>−</sup> at m/z 153, tentatively identified as protocatechuic acid. The results of cytotoxic assays suggest that the viability of HaCat cells depends on the concentration and exposure time of each treatment. Furthermore, the comet assay revealed moderate genotoxic effect after 48<!--> <!-->hours of exposure to PFAc (40 to 160<!--> <!-->μg.mL<sup>−1</sup>); cytotoxic/genotoxic activity of this fraction could be related to the higher phenol contents.</p></div><div><p><em>Ulomoides dermestoides</em> (Fairmaire, 1893), es un escarabajo usado en medicina alternativa en algunos países de Sudamérica. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto citotóxico y genotóxico de fracciones fenólicas (FF) de extractos de <em>U. dermestoides</em>. Las FF se separaron desde extractos acetónicos (FFAc) y etanólicos (FFEtOH). El contenido de fenoles totales (CFT) se determinó mediante ensayo de Folin-Ciocalteu. Compuestos volátiles y semi-volátiles, presentes en los extractos crudos, se identificaron mediante CG-EM; por otra parte, las FF se analizaron por HPLC-EM. La viabilidad celular, después de exposición a las FF se determinó mediante la prueba de exclusión con azul de tripano y el ensayo de reducción con MTT, usando la línea celular de queratinocitos humanos inmortalizados (HaCat); el grado de daño en el ADN se detectó mediante el ensayo de ADN-cometa alcalino. CFT en FFAc y FFEtOH fueron: 11,34±0,88 mgAGE/g y 6,52±1,28 mgAGE/g, respectivamente (dif.media: 4,951; <em>p value</em> = 0.0000). En ambas muestras, HPLC-EM mostró un ion pseudo-molecular [M−H]<sup>−</sup> a 153m/z, identificado tentativamente como ácido protocateuico. Los resultados de los ensayos de citotoxicidad sugieren que la viabilidad de células HaCat depende de la concentración y el tiempo de exposición a cada tratamiento. Además, el ensayo cometa reveló efecto genotóxico moderado después de 48<!--> <!-->h de exposición a FFAc (40 a 160<!--> <!-->μg.mL<sup>−1</sup>). La actividad citotóxica/genotóxica de esta fracción podría estar relacionada con el contenido más alto de fenoles.</p></div>","PeriodicalId":31507,"journal":{"name":"TIP Revista Especializada en Ciencias QuimicoBiologicas","volume":"19 2","pages":"Pages 83-91"},"PeriodicalIF":0.0000,"publicationDate":"2016-08-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"https://sci-hub-pdf.com/10.1016/j.recqb.2016.06.001","citationCount":"4","resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":null,"PeriodicalName":"TIP Revista Especializada en Ciencias QuimicoBiologicas","FirstCategoryId":"1085","ListUrlMain":"https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1405888X16300018","RegionNum":0,"RegionCategory":null,"ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":null,"EPubDate":"","PubModel":"","JCR":"","JCRName":"","Score":null,"Total":0}
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Abstract

Ulomoides dermestoides (Fairmaire, 1893) is a beetle used in alternative medicine treatments in some South American countries. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic and genotoxic effects of phenolic fractions (PF) from U. dermestoides. The PF were separated from crude extracts in acetone (PFAc) and ethanol (PFEtOH). The total phenolic content (TPC) was determined by Folin-Ciocalteu test. Volatile and semi-volatile compounds presents in crude extracts were identified by GC-MS; moreover, phenolic fractions were analyzed by HPLC-MS. The cellular viability, after exposition to phenolic fractions, was determined by Trypan blue exclusion test and MTT reduction assay on immortalized human keratinocyte cell line (HaCat); the degree of DNA damage was detected by alkaline comet-DNA assay. The TPC in PFAc and PFEtOH were: 11.34±0.88 mgGAE/g and 6.52±1.28 mgGAE/g, respectively (mean.dif: 4.951; p value = 0.0000). In both samples, HPLC-MS showed a pseudo-molecular ion [M-H] at m/z 153, tentatively identified as protocatechuic acid. The results of cytotoxic assays suggest that the viability of HaCat cells depends on the concentration and exposure time of each treatment. Furthermore, the comet assay revealed moderate genotoxic effect after 48 hours of exposure to PFAc (40 to 160 μg.mL−1); cytotoxic/genotoxic activity of this fraction could be related to the higher phenol contents.

Ulomoides dermestoides (Fairmaire, 1893), es un escarabajo usado en medicina alternativa en algunos países de Sudamérica. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto citotóxico y genotóxico de fracciones fenólicas (FF) de extractos de U. dermestoides. Las FF se separaron desde extractos acetónicos (FFAc) y etanólicos (FFEtOH). El contenido de fenoles totales (CFT) se determinó mediante ensayo de Folin-Ciocalteu. Compuestos volátiles y semi-volátiles, presentes en los extractos crudos, se identificaron mediante CG-EM; por otra parte, las FF se analizaron por HPLC-EM. La viabilidad celular, después de exposición a las FF se determinó mediante la prueba de exclusión con azul de tripano y el ensayo de reducción con MTT, usando la línea celular de queratinocitos humanos inmortalizados (HaCat); el grado de daño en el ADN se detectó mediante el ensayo de ADN-cometa alcalino. CFT en FFAc y FFEtOH fueron: 11,34±0,88 mgAGE/g y 6,52±1,28 mgAGE/g, respectivamente (dif.media: 4,951; p value = 0.0000). En ambas muestras, HPLC-EM mostró un ion pseudo-molecular [M−H] a 153m/z, identificado tentativamente como ácido protocateuico. Los resultados de los ensayos de citotoxicidad sugieren que la viabilidad de células HaCat depende de la concentración y el tiempo de exposición a cada tratamiento. Además, el ensayo cometa reveló efecto genotóxico moderado después de 48 h de exposición a FFAc (40 a 160 μg.mL−1). La actividad citotóxica/genotóxica de esta fracción podría estar relacionada con el contenido más alto de fenoles.

黄芪酚类成分对HACAT细胞的细胞毒性和基因毒性活性,1993(鞘翅目,拟甲科)
Ulomoides dermestoides (Fairmaire, 1893)是南美洲一些国家用于替代医学治疗的甲虫。本研究的目的是评估皮霉酚组分(PF)的细胞毒性和遗传毒性作用。用丙酮(PFAc)和乙醇(PFEtOH)对粗提物进行分离。采用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量(TPC)。采用气相色谱-质谱法鉴定了粗提物中的挥发性和半挥发性化合物;HPLC-MS分析酚类组分。用台番蓝排除法和MTT还原法测定永生化人角化细胞(HaCat)暴露于酚类组分后的细胞活力;用碱性彗星-DNA法检测DNA损伤程度。PFAc和PFEtOH的TPC分别为:11.34±0.88 mgGAE/g和6.52±1.28 mgGAE/g(平均。dif: 4.951;P值= 0.0000)。在这两个样品中,HPLC-MS显示一个伪分子离子[m - h] - at m/z 153,初步鉴定为原儿茶酸。细胞毒性试验结果表明,HaCat细胞的活力取决于每次处理的浓度和暴露时间。此外,彗星试验显示,暴露于PFAc 48小时(40 ~ 160 μg.mL−1)后,基因毒性中等;该部位的细胞毒/基因毒活性可能与较高的酚含量有关。黄斑病(Fairmaire, 1893年),是一种常见的黄斑病,也是一种替代药物,可用于治疗黄斑病países。目的:通过genotóxico de fracciones fenólicas (FF) de extractos de the us derestestestudio评价citotóxico的效果。本文采用分离萃取物acetónicos (FFAc)和etanólicos (FFEtOH)。El contenido de fenoles totales (CFT) se determinó mediante ensayo de Folin-Ciocalteu。Compuestos volátiles y semi-volátiles,提出了两种提取方法,并通过CG-EM进行鉴定;其它部分较差,其余部分分析较差。La viabilidad cellular, despusamas de exposición a las FF se determinó mediante La prueba de exclusión con azul de tripano de el ensoo de reducción con MTT, usando La línea cell de queratinocitos humanos inmortalizados (HaCat);el grado de daño en el ADN se detectó mediante el desayo de ADN-cometa alcalino。CFT / FFAc / FFEtOH浓度分别为11.34±0.88 mg /g和6.52±1.28 mg /g。媒体:4951;P值= 0.0000)。En ambas muestro, HPLC-EM mostró联合伪分子[M−H]−a 153m/z,鉴定暂定的como ácido protocateuico。结果表明,在遗传变异的情况下,遗传变异的生存能力取决于遗传变异concentración和遗传变异的时间exposición。Además, el ensayo cometa reveló effecto genotóxico moderado despusams de 48 h de exposición a FFAc (40 a 160 μg.mL−1)。La actividad citotóxica/genotóxica de esta fracción podría estar relacionada con el contenido más alto de fenoles。
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