A comparative study on the pretreatment methods for the cultivation of mycobacterium tuberculosis on LJ medium using pancreatin as digestant for sputa

Abstract

Pancreatin was used as mucolytic agent in combination with sodium hydroxide and oxalic acid. Assessment of the appropriate concentration of the two decontaminants and the optimum contact time was made. It was observed that 2.5% sodium hydroxide with a contact time of 20 min and 3.5% oxalic acid with a contact time of 30 min yielded better results as compared to other permutations tried. Sputum specimens from 368 cases admitted to Ojha Institute of Chest Diseases were cultured for Mycobacterium tuberculosis by the modified methods described here and compared with the standard method. Higher number of positive cultures from film positive, as well as film negative specimens and fewer negatives and contaminations were observed with pancreatin/3.5% oxalic acid method. Comparatively less positives and more negatives and contaminations were noted when pancreatin/2.5% sodium hydroxide combination was used. Standard method, as compared to the pancreatin/2.5% sodium hydroxide and pancreatin/3.5% oxalic acid methods, gave fewer positive cultures both from film positive specimens and film negative specimens and higher negatives and contaminations were observed. Merits and demerits of the three methods are discussed.

Pankreatin wurde in Kombination mit Natriumhydroxid und Oxalsäure zur Schleimlösung angewandt. Die geeigneten Konzentrationen der beiden Chemikalien, die die Begleitflora abtöten sollen und die günstigste Einwirkungszeit wurden ermittelt. Es stellte sich heraus, daß eine Konzentration von 2,5% Natriumhydroxid mit einer Einwirkungszeit von 20 Min. und 3,5% Oxalsäure mit einer Einwirkungszeit von 30 Min. bessere Ergebnisse erzielte als die anderen untersuchten Konzentrationen.

Sputumproben von 368 Patienten des Oija-Krankenhauses für Lungenkranke wurden mit den hier beschriebenen Methoden im Vergleich zur Standardmethode kulturell auf Mycobacterium tuberculosis untersucht. Eine höhere Zahl positiver Kulturen sowohl von mikroskopisch positiven als auch von mikroskopisch negativen Proben und weniger negative und verunreinigte Kulturen wurden mit der Methode Pankreatin +3,5% Oxalsäure erzielt. Bei der Anwendung von Pankreatin +2,5% Natriumhydroxid ergaben sich im Vergleich mehr negative und verunreinigte Proben. Die Standardmethode erbrachte im Vergleich zu Pankreatin +2,5% Natriumhydroxid und Pankreatin +3,5 Oxalsäure weniger positive Kulturen sowohl von mikroskopisch positiven als auch von mikroskopisch negativen Proben, und es ergaben sich mehr negative und verunreinigte Kulturen.

Vor- und Nachteile der drei Methoden werden besprochen.