Electrophoretic Analysis of Alkaline Phosphatase in Rat Incisor Pulps

Japanese Journal of Oral Biology Pub Date : 2001-02-20 DOI:10.2330/JORALBIOSCI1965.43.17

Toshiyuki Toen, S. Hashimoto

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Abstract

ラット切歯歯髄組織中のアルカリ性ホスファターゼ (ALP) 活性は, マウスおよびハムスターと同程度であり, ウサギ, ウシ, ブタに比べて約10倍高かった。ラット歯髄組織から抽出したALPを, 0.1% Nonidet P-40を用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動 (native-PAGE) あるいはラウリル硫酸ナトリウムを用いた非還元のポリアクリルアミドゲル電気泳動 (SDS-PAGE) にかけると, 酵素はnative-PAGEのゲル中ではALP-N1とALP-N2に, SDS-PAGEのゲル中では130kと155kの2つに分かれた。ALP-N1とN2は, 2次元電気泳動上で130と155kにそれぞれ一致した。粗抽出ALPを単に37℃で加温するだけで, ALP-N1 (130k) はALP-N2 (155k) に変化した。このALPの変化はALP結合性タンパク質によるのではなく, ALPの抽出分画中のグリコシルホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼD (GPI-PLD) によって特異的に生じることが明らかになった。精製したALP-N1は, ALP-N2と同様の等電点 (4.3) と, ALP-N2抗体に対し同程度の結合親和性を有していた。これに対して, 脂肪酸 (C14-C18) はALP-N1中にのみガスクロマトグラフィで検出され, ALP-N2およびホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼCで処理したALP-N1中には脂肪酸は認められなかった。ALP-N1に結合したSDS量は, 脂肪酸のないALP-N2に比べて有意に多かった。これらの結果は, SDS-PAGEの泳動ゲル中をALP-N1 (130k) がALP-N2 (155k) より速く移動することを示唆している。本研究は, ラット歯髄組織のALPは分子量77kのホモダイマーであり, ALPを抽出するとき血液由来のGPI-PLDにより脂肪酸を有するものと消失したものの2種類の酵素分子が生じることを明らかにした。

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大鼠门牙髓碱性磷酸酶的电泳分析

老鼠切齿牙髓组织中的碱性磷酸酶(ALP)活性与老鼠、田鼠相同，比兔子、牛、猪高约10倍。从小白鼠牙髓组织中提取ALP0.1% Nonidet P-40聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)或劳里尔硫酸钠非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在native-PAGE凝胶中，酶分为ALP-N1和ALP-N2两种，SDS-PAGE凝胶中分为130k和155k两种。ALP-N1和N2在二维电泳上分别一致为130和155k。只需将粗提取ALP加温到37℃，ALP- n1 (130k)就变成了ALP- n2 (155k)。ALP的这种变化不是由ALP结合蛋白引起的，研究发现，ALP的提取分支中糖基磷酸化酸化物特异性磷酸化酶D (GPI-PLD)会产生特异性磷酸化。精制ALP-N1具有与ALP-N2相同的等电点(4.3)，对ALP-N2抗体具有相同程度的结合亲和性。相反，脂肪酸(C14-C18)仅在ALP-N1中用气相色谱检测出，用ALP-N2和磷脂酰肌醇特异性磷酸化酶C处理的ALP-N1中没有脂肪酸。与没有脂肪酸的ALP-N2结合的SDS量明显高于ALP-N1。这些结果表明，在SDS-PAGE的游动凝胶中，ALP-N1 (130k)比ALP-N2 (155k)移动得快。本研究表明，大鼠牙髓组织的ALP是分子量为77k的同代体，提取ALP时，血液中产生的GPI-PLD会产生具有脂肪酸和消失脂肪酸的两种酶分子。

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