Estimating the Level of Some Inflammatory Cytokines in the Serum of Women Exposed to Abortion and the Relationship with Toxoplasmosis

Abstract

This study includes the collection of (90) blood samples, eighty samples belongs to patients experienced to spontaneous or recurrent abortions, and the ten samples from women with normal pregnancy. The results showed a significant increase in the levels of cytokines in patients serum as their concentrations were (218.15±105.1 pg/L for IL-1β, 63.10±35.17 ng/L for TNF-α and 31.77±25.3ng/ml for IFN-) compared to the control as it(151.0±0.76 pg/L ,34.96±0.42 ng/L and 11.15±3.49 ng/ml) for the cytokines respectively. The level of cytokines reached (352.18 pg/L,117.8 ng/L and 63.8 ng/ml) for IL-1β,TNF-α and IFN- respectively in women infected with Toxoplasmosis compared to non-infected women (337.1 pg/L , 101.3 ng/L and 54.06 ng/ml). This indicate that toxoplasmosis has a role in the induction of immune system. Keyword: Cytokine, Toxoplasmosis, Woman abortion يف ةيباهتللاا تانيكوتياسلا ضعب ىوتسم ريدقت لاصمأ ءاسنلا هتقلاعو تاضهجملا تاسوقملا ءادب يديبعلا ليعامسا حلاص دمحم نسحملا دبع ءاقر 1 * ، نامعنلا ومح فيرش سنوي ةبيدأ 2 1 * قا رعلا ،لصوملا ،ةحصلا ةرا زو ،ىونين ةحص ةرئاد 2 قا رعلا ،لصوملا ،لصوملا ةعماج ،مولعلا ةيلك ،ةايحلا مولع مسق ةصلاخلا تتمج تتلع ةتتسا ردلا للمتتتشا (90) مد ةتتنيع ، ( 80 إا وا ئاتت لتلا اتتهجاا تتم يناتتع ناتتسن تتم اتتهنم ) ررتت تملا اتتهج و 10) ناسنل لناك ) اهجلال رعتلا هل قبسي مل ، ثلاث ىوتسم سايق مت و ة لتبق تم ةتجتنملا لانيكوتياتسلا تم عاونا اتيلاخ Th1 يكوتياتس تهو IL-1β و TNF-α و IFN- ىوتتسم تف اتيونعم اتعايترا ئات نلا لرتهلا تةرظيتسلا لاتنيعو ت رملا لاتنيع تف لتتت ل و تت رملا لاتتتنيع تتتف لانيكوتياتتسلا ±218.15) 105.1 pg/L تتتلل ) ت IL-1β ( و 63.10 ± 35.17 ng/L تتتلل ) ت TNF-α و 31.77) ± 25.3 (ng/ml لل ت IFN- ( لت لب ذا ةرظيسلا لانيعب ةنرا م 151.07 ± 0.76 pg/L و ) 34.96) ± 0.42 ng/L ) و Journal of Education and Science (ISSN 1812-125X), Vol: 30, No: 2, 2021 (33-41) 34 ( 11.15 ± 3.49 (ng/ml لاوتت لا تتلع ةتتثلاثلا لانيكوتياتتسلل ت لانيكوتياتتسلا ىوتتتسم تتف عاتتيترا اودتتح ئاتت نلا لتتني و IL-1β و TNF-α و IFN- لاباتتتتتتصملا رتتتتتتي دتتتتتتنع اهاوتتتتتتتسمب ةتتتتتتنرا م لاتتتتتتسو ملا نادتتتتتتب لاباتتتتتتصملا دتتتتتتنع لانيكوتياتتتتتتسلا ىوتتتتتتتسم ىتتتتتتلب ذا ( pg/L352.18 تتتتلل ) ت IL-1β ( , 117.8 ng/L ) تتتتلل ت TNFα ، و 63.8) ng/ml تتتتلل ) ت IFN- تتتتب ةتتتتنرا م لاباتتتتصملا دتتتتنع ت ( pg/L337.1 ( و ) 101.3 ng/L و ) 54.06) ng/ml ريتشي اتمم لاباتصملا رتي دتنع لاوت لا تلع ةتثلاثلا لانيكوتياتسلل ) إ تل أ إا ف رود اهل لاسو ملا نادب ةباص ةيعانملا لاباجتساا اح ت :ةيحاتفملا تاملكلا ناسنلا اهجا ،لاسو ملا ةمدقملا لثمت ظنم يتنجلاو ماا يتب لخادت لا ة ةتيلتخم ةتيثا رو لاتييلخ لاتمحي ينئاتك كياتعتل ةرهاتل ذإ لاعاتس دتعب ةأ رتملا متسج أدتبي ئاتصخب زات مت ت لا لمحلل ةيلواا لماوعلا ديلوت لا دمعيو عانملا زاهجلا زييحتو ملقأتلاب باصخاا اودح م ةتعانملل ةتملنم حاجنلأ ةيعيبظلا ةلتا لا ايلاخلا يب لعايتلاو زاوتلا او لمحلا ( Nk-Cells ةدعاسملا ت ايلاخو ) Th-1 ايلاخو ت ةدعاتسملا Th2 لانيكوتياسلاو لثم اهنم ةجتنملا TNF-α ,IFN-γ لمحلا حاجنل ببسلا دعت لانيكولرتناا و [ 1 ] ت ملا لانيكوتياسلا زيكرت ةدايز ا لاسا ردلا ملعم لعمجا دقو اتيلاخ م ةجتن Th-1 ةتيعيبظلا ةتلتا لا اتيلاخلا تف اتهريثأت ةداتيزو Nk-Cells اتتهجاا اودتتتح تتم دتتتيزيو يتتنجلا تتتلع رظاتتخم ببتتسي , ةدايتتتسل ةتتلاح لتتتثمي تتنا تتتلع تتعيبظلا لتتتمحلا زاتت مي اتتتميف ايلاخ Th-2 ايلاخ يب زاوتلا لع دمتعي لمحلا حاجن او , Th-1 ايلاخو Th-2 [ 2 ] ت تعيبظلا لتمحلل ةرتكبملاو تلواا لتحا رملا ف ايلاخ لانيكوتياس و ت Th-1 اتهنيو تو ةتيومدلا ةتيعواا ريوحت لجا م ةيرور Vasculo genesis إ ةتمهم ةتيلمعلا ذتهو ، حاتجن ا محرتتتلا ةتتتناظب تتتف يتتتنجلا عرزو لتتتمحل [ 3 ] ت يوتتت ت وتتتحن اوتتتحت اودتتتح تتتحلاي تجاتتتنلا لتتتمحلا تتتف ىرتتتخاا لتتتحا رملا الاتتتخ اذتتتكهو لانيكوتياس Th-2 ايلاخ لانيكوتياس لع ةدئاسلا ه تبصت تلاو Th-1 اتيلاخ لانيكوتياتس يتب بسانملا زاوتلا او Th-2 ,Th1 تلع ةتلفاحملل ادتج اتمهم دتعي تيف ةت حلالا اادتحااو لتمحلا لاتبث [ 4 ] ت ا وته ررت تملا اتهجاا اودتحل لتمتحملا ريتسيتلا ا ( ةتتيباهتلاا لتتبق اتتم لانيكوتياتتسلا y cytokinesProinflammator ) ( ةتتيعيبظلا ةتتلتا لا اتتيلاخلا لتتيوحت تتلع لتتمعت دتتق Nk-Cells ) ( ةتتيوايمللا اتتيلاخلا تتم تتتنملا يكوتياتتسلاب ةظتتشنم ةتتلتاق اتتيلاخ تتلا Lymphokine activated killer cell ) اهرودتتب لتتمعت تت لاو ةيميتتشملا ةتيموراا اتتيلاخلا لتتيلحت تلع Trophoblast ت اتتيلاخ لانيكوتياتتسل رتشابملا ريثأتت لا او Th-1 وتتلخلا راتتحتناا زتتييحت وته ( ةيميتتشملا ةتيموراا اتيلاخلل Trophoblast لانيكوتياتسلا ةظتساوب ) TNF-α و IFNγ و وتتمنلل ةزتيحملا لانيكوتياتتسلا زا رتفإ إيتبثت اتتيلاخ لانيكوتياتتس لتتمعت تلذتتكو ةتتيمحرلا ةتتيئلاظلا اتتيلاخلا تتم Th-1 تتلا اتت حا د تت دتتق تت لاو إلجتتتلا لاتتيلا إيتتشنت زتتييحت تتلع ةيعواا باهتلا ةيومدلا ينجلل مدلا زيهجت لع رث ي امم [ 5 ] ، تم ةجتنملا ةيباهتلاا لبقام لانيكوتياسلا مو اتيلاخ لتبق Th-1 وته IFN- ةجسناا فلت ببسي ا كمي ذلاو الاخ ةدتم ببتسي ا تكمي لتمحلا فتلت تع تتلذو روتظتو يتنجلا وتمن تنميو ةيميتشملا ةيعيبظلا ةلتا لا ايلاخلا ةيلاعف ريوحت قيرظ NkCells رثا تو اهظيشنت ليدعتو [ 6 ] ت و ببسب رر تملا ئا لتلا اهجاا اودح ا زيكرت ةدايز IFN-γ ةظتساوب زتيحتي باتهتلاا اذتهو ةميتشملاب ةلتصتملا محرلا ةناظب ف طريم باهتلا لعف در ةجيتن وكي دق IFN-γ ، تلذ لع ةولاع ف ا دتجو د IFN-γ الاتخ تم يتنجلا تلع ماتس ريثأت تل مرتبملا وتلخلا راتحتناا زتييحت sApoptpsi ]9[ ت اتمك وتلخلا رتخنلا لتماع دتعي Tumor Necrosis Factor-α تم ةتلئاه ةتعومجم ببتسي ذا ةتيلاعيلا ددتعتم وتق يكوتياتس وته ذتلاو اتتيلاخلا تتم ةرتتيبك ةتتعومجم تتلع لا ريثأتت لا ت تتنا لتتبث دتت ف يوتت تو يتتنجلا روتتظتو ةميتتشملا يوتت تو لاتتنومرهلا ينتتصت تتلع رث تتي مهم رود لو لاديوريتسلا ةداولا ةيلمعو ةميشملا زيامت ف ، لابثا مت لقولا لاذ فو لمحلا ناهنا لع تردق [ 10 ] ت Journal of Education and Science (ISSN 1812-125X), Vol: 30, No: 2, 2021 (33-41) 35 يكوتلرتنا اتما 1 ( ات يب IL-1β ةتلئاعل دوتعت تتلا لانيكوتياتسلا دتحا وتهف ) 1Family IL ذته لمتشتو ةتلئاعلا IL-1α (IL1F1) ، IL1β (IL-1F2) ، IL-1 receptor antagonist (IL-1F3) ، IL-18(IL-1F4) ت يكوتياتتسلا زا رتتفا تتكمملا تتم IL-1β اذهلو ايلاخلا جراخ وهف لا زا رتفاا تفو لتصملا تف دجوي ام ةداع ، ةتيباهتلاا ةباجتتساا ميتلنت تف اتمهم ا رود بتعلي وتهو [ 11 ] ، وتهف لتتثم ةتتيباهتلاا إئاتتسولا تتم دتتيدعلا زا رتتفا زتتيحي 6 IL , IL-8 و TNF-A اتتيلاخلا لتتثم اتتيلاخلا تتم دتتيدعلا تتلع ريثأتت الاتتخ تتم اهري و ةاونلا ةيداحا مدلا ايلاخو ةلدعلا ايلاخلاو ةريب لا معلابلاو ةيئلاظلا [ 12 ] ت ا اا تلييظب ةباتص Toxoplasma gondii لتمحلا ناتنثا ببتست وا يتعلا فتلت لتثم يتنجلا تلع ةرتيظخو ةتميخو بتقاوع ا ستسا وا ليم ينج ةداو سأ رلا ن [ 13 ] ت تسي لا روتظلا ةتلا زا تكمي او تلييظلا اذه د حا ل دجوي او cyst تاتنهو ةجتسناا تم لييظلا اذهب ةباصاا لااح جلاعل ةظشنلاو ةلاعيلا لاجلاعلا م ليل لا [ 14 ] ةباجتتسااب فيت ملا لاتعافد ادبت ب ةباصاا دنعو ت لانيكوتياتسلا جات ن ا د تي امم ، رجتشتلا معلبتلا اتيلاخ موت ت ذا Dendritic Cells اتيلاخ و رتيب لا معلبتلا Macrophage إيتشنتب ةتيوايمللا ت اتيلاخ TCells ( ةتلتا لا ت اتيلاخ تلا زياتمتتل اتهثحو CD8 Cells ( ةدعاتسملا ت اتيلاخو ) CD4 Th-1 Cells ) جات نا تع ةلو تسم وت ت تلاو IFN- ا رود بتعلي ذتلاو اتمهم تف تلييظلا وتمن تبتك [ 15 ] ت تلييظ ا T.gondii لاتيلييظلا تم روتتيظلا تلذتكو لايدتتثلا بيتتصي ذا ةتتئظاو ةيتتصصخت تتتلميو فيت ملل ةتتئظاو ةيتتصصخت تتلو ةتتيولخ لتخاد ، تتف تتلييظلا اذتته ظوتت ي ةبتسن اتف تتلذ تم ملاتعلا ناحنا يمج 85-15) ا رتعا دوتجو مدتع تم يباتصم وتنوكي اختشاا تم )% [ 16 ] ت ناد تلييظ دتعي قا رعلا ف ا راشتنا ةيدعملا لماوعلا رث ا م وهو اسنااو اويحلا يب ةكرتشم لاباصا ببست تلاو ةمهملا لايلييظلا م لاسو ملا [ 17 ] ت تتعيبظلا لتتمحلا لاوذ ناتتسنلا تتم لاتت هجملا لاتت يرملا دتتنع ةتتيباهتلاا لانيكوتياتتسلا ىوتتتسم ةتتنرا م تتلا ةتتسا ردلا ادتتهتو رد تلذكو لانيكوتياسلا ذه ىوتسم لع لاسو ملا نادب ةباصاا ريثات ةسا اهجاا اودحو ت لمعلا قئارطو داوملا تانيكوتياسلا زيكرت سايق IL-1β و TNF-α و IFN- ةقيرطب Sandwich ELISA : سايقلا أدبم : تئايتتص لمدختتتسا Microtitre plate ماتتسجلأاب ةتتيل ملا رتتيحلا تتلع ةتتيواحلا ةداتت ملا عوتتن IgG تتتلل IL-1β ةدتتعلا تتف يكوتياتتسلا اذتته تتع فتتش لل ةتتصاخلا يكوتياتتسلل ةبتتسنلاب ااتتحلا اذتتكهو TNF-α و IFN- ةكرتتشلا لتتبق تتم ةزتتهجملاو Biossay Technology Laboratory ات يا إبترت و رتيحلا تلا تفا ا دنع مدلا لصم ف دجاوتملا ب اخلا يكوتياسلا م إبترت تلاو م ةملعملا ةدا ملا ماسجاا Biotinylated human antibody ميزتناا ةفات ا اهدعب متي Streptavidin – HRP اوتس ذتلا ةتينمز ةرت يل يت حتلا دتعب لتس لا ةتيلمعب ت لا زا متتيف إبترتملا رتي ميزتناا اتما ةتملعملا ةدات ملا ماسجاا م إبتري ت ةفات ا متتي اهدتعب ذلاو ميزنلال ساساا ةداملا دحل د ي دش بسانتت , نول لعايت او ت ةنيعلا ف يكوتياسلا زيكرت م ت اا ياا اولحم ةفا اب لعايتلا ناهنا متي مث Acidic Stop Solution جوم اوظ دنع ةيصاصتماا سا تو 450) nm ) ت Journal of Education and Science (ISSN 1812-125X), Vol: 30, No: 2, 2021 (33-41) 36 لودج ) 1 تانيكوتياسلا صحف ةدع تانوكم ) ةداملا ةيمكلا ml مجحلاو سايق اولحم 0.5 ml ساي لا اولحملا فييختل اولحم ml 3 Streptavidin – HRP 6 ml لعايتلا اا يا اولحم 6 ml ساساا ةداملا اولحم A 6 ml ساساا ةداملا اولحم B 6 ml لس لل زكرملا ئرادلا اولحملا 20 ml Biotinylated human antibody 1 ml ا بسم ةيل م ا زيلايا ةحييص ةدا ملا ماسجااب إئا رش x8 ةريح 12 مدختسملا ليلد ددع 1 بيتك ةحييصلا ناظ ددع 2 ناظ ةحييصلل فاح سيك ددع 1 سيك لمعلا ةقيرط : اهفيفختو ليلاحملا ريضحت : أ يسايقلا لولحملا فيفخت : 1 ةفر لا ةرا رح ةجرد لصتل ربتخملا ف لانيعلا لكرت ت 2 مث في ن 120 μl م رملا ساي لا اولحملا زك ( 800 pg/L ( يكوتياسلل ) IL-1 (و ) 480 ng/ml يكوتياسلل ) ( IFN- (و ) 930 ng/L ( يكوتياسلل ) TNF- ) مقر بوبناا لا 6 لع واحلا 120 μl مت تلذ و فيخملا اولحملا م زيكرتلا لع اوصحلا 8000 pg/l يكوتياسلل IL-1β زيكرتو 480 ng/ml يكوتياسلل  IFNزيكرتو 960 ng/l يكوتياسلل  TNF، ةدمل يزملا ترت 15 ل نب تلذو ساي لا اولحملا م ةيعا م فيفاخت لر ح مث ة يقد 120 μl مقر بوبناا م 6 مقر بوبناا لا 5 لع واحلا 120 μl فيفاختلا لع اوصحلل رمتسن اذكهو فيخملا اولحملا م تياسلل ةلسلستملا ةثلاثلا لانيكو TNF- , IFN- , IL-1β لاتلا اودجلا بسحو : لودجلا ( 2 ) تانيكوتياسلا فيفاخت ريضحت تانيكوتياسلا مقر بوبناا 1 مقر بوبناا 2 مقر بوبناا 3 مقر بوبناا 4 مقر بوبناا 5 IL-1β 250 pg/L 500 pg/L 1000 pg/L 2000 pg/L 4000 pg/L IFN- 15 ng/ml 30 ng/ml 60 ng/ml 120 ng/ml 240 ng/ml TNF- 30 ng/L 60 ng/L 120 ng/L 240 ng/L 480 ng/L ب ( لسغلل ءيرادلا لولحملا ريضحت Wash Buffer ) : فييخت مت 20 ml زكرملا لس لا ن راد م 25 مجح رظ م نامب ةرم 500 ml ت لمعلا تاوطخ : 1 , ليلاحملا لك ري حت مت مث لانيعلاو ساي لا اولحملا لكرت ةفر لا ةرا رح ةجردب ت 2 تلا إئا رشلا اما لانيعلا ددعل