Studies on the pathogenesis of hog cholera. II. Virus distribution in tissue and the morphology of the immune response.

Abstract

Summary The route of virus spread in pigs, following oral exposure with virulent hog cholera virus three hours to seven days previously, was studied. An accumulation method (AM), the cryostat section (CRS) and coverslip cell culture (CCC) fluorescent antibody techniques (FAT) were used. By the AM virus was demonstrated in the tonsil and blood as early as seven and sixteen hours post exposure, respectively. Virus titre in the tonsil was found to remain at a high level from day three up to day seven. It was exceeded by virus contents in the blood and spleen and to a lesser extent by those of the mandibular, retropharyngeal, parotid and mesenteric lymph nodes between days five and seven. The tonsil, being the first target organ for HCV, is the tissue of choice for the early detection of virus by routine CRS and cell culture FA methods. Other tissues recommended for the early demonstration of virus are the pancreas, spleen, lymph nodes, blood and eventually the intestinal mucosa. The routes by which HCV spreads from the tonsil are discussed. Virus excretion in the faeces and urine started to occur at days six and seven respectively. It was concluded that virus discharge was initiated after a sufficiently high level of virus concentration in the gastro-intestinal and urogenital tracts was reached. In contrast to the AM, CR sections and CC cultures were negative on all samples collected at twenty-four hours. Apparently the quantity of inoculum used was of great importance. Positive CR sections substantiated by virus isolations were first observed at 2 × twenty-four hours. Following this period a progressive increase in the number of positive samples found by both FA techniques was recorded. In all instances virus was never isolated from the gall. Zusammenfassung Untersuchungen zur Pathogenese der Schweinepest I. Nachweis von Schweinepestvirus nach oraler Applikation Es wurde der Weg der Virusausbreitung in Schweinen nach oraler Applikation von vollvirulentem Schweinepestvirus von der 3. Stunde an bis zum 7. Tag untersucht. Als Nachweismethoden dienten ein Anreicherungsverfahren (AM) und die fluoreszierende Antikorpertechnik (FAT), angewandt an Kryo-statschnitten (CRS) und Deckglas-Zellkulturen (CCC). Uber das Anreicherungsverfahren wurde Virus in den Tonsillen und im Blut bereits 7 bzw. 16 Stunden nach der Ansteckung nachgewiesen. Der Virustiter in den Tonsillen hielt sich vom 3. bis zum 7. Tag p. inf. auf einem konstanten, hohen Wert. Er wurde nur vom Virusgehalt des Blutes und der Milz und in geringerem Mase von dem in Mandibular-, Retropharyngeal-, Parotis- und Mesenteriallymphknoten zwischen dem 5. und 7. Tag ubertroffen. Die Tonsillen, als erstes Haftungsorgan des Schweinepestvirus, sind das bevorzugte Gewebe fur den fruhen Nachweis des Virus mittels CRS oder CCC FA-Methode. Als beste Gewebe konnen zur Fruhdiagnose Pankreas, Milz, Lymphknoten, Blut und eventuell die Darmschleimhaut empfohlen werden. Die Wege, uber die sich das Virus von den Tonsillen aus ausbreitet, werden diskutiert. Die Virusausscheidung uber Kot und Urin begann am 6. bzw. 7. Tag. Daraus wurde geschlossen, das die Ausscheidung erst dann beginnt, wenn ein genugend hoher Virusgehalt im Gastro-Intestinaltrakt und Urogenitaltrakt erreicht ist. Im Unterschied zur AM verliefen die Nachweise uber CRS- und CCC-Verfahren bei allen bis zur 24. Stunde entnommenen Proben negativ. Offen-sichtlich war die verabreichte Virusdosis sehr entscheidend. Positive Kryostat-schnitte, bestatigt uber die Virusisolierung, wurden erst nach zweimal 24 Stunden gefunden. Dieser Periode folgte eine standige Zunahme positiver Befunde an Proben, die nach beiden FA-Verfahren untersucht wurden. Aus der Galle konnte nie Virus isoliert werden. Resume Recherches sur la pathogenese de la peste porcine I. Mise en evidence du virus de la peste porcine apres application orale On a examine la route de dispersion du virus chez le porc a partir de la 3e heure et jusqu'au 7e jour apres application orale d'un virus virulent de la peste porcine. Les methodes de mise en evidence furent un procede d'enrichissement (AM) et la technique des anticorps fluorescents (FAT) appliquee sur des coupes cryostatiques (CRS) et des cultures cellulaires sur la-melles de verre (CCC). Lors du processus d'enrichissement, on a mis en evidence le virus dans les amygdales et dans le sang deja 7 a 16 heures apres l'infection. La quantite de virus dans les amygdales resta d'une valeur elevee et constante du 3e au 7e jour apres l'infection. Cette quantite fut superieure dans le sang et la rate et dans une moindre mesure dans les ganglions mandilulaires, retropharynges, parotidiens et du mesentere entre le 5e et le 7e jour. Les amygdales se sont revelees etre le tissu de choix pour la detection precoce du virus de la peste porcine avec les methodes CRS, CCC et FAT. Les meilleurs tissus pouvant etre recommandes pour un diagnostic precoce sont le pancreas, la rate, les ganglions, le sang et eventuellement la muqueuse intestinale. On discute les voies de dissemination du virus a partir des amygdales. L'elimination du virus dans les feces et l'urine a commence le 6e et le 7e jour. On en a tire la conclusion que l'elimination ne commence que lorsque la quantite de virus est suffisamment elevee dans le tractus gastrointestinal et uro-genital. A la difference de la methode AM, tous les echantillons pris dans les premieres 24 heures se sont reveles negatifs selon les methodes CRS et CCC. La dose de virus donnee s'est revelee apparemment determinante. Les coupes cryostatiques positives avec FAT, confirmees par l'isolation du virus, ne se rencontraient qu'a partir de 40 heures. Une augmentation fixe des cas positifs a suivi cette periode sur les echantillons examines selon les deux procedes FAT. On n'a jamais isole de virus a partir de la bile. Resumen Estudios sobre la patogenia de la peste porcina I. Identificacion del virus peste porcina tras aplicacion oral Se estudio la via de propagacion de los virus en cerdos tras la aplicacion oral de virus peste porcina totalmente virulento desde la tercer hora hasta el 7° dia. Como metodos de identificacion se utilizaron la tecnica de enrique-cimiento (TE) y la de anticuerpos fluorescentes (TAF), empleandose en cortes criostaticos (CCR) y cultivos celulares sobre portaobjetos (CCP). Por medio de la tecnica de enriquecimiento ya se identifico el virus en las tonsilas y en sangre a las 7 resp. 16 horas despues del contagio. El titulo de virus en las tonsilas se mantuvo desde el tercer hasta el 7° dia p. inf. en un nivel elevado constante. Solo fue rebasado por el contenido en virus de la sangre y bazo y en cantidad reducida por el mismo en los ganglios linfaticos mandibulares, retrofaringeos, parotideos y mesentericos entre el 5° y 7° dia. Las tonsilas son como primer organo de retencion del virus peste porcina el tejido de eleccion para la identificacion precoz del virus mediante CCR o CCP y la TAF. Como tejidos mejores para el diagnostico precoz se recomiendan el pancreas, bazo, ganglios linfaticos, sangre y eventualmente la mucosa intestinal. Se discuten las vias a traves de las cuales se difunde el virus a partir de las tonsilas. La eliminacion de virus con las feces y orina se inicio el 6° resp. 7° dia. De aqui se saca en conclusion que la excrecion comienza cuando se ha alcanzado un contenido en virus suficientemente elevado en los tractos gastrointestinal y urogenital. En contraposicion a la TE discurrieron negativas las identificaciones por medio de CCR y CCP en todas las muestras recogidas hasta las 24 horas. Al parecer, era muy decisiva la dosis de virus administrada. Cortes criostaticos TAF-positivos, confirmados a traves del aislamiento de virus, solo se hallaron tras dos veces 24 horas. A este periodo le siguio un aumento constante de resultados positivos en muestras examinadas con arreglo a ambas tecnicas TAF. A partir de la bilis no se logro aislar nunca virus.