Obtención de inmunoglobulinas de yema de huevo contra Helicobacter pylori producidos en gallinas araucanas

Abstract

espanolHelicobacter pylori es el agente causal de diversas patologias gastroduodenales, con una prevalencia a nivel mundial de 50% y en Chile de 73-76%, haciendo necesario tratamientos mas eficientes para su erradicacion. Este estudio contemplo la inoculacion intramuscular de gallinas araucanas con lisados completos de dos cepas de H. pylori con diferente genotipo de virulencia: cepa ATCC 43504 (cagA+, vacAs1m1, dupA-) y cepa J99 (ATCC 70824) (cagA+, vacAs1m1, dupA+), respectivamente asociadas a desarrollo de cancer gastrico y ulcera duodenal. Se realizo el aislamiento de IgY desde la yema de los huevos recolectados, basado principalmente en ultrafiltracion y precipitacion con sulfato de amonio al 40%. Mediante cromatografia de adsorcion tiofilica (TAC) se purificaron las IgY anti-H. pylori de las cepas J99 y 43504, obteniendo asi las fracciones eluida-pico II y eluida-pico III. El rango de concentracion proteica de estas inmunoglobulinas fue de 0,3 a 5,4 mg/mL. Mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en ambiente reductor (SDS-PAGE) y western blot (WB) se observo una banda de 67 KDa (cadena pesada de IgY) de las inmunoglobulinas de ambas cepas. El titulo de anticuerpos, mediante ELISA indirecto (ELISA-I), para IgY anti-H. pylori de las cepas J99 y 43504 fue mayor a 1/6.400. En la prueba de reaccion cruzada entre los anticuerpos aviares con diversas bacterias hubo diferencias significativas. En los ensayos profilacticos y terapeuticos in vitro utilizando una linea celular de adenocarcinoma gastrico (AGS), la fraccion eluida-pico III de IgY desafiada con H. pylori demostro una alta eficiencia protectora contra ambas cepas de H. pylori. EnglishHelicobacter pylori is responsible for causing various gastroduodenal diseases, with a worldwide prevalence of 50% and a prevalence in Chile of 73-76%. It is necessary to search for more efficient treatment methods for its eradication. In this study, araucana hens were inoculated intramuscularly with H. pylori whole lysates from different H. pylori virulence genotype: strain ATCC 43504 (cagA+, vacAs1m1, dupA-), and strain J99 (ATCC 70824) (cagA+, vacAs1m1, dupA+), associated with the development of gastric cancer and duodenal ulcer, respectively. Egg yolk immunoglobulins (IgY) were isolated, mainly through ultrafiltration and ammonium sulfate precipitation at 40%. IgY against H. pylori, strains J99 and 43504, were purified by thiophilic adsorption chromatography (TAC), obtaining the fractions eluted-peak II and eluted-peak III. The protein concentration for these immunoglobulins ranges between 0.3 and 5.4 mg/mL. The results of polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot (WB) allowed to observe a band of 67 kDa (IgY heavy chain) of immunoglobulins in both strains. By means of indirect immunosorbent assay (I-ELISA), IgY titers against H. pylori strains J99 and 43504 were greater than 1/6,400. In cross-reactivity tests among antibodies from several bacteria, there were significant differences. In the prophylactic and therapeutic in vitro assays using a gastric adenocarcinoma cell line (AGS), the fraction of the eluted-peak III of IgY challenged with H. pylori demonstrated a high protective efficiency against both strains of H. pylori.