Identificación de nuevos péptidos de una biblioteca de despliegue en fagos con un anticuerpo monoclonal específico a la proteína N del virus PRRS

Abstract

El objetivo del estudio fue seleccionar de una biblioteca combinatoria de fagos filamentosos clonas que mimeticen la proteina N del virus del Sindrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (PRRS) utilizando un anticuerpo monoclonal (SDOW17). Se utilizo una biblioteca combinatoria de fagos filamentosos (M13) que expone aleatoriamente peptidos de 7 aminoacidos en la region N-terminal fusionado con la proteina III. Para determinar el efecto del enriquecimiento despues de cada ronda de seleccion, los fagos eluidos fueron titulados; estos se incrementaron de 4,8 x 103 unidades formadoras de colonias (ufc) en la primera ronda a 3,2 x 105 ufc en la tercera. Despues de tres rondas de seleccion, 32 clonas fueron picadas al azar, cada clona individual fue amplificada, purificada y titulada. La reactividad de la union de las clonas a los anticuerpos anti-PRRS fue determinado utilizando un ELISA de fagos. El alineamiento de las clonas secuenciadas con la obtenida del GenBank, ubican a estas en la region aminoterminal y porcion media de la proteina N del vPRRS. La secuencia consenso de las 32 clonas seleccionadas fue NYRYQ. Las secuencias de los mimotopos fueron utilizadas para calcular los epitopos de la proteina N, mediante la herramienta bioinformatica del servidor Peptiope con el algoritmo PepSurf. Dos epitopos conformacionales contra el anticuerpo monoclonal antiproteina N fueron identificados, localizados en diferentes posiciones y presentados principalmente como helices a. Los mimotopos seleccionados y epitopos conformacionales podrian ser considerados informativos para el diagnostico de la enfermedad