Condiciones para el análisis electrofóretico de proteínas apoplásticas de tallos y raíces de clavel (Dianthus caryophyllus L) para estudios proteómicos

Abstract

En el presente estudio se describe un flujo de trabajo que puede ser aplicado a diferentes especies vegetales, con el fin de obtener extractos apoplasticos que puedan ser usados para analisis proteomicos. Para ello, usando tallos y raices de clavel, se evaluaron parametros claves para la extraccion de estas proteinas. Se determino que para esta especie (Dianthus caryophyllus L) se debe usar la solucion amortiguadora fosfato de sodio 0,1 M pH 6,5, cloruro de sodio 50 mM y 0,1% β-mercaptoetanol para la infiltracion; con tres tiempos de vacio de 20 s a 70 kPa y centrifugacion a 1000 x g durante 20 min a 4 oC, seguido de precipitacion y concentracion de proteinas con el metodo (TCA-Acido tricloroacetico)/acetona. Bajo estas condiciones, se obtienen extractos que permiten analisis electroforeticos en 2D de proteinas de apoplasto, usando para el isolectroenfoque tiras con gradientes de pH 5-8 para raiz y pH 3-10 para tallo. Las condiciones descritas permitiran profundizar sobre el papel de las proteinas apoplasticas en diversidad de fenomenos biologicos que involucren esta especie vegetal.