基于抗体的小鼠肾脏淋巴结构成像。

背景：由于很难将淋巴系统与血管系统区分开来，淋巴系统在历史上一直没有得到充分的研究。在急性肾损伤（AKI）中，淋巴系统经历一个称为淋巴管生成的扩张过程。目前的主流治疗方法不能充分治疗AKI的临床后果。了解肾内皮结构和改变其功能特性可以作为一种有希望的治疗策略来改善多种病因的AKI。目前淋巴调节疗法的一个障碍是我们无法全面检查肾淋巴的结构和功能完整性。目前检测淋巴管的方法包括传统的切片和淋巴标记物的免疫标记。由于肾淋巴的稀疏性，在使用传统的切片和免疫标记时，观察到的血管密度可能存在显著的差异。方法：在这里，我们描述了一种适用于iDISCO组织清理管道的方法，用于在器官水平上可视化完整的淋巴结构，提供肾脏淋巴系统的全面分析。更具体地说，我们描述了一个详细的方案，概述了肾组织制备的关键步骤，用两种典型淋巴标记物（VEGFR-3和LYVE-1）进行免疫标记，光学清除，成像，量化重要的淋巴特征，如血管直径，分支点，总体积，总长度和平均段长度，以评估受损肾脏淋巴管生成的程度。我们使用Imaris软件程序来分析3D肾脏图像并量化其淋巴特征。结果：我们优化了一种基于抗体的共聚焦显微镜观察肾脏淋巴管的方法，为研究肾脏淋巴管提供了一种新的方法。定量淋巴特征显示，损伤肾脏的分支点数量、总体积和细丝长度增加，提示缺血肾损伤导致淋巴管生成。结论：我们已经优化了一种基于抗体的方法，用于成像历史上难以可视化的成年小鼠肾淋巴，并开发了一种用户友好的方法来量化定义淋巴管生成的关键淋巴特征。