Development and validation of a novel reverse-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method for the quantification of related substances of vasopressin injection: A characterization and comparative analysis of vasopressin formulation samples against vasostrict (RLD) in various diluents

Abstract

In the present study, we developed and validated a sensitive, accurate, robust and simple RP-HPLC method for quantification of related substances of vasopressin (VPS) injection. The development phase prioritized the optimization of wavelength, mobile phase composition and column selection to enhance separation and sensitivity for the analytical evaluation of VPS injection. By considering peak symmetry, resolution and retention time, chromatographic conditions of VPS injection were established. The YMC PACK ODS AM (100 × 4.6) mm, 3 μm was employed in the study. Mobile phase A was prepared with 0.113 M NaH₂PO₄.H₂O (pH 3.0) while mobile phase B was a 50:50 (v/v) ratio of acetonitrile and water, pumped through a flow rate of 1.0 mL/min. VPS injection was exposed to thermal, photolytic, acid, base and peroxide degradation conditions and these were analysed by the current method. The method was validated following the guidelines set by the International Council for Harmonization guideline (ICH). The linearity studies demonstrating that a correlation coefficient value is more than 0.999 for VPS and its related substances. The detection and quantification limits for all related substances were found to be 0.01% and 0.05%, respectively. All the impurities exhibited consistent recoveries ranging from 85 to 105%. The unknown impurities were eluting at RRT 1.23 and RRT 1.25 in the RS methodology (HPLC-UV) of VPS injection are identified and assessed the impurity levels. Furthermore, aggregate profiles and secondary structure analysis studies were carried out using FTIR and LC-HRMS, comparing the VPS formulation samples with the reference listed drug (RLD) (Vasostrict) samples across various diluents.

Dans la présente étude, nous avons développé et validé une méthode RP-HPLC sensible, précise, robuste et simple pour la quantification des substances apparentées à l’injection de vasopressine (VPS). La phase de développement a donné la priorité à l’optimisation de la longueur d’onde, de la composition de la phase mobile et de la sélection de la colonne pour améliorer la séparation et la sensibilité pour l’évaluation analytique de l’injection de VPS. En prenant en compte la symétrie des pics, la résolution et le temps de rétention, les conditions chromatographiques de l’injection de VPS ont été établies. Le YMC PACK ODS AM (100 × 4,6) mm, 3 μm a été utilisé dans l’étude. La phase mobile A a été préparée avec 0,113 M NaH2PO4.H2O (pH 3,0) tandis que la phase mobile B était un rapport 50:50 (v/v) d’acétonitrile et d’eau, pompé à un débit de 1,0 ml/min. L’injection de VPS a été exposée à des conditions de dégradation thermique, photolytique, acide, basique et peroxyde et celles-ci ont été analysées par la méthode actuelle. La méthode a été validée conformément aux directives établies par le Conseil international d’harmonisation (ICH). Les études de linéarité démontrent qu’une valeur de coefficient de corrélation est supérieure à 0,999 pour le VPS et ses substances apparentées. Les limites de détection et de quantification pour toutes les substances apparentées se sont avérées être respectivement de 0,01 % et 0,05 %. Toutes les impuretés ont montré des récupérations constantes allant de 85 à 105 %. Les impuretés inconnues éluées à RRT 1,23 et RRT 1,25 dans la méthodologie RS (HPLC-UV) de l’injection de VPS sont identifiées et les niveaux d’impuretés ont été évalués. De plus, des profils agrégés et des études d’analyse de structure secondaire ont été réalisés à l’aide de FTIR et de LC-HRMS, en comparant les échantillons de formulation de VPS avec les échantillons de médicament de référence (RLD) (Vasostrict) à travers divers diluants.