通过纳米孔加载、重读和读取蛋白质序列的策略

在分子水平上了解蛋白质组的多样性对生物学和医学的进步至关重要，但对蛋白质的全长、原生形式进行测序仍然具有挑战性。Motone 等人在《自然》杂志上发表的一项研究介绍了一种纳米孔测序方法，这种方法可以读取单个全长蛋白质分子，从而检测单个氨基酸替换和翻译后修饰（PTM）。首先，通过电泳力将蛋白质装入由细菌脂蛋白 CsgC 形成的纳米孔中，带负电荷的尾部结构域和 "阻塞 "序列的添加为这一过程提供了便利。然后，ClpX展开酶以反式到顺式的方向将其稳定地拉回。作者利用合成蛋白质表明，他们的方法可以检测单个氨基酸的置换，并能绘制激酶的活性图，识别特定位点的 PTM，如磷酸化。