Informativnost' sensorov aktivacii signal'nyh putej NF-κB i AP-1 pri ocenke dermatotoksicheskih effektov in vitro

Abstract

Dlya sertifikacii novyh farmacevticheskih, himicheskih ili kosmeticheskih produktov neobhodimo testirovanie na toksichnost', v tom chisle dermatotoksichnost'. Modeli in vitro issledovanij schitayut naibolee perspektivnymi, i ryad takih testov vnedren v praktiku sertifikacionnyh ispytanij. Novye vozmozhnosti dlya registracii rannego otveta kletok na povrezhdenie mogut predostavit' kletochnye sensory, osnovannye na vizual'noj kolichestvennoj registracii izmenenij aktivnosti signal'nyh putej, zadejstvovannyh v realizacii takogo otveta. NF-κB i AP-1 — dva vazhnyh faktora transkripcii belkov, aktivnost' kotoryh vozrastaet v kletke pri povrezhdenii, vospalenii i izmenenii redoks-balansa. Cel'yu issledovaniya bylo razrabotat' kletochnye sensory na osnove immortalizovannyh keratinocitov cheloveka linii HaCaT, kotorye ekspressiruyut zelenyj fluorescentnyj belok (GFP) pri aktivacii signal'nyh putej NF-κB (HaCaT/NF-κB) ili AP-1 (HaCaT/AP-1), i izuchit' ih informativnost' pri registracii dozozavisimogo otveta na vozdejstvie induktorov sootvetstvuyushchih signal'nyh putej. Rezul'taty pokazali, chto uroven' fluorescencii kletok HaCaT/NF-κB dozozavisimo izmenyalsya v 6,05 ± 0,51 i 5,53 ± 0,52 raz pri vozdejstvii TNFα ili LPS (v koncentraciyah ot 0 do 80 ng/ml). Biosensor HaCaT/AP-1 takzhe reagiroval na vozdejstvie Cd (NO3)2 (v koncentraciyah ot 0 do 40 mkM) i ul'trafioletovogo izlucheniya tipa A (UF-A) (ot 0 do 40 Dzh/sm2), odnako pozvolyal registrirovat' ego kachestvenno, no ne kolichestvenno. Fluorescenciya kletok sensora vozrastala v 1,51 ± 0,24 i 1,66 ± 0,43 raz sootvetstvenno. Razrabotannye kletochnye sensory mogut byt' ispol'zovany dlya ocenki citotoksicheskogo dejstviya testiruemyh veshchestv na kletki kozhi cheloveka in vitro i izucheniya mekhanizmov citotoksichnosti.