Validation of a new quantitative PCR (qPCR) approach: a screening tool for hepatitis B in pregnant women at high risk of transmitting hepatitis B virus to newborns in Mali.

Abstract

Introduction : Au niveau mondial, l'infection par le virus de l'hépatite B (VHB) chez les personnes à risque est un problème majeur de santé publique. La transmission mère-enfant (TME) est importante en Afrique puisque sur 70% des cas d'hépatite B soit 4,5 millions d'enfants infectés ont moins de cinq ans, probablement en raison d'une transmission verticale pendant la grossesse, l'accouchement ou l'allaitement. La prise en charge de l’infection par VHB est une préoccupation majeure, notamment la disponibilité de la charge virale à coût abordable dans un pays a ressources limitées comme le Mali. Cette étude visait à développer et à valider une méthode de détection et de quantification de l'ADN du VHB par la qPCR chez les femmes enceintes, une population à risque de transmettre le virus aux nouveaux nés.  Méthodologie : Nous avons recruté 74 femmes enceintes avec un AgHBs positif au Centre de santé de référence de la commune III (CSRéf CIII) de Bamako, Mali dans cette étude. Leur charge virale a été préalablement déterminée par une technique de référence dans un laboratoire local. Nous avons conçu des sondes et des amorces spécifiques pour le gène PreC du VHB, en vue de sa détection et sa quantification par qPCR. Nous avons adapté cette nouvelle PCR en temps réel sur différentes machines pour la quantification de l’ADN du VHB.Résultats : Neuf sur neuf (9/9) échantillons avec une charge virale (CV) entre 10000-100000 Unités Internationales/millilitre (UI/mL) et 4/4 avec une CV > 100 000UI/mL été détectés et quantifiés. Parmi les cinquante-cinq (55) échantillons avec un CV de 12-10000 UI/mL, 38/55 échantillons avec une CV > à 1000UI/mL ont été détectés et 17/55 échantillons entre 12-1000 n'ont pas été détectés.  6/6 échantillons négatifs n'ont pas été détectés par notre nouvelle qPCR. Conclusion : Ce nouveau protocole qPCR a démontré une détection et une identification efficaces des cas d'échantillons à CV élevées à plus de 1000 UI/mL chez les femmes enceintes. Il pourrait être étendu à d'autres populations à haut risque telles que les personnes immunodéprimées.