Copro-PCR do gene B1 para diagnóstico de Toxoplasma gondii em fezes de gatos domésticos

Isa Marianny Ferreira Nascimento Barbosa de Souza, Samuel Felipe Netzlaff, Amanda Cristina Corrêa Fleury, Victor da Silva Siqueira, Gabriela Katrinny Avelar Oliveira, T. S. Reis, Stéfanne Rodrigues Rezende, Vanessa Bridi, L. Cardoso, Hanstter Hallison Alves Rezende
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Abstract

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório que possui um ciclo de vida heteroxênico, tendo como hospedeiro definitivo os felinos, fato que culmina na manutenção do ciclo de vida parasitário. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de Toxoplasma gondii em fezes de gatos por meio da Copro-PCR, bem como avaliar a frequência de positividade entre gatos errantes e domiciliados, machos e fêmeas e castrados e não castrados. Para tal, foram coletadas 120 amostras fecais de gatos que, posteriormente, foram submetidas à sedimentação espontânea. Após 24 horas extraiu-se o DNA das amostras com um kit comercial, com adaptações. Após a extração, realizou-se a PCR com os primers que amplificam o gene B1, seguida da eletroforese em gel de poliacrilamida a 6%. Foi possível obter uma prevalência para T. gondii de 14,1% (17/120) na Copro-PCR ao passo que o Exame Parasitológico de Fezes não detectou nenhuma amostra positiva.  Além disso, os gatos errantes obtiveram maior frequência de positividade quando comparado aos domiciliados. Não houve diferença significativa em relação ao sexo e aos animais castrados ou não castrados. Foi possível concluir que a copro-PCR do Gene B1 utilizada na detecção de T. gondii possui uma alta sensibilidade, detectando até mesmo amostras negativas no Exame Parasitológico de Fezes e que os gatos errantes possuem maior probabilidade de se infectarem com T. gondii do que os domiciliados.
诊断家猫粪便中刚地弓形虫 B1 基因的 Copro-PCR 技术
弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种细胞内寄生虫,具有异氧生命周期,猫科动物是其最终宿主,这一事实最终导致了寄生虫生命周期的维持。本研究的目的是利用 Copro-PCR 技术确定猫粪便中刚地弓形虫的流行率,并评估流浪猫和家猫、公猫和母猫、绝育猫和未绝育猫的阳性率。为此,我们收集了 120 份猫的粪便样本,然后进行自发沉淀。24 小时后,使用商业试剂盒从样本中提取 DNA。提取后,使用扩增 B1 基因的引物进行 PCR,然后在 6% 聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。在 Copro-PCR 检测中,淋病双球菌的感染率为 14.1%(17/120),而粪便寄生虫检测则未发现任何阳性样本。 此外,流浪猫的阳性率高于家猫。性别、绝育或未绝育动物之间没有明显差异。由此可以得出结论,用于检测淋病双球菌的B1基因共PCR具有很高的灵敏度,甚至可以检测出粪便寄生虫检查中的阴性样本,而且流浪猫比家养猫更容易感染淋病双球菌。
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