Partenogenetik Aktivasyonun Vitrifiye Köpek Oositleri Üzerine Etkisi

4区农林科学 Q4 Veterinary

International Journal of Applied Research in Veterinary Medicine Pub Date : 2023-10-10 DOI:10.30782/jrvm.1326864

Rabia Gözde ÖZALP, Burcu ÜSTÜNER, Özge BARİ, Ahmet AKTAR, Ahmet YAVUZ, Hakan SAĞIRKAYA

{"title":"Partenogenetik Aktivasyonun Vitrifiye Köpek Oositleri Üzerine Etkisi","authors":"Rabia Gözde ÖZALP, Burcu ÜSTÜNER, Özge BARİ, Ahmet AKTAR, Ahmet YAVUZ, Hakan SAĞIRKAYA","doi":"10.30782/jrvm.1326864","DOIUrl":null,"url":null,"abstract":"Pet hayvanlarında biyoteknolojik çalışmalar son yıllarda hız kazanmaya başlamıştır. Köpeklerde başarısız yardımcı üreme teknikleriyle ilgili oluşan sorular, muhtemelen köpek türlerinin reproduktif fizyolojisine ait yetersiz bilgiden kaynaklanmaktadır. Fakat diğer taraftan pet biyolojisindeki uygulamalar, insan hastalıkları için model oluşturmaktadır. Bunun ötesinde gamet kriyopreservasyonunun gelişmesi, nesli tükenmekte olan türlerin korunması ve genetik banka oluşturulması için önemlidir. Bu çalışmada, köpek oositlerindeki düşük maturasyon oranlarına rağmen, partenogenetik aktivasyonun etkileri vitrifiye oositlerde test edildi. Köpek oositleri, Yıldırım Belediyesi Sokak Hayvanları Bakım ve Rehabilitasyon merkezinden alınan, 20 adet sağlıklı köpekten toplandı. Ovaryumların tekrarlı parçalanmasından sonra, seçilen COCs (kumulus oosit kompleksleri), 5% CO2 inkübatörde, mineral yağla kaplanmış 500 µl TCM-199 içeren dört-gözlü petrilerde, 39°C’de, 72 saat boyunca maturasyona bırakıldı. Maturasyondan sonra oositler, 0%, 10%, 20% etilen glikol içeren 50 ml PBl içinde sırasıyla, 10, 10 dakika ve 30 saniye muamele edildi. Oositler, 30 µl VS3 içeren kriyoviallere yerleştirilerek sıvı nitrojende donduruldu. Bu grubun oositleri (n=257) ‘vitrifiye oosit-VO’ olarak gruplandı. Çözdürme sonrasında, oositler ionomisinle 5 dakika ve sikloheksimid ile 3 saat muamele ederek partenogenetik aktivasyona bırakıldı. Sonrasında oositler 72 saat kültüre edilerek nükleer maturasyon değerlendirildi. Kontrol grubu olarak kullanılan oositler (n=257), ‘non vitrifiye oosit-FO’ olarak gruplandırıldı. Maturasyondan sonra, oositler direkt olarak ionomisin ve sikloheksimid ile muamele edilerek aktivasyona bırakıldı ve 72 saat kültüre edildi. Tüm oositler Hoechst33342 ile 30 dakika boyandıktan sonra nükleer maturasyon oranları mikroskopta değerlendirildi. Maturasyon oranları (MI+MII) gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bulunmadı. (p&gt;0,05). Gruplar arasında GV, GVBD, MI, ve MII oranlarında da istatistiksel fark bulunmadı (p&gt;0,05). Maturasyon sonrasında, vitrifiye köpek oositlerinde partenogenetik aktivasyona bağlı nükleer değerlendirmeye çalışması bulunmamaktadır. Fakat bu uygulamada elde edilen düşük maturasyon oranlarının, ileri moleküler çalışmalarla açıklanması gerektiği kanısındayız.","PeriodicalId":13839,"journal":{"name":"International Journal of Applied Research in Veterinary Medicine","volume":"130 1","pages":"0"},"PeriodicalIF":0.0000,"publicationDate":"2023-10-10","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":"0","resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":null,"PeriodicalName":"International Journal of Applied Research in Veterinary Medicine","FirstCategoryId":"1085","ListUrlMain":"https://doi.org/10.30782/jrvm.1326864","RegionNum":4,"RegionCategory":"农林科学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":null,"EPubDate":"","PubModel":"","JCR":"Q4","JCRName":"Veterinary","Score":null,"Total":0}

引用次数: 0

Abstract

Pet hayvanlarında biyoteknolojik çalışmalar son yıllarda hız kazanmaya başlamıştır. Köpeklerde başarısız yardımcı üreme teknikleriyle ilgili oluşan sorular, muhtemelen köpek türlerinin reproduktif fizyolojisine ait yetersiz bilgiden kaynaklanmaktadır. Fakat diğer taraftan pet biyolojisindeki uygulamalar, insan hastalıkları için model oluşturmaktadır. Bunun ötesinde gamet kriyopreservasyonunun gelişmesi, nesli tükenmekte olan türlerin korunması ve genetik banka oluşturulması için önemlidir. Bu çalışmada, köpek oositlerindeki düşük maturasyon oranlarına rağmen, partenogenetik aktivasyonun etkileri vitrifiye oositlerde test edildi. Köpek oositleri, Yıldırım Belediyesi Sokak Hayvanları Bakım ve Rehabilitasyon merkezinden alınan, 20 adet sağlıklı köpekten toplandı. Ovaryumların tekrarlı parçalanmasından sonra, seçilen COCs (kumulus oosit kompleksleri), 5% CO2 inkübatörde, mineral yağla kaplanmış 500 µl TCM-199 içeren dört-gözlü petrilerde, 39°C’de, 72 saat boyunca maturasyona bırakıldı. Maturasyondan sonra oositler, 0%, 10%, 20% etilen glikol içeren 50 ml PBl içinde sırasıyla, 10, 10 dakika ve 30 saniye muamele edildi. Oositler, 30 µl VS3 içeren kriyoviallere yerleştirilerek sıvı nitrojende donduruldu. Bu grubun oositleri (n=257) ‘vitrifiye oosit-VO’ olarak gruplandı. Çözdürme sonrasında, oositler ionomisinle 5 dakika ve sikloheksimid ile 3 saat muamele ederek partenogenetik aktivasyona bırakıldı. Sonrasında oositler 72 saat kültüre edilerek nükleer maturasyon değerlendirildi. Kontrol grubu olarak kullanılan oositler (n=257), ‘non vitrifiye oosit-FO’ olarak gruplandırıldı. Maturasyondan sonra, oositler direkt olarak ionomisin ve sikloheksimid ile muamele edilerek aktivasyona bırakıldı ve 72 saat kültüre edildi. Tüm oositler Hoechst33342 ile 30 dakika boyandıktan sonra nükleer maturasyon oranları mikroskopta değerlendirildi. Maturasyon oranları (MI+MII) gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bulunmadı. (p>0,05). Gruplar arasında GV, GVBD, MI, ve MII oranlarında da istatistiksel fark bulunmadı (p>0,05). Maturasyon sonrasında, vitrifiye köpek oositlerinde partenogenetik aktivasyona bağlı nükleer değerlendirmeye çalışması bulunmamaktadır. Fakat bu uygulamada elde edilen düşük maturasyon oranlarının, ileri moleküler çalışmalarla açıklanması gerektiği kanısındayız.

查看原文本刊更多论文

孤雌生殖激活对玻璃化犬卵母细胞的影响

近年来，对宠物动物进行生物技术研究的势头越来越猛。对狗的辅助生殖技术不成功的质疑可能是由于对犬科动物的生殖生理知识了解不够。另一方面，犬类生物学应用可作为人类疾病的模型。此外，配子冷冻保存技术的发展对于保护濒危物种和建立基因库也非常重要。在本研究中，尽管犬卵母细胞的成熟率较低，但仍对玻璃化卵母细胞的孤雌生殖激活效果进行了测试。从耶尔德勒姆市街道动物护理和康复中心的 20 只健康狗身上收集了犬卵母细胞。在反复裂解卵巢后，将挑选出的 COC（库母卵母细胞复合体）置于 39°C 的 5%二氧化碳培养箱中 72 小时，在装有 500 µl 涂有矿物油的 TCM-199 的四孔培养皿中进行成熟。成熟后，将卵母细胞分别在 50 毫升含 0%、10%、20% 乙二醇的 PBl 中处理 10、10 分钟和 30 秒。将卵母细胞放入装有 30 µl VS3 的冷冻瓶中，在液氮中冷冻。这组卵母细胞（n=257）被归类为 "玻璃化卵母细胞-VO"。解冻后，用离子霉素处理卵母细胞 5 分钟，并用环己亚胺处理卵母细胞 3 小时，以激活孤雌生殖。然后，将卵母细胞培养 72 小时并评估核成熟度。作为对照组的卵母细胞（n=257）被归为 "非玻璃化卵母细胞-FO "组。卵母细胞成熟后，直接用离子霉素和环己亚胺处理，激活并培养 72 小时。用 Hoechst33342 对所有卵母细胞染色 30 分钟后，在显微镜下评估核成熟率。各组之间的成熟率（MI+MII）无统计学意义（p>0,05）。各组之间的 GV、GVBD、MI 和 MII 比率也没有统计学差异（p>0,05）。目前还没有关于成熟后的玻璃化犬卵母细胞因孤雌生殖活化而导致的核评价的研究。不过，我们认为，本应用中获得的低成熟率应通过进一步的分子研究来解释。

本文章由计算机程序翻译，如有差异，请以英文原文为准。

求助全文

约1分钟内获得全文求助全文

来源期刊

International Journal of Applied Research in Veterinary Medicine 农林科学-兽医学

自引率

0.00%

发文量

审稿时长

3 months

期刊介绍： The International Journal of Applied Research in Veterinary Medicine promotes excellence in the clinical practice of veterinary medicine by disseminating fundamental scientific, diagnostic, and treatment knowledge gained from prospective and retrospective research in a timely manner. The Journal fulfills its mission through rapid peer review of each submitted article, and publication of all articles within 90 days of acceptance. All published articles meet the standards of Balance, Independence, Objectivity and Scientific Rigor.