Flore microbienne de quatre eaux minérales non gazéifiées et mises en bouteilles I. Dénombrement de colonies, composition grossière de la flore, et caractères du groupe des bactéries gram négatif pigmentées en jaune

Abstract

Four French bottled mineral waters (A, B, C and D) were quantitatively and qualitatively microbiologically investigated, i. e. 3 bottles of each charge 1 and 3 weeks after bottling.

The maximum number of colony-forming units was obtained with the surface colony count method and incubation for 21 days at + 20°C, not with the pour plate method officially prescribed in different countries. Plate count agar diluted 10 fold and «Collins» agar produced higher colony counts than did non-diluted plate count agar. The highest colony counts were observed 1 week after bottling, varying from 36,000 to 260,000 CFU per ml. 3 weeks after bottling these figures were 60 to 75 % lower, varying from 18,000 to 85,000 counts per ml.

1,200 statistically representative colonies were isolated on each of 3 different culture media for the rough differentiation of the bacterial flora and its distribution characteristics in the four waters. Five different groups could then be distinguished: 1) Pseudomonas (20 to 50% of the flora), 2) the group of «Acinetobacter-Alcaligenes-Moraxella» (15 to 45%), 3) the group of gram-negative, yellow pigmented bacteria (6 to 44%), 4) gram-negative and gram-variable cocci and 5) a group of bacteria not having been able to be cultivated upon the first isolation (both 5 to 10%).

A detailed differentiation of the group of gram-negative, yellow pigmented bacteria was made using 35 biochemical and physiological tests. The very heterogenic group of 248 strains could be subdivided into 4 groups according to two main characteristics: oxidase reaction and mobility. The first group (I), comprising 42 oxidase-positive strains being either immobile (sub-group I A) or mobile only by gliding (sub-group I B), showed characteristics similar to those of Cytophaga-Flexibacter. Group II, comprising 52 oxidase-positive immobile strains, corresponded to the description of F. capsulatum. Group III, formed of 35 strains and divided into 2 sub-groups on the basis of the ability to grow at + 37°C or not, was composed of oxidase-positive and mobile strains. Group IV, more heterogenic and containing 129 oxidase-positive and mobile strains, was divided into 4 sub-groups. With the exception of group I, the GC-content of all strains were within the range of 60 to 67 mol%. None of the strains grew at + 42°C, the majority of them being very slow to slow to grow at + 20°C.

Des analyses microbiologiques quantitatives et qualitatives on été effectuées avec les eaux minérales mises en bouteilles de quatres sources françaises (A. B, C et D), à raison de 3 bouteilles d’une même charge par source. Les eaux ont été analysées exactement 1 semaine, puis 3 semaines après leur mise en bouteille.

Des dénombrements maximaux de colonies ont été obtenus sur des milieux ensemencés en surface et incubés pendant 21 jours à + 20°C, et non sur des milieux ensemencés en profondeur légalement recommandés par les différents pays. Plate count agar dilué 10 fois et «Collins« agar ont révélé des nombres de colonies supérieurs que Plate count agar non dilué. Les nombres de colonies les plus élevés ont été obtenus 1 semaine après la mise en bouteilles et varient de 36000 à 260000 colonies par ml; ces nombres sont inférieurs de 60 à 75% après trois semaines, allant selon les eaux de 18 000 à 85 000 colonies par ml.

A partir de trois milieux de culture, un nombre important de colonies (1200) statistiquement représentatives ont été isolées afin d’effectuer en premier lieu une caractérisation grossière de la flore bactérienne et sa répartition en pourcentage dans les quatre eaux. A l’aide de quelques tests-clefs ont pu être formés cinq groupes dont la représentation varie en fonction de l’eau. Les Pseudomonas (20 à 50% de la flore), puis le groupe «Acinetobacter-Alcaligenes-Moraxella« (15 à 45%), le groupe des bactéries Gram négatif pigmentées en jaune (6 à 44%>), les coques à Gram positif et Gram variable (5 à 10%), le dernier groupe étant formé par les bactéries plus cultivables par la suite.

Une differentiation fine du groupe des bactéries Gram négatif pigmentées en jaune a ensuite été réalisée à l’aide de 35 tests et caractères biochimiques et physiologiques. L’ensemble, très hétérogène (de 248 souches) a pu être subdivisé en 4 groupes à l’aide de deux caractères, la réaction oxidase et la mobilité. Le groupe I, réunissant 32 souches oxidase + et soit immobiles (sous-groupe I A), soit mobiles uniquement par glissement (sous-groupe I B) se rapproche des caractéristiques de Cytophaga-Flexibacter. Le groupe II, formé de 52 souches oxidase- et immobiles, répond à la description de F. capsulatum. Le groupe III, formé de 35 souches et divisé en deux sous-groupes en fonction de la faculté de croître à + 37°C, réunit les souches oxidase- et mobiles. Le groupe IV, plus hétérogène et rassemblant les souches oxidase- et mobiles (129 souches), est divisé en quatre sous-groupes en fonction de la ciliature, polaire ou péritriche, de la réaction catalase et de la microaérophilie propre à quelques souches. Une importance particulière est attribuée dans cette classification aux caractères physiologiques de la croissance, très typiques de ce groupe de bactéries à croissance lente. Aucune souche rencontrée ne croît à + 42°C, la majorité d’entre elles ont une croissance très lente à lente à + 20°C.