Investigation of the In Vitro Effect of Leptin on Wound Healing through Growth Factors

Abstract

Yara iyileşmesi; epitelyal, endotelyal, mezenkimal ve inflamatuvar hücrelerin biraraya gelip, normal işlevlerini belirli bir sıra ve düzen içerisinde yerine getirmeleriyle karakterizedir. Leptin, ağırlıklı olarak yağ dokusundan salgılanan ve yara iyileşme süresini kısalttığı bilinen sitokin benzeri bir hormondur. Bu çalışmada; fibroblast hücrelerinde yara iyileşmesi modeli oluşturarak leptinin doza (100 ng/mL, 200 ng/mL, 400 ng/mL ve 800 ng/mL) ve süreye (24 ve 48 saat) bağımlı etkileri in vitro yöntemlerle incelenmesi amaçlanmıştır. Yara modeli oluşturulan hücreler üzerine artan dozlarda leptin uygulaması yapıldıktan 24 ve 48 saat sonra yara alanlarının kapanma oranları hesaplandı. Hücre canlılığını belirlemek amacı ile WST-1 analizi yapıldı. Crystal Violet boyaması ile fibroblast hücreleri morfolojik olarak incelendi ve FGFR2, KGF (FGF7), TGF-α, TGF-β1 ve Ki67 ekspresyonlarını belirlemek için de immunositokimya (ICC) analizi yapılarak H-Skor değerleri hesaplandı. In vitro yara modeli analizinde fibroblast hücrelerinin en yüksek yüzde kapanma oranı ve WST-1 analizi ile en yüksek proliferasyon yüzdesi 48 saat 800 ng/mL leptin uygulanan grupta tespit edildi. ICC sonucunda elde edilen H-Skor değerleri ise değerlendirilen proteinlerin ekspresyonlarının fibroblast hücrelerinde leptin dozuna ve zaman bağlı olarak arttığını gösterdi. Çalışma sonucunda fibroblast hücrelerinde leptinin in vitro yara iyileşmesini sağlayan en etkili dozunun 800 ng/mL olduğu belirlenmiştir. Ayrıca FGFR2, KGF (FGF7), TGF-α, TGF-β1 ve Ki67 ekspresyonlarının leptin dozuna ve uygulama süresine bağlı olarak hücrelerde arttığı ve en yüksek artışın en yüksek dozda ortaya çıktığı gösterilmiştir. Bu çalışmanın sonuçlarının, yapılacak olan in vivo yara modeli araştırmalarında leptin kullanımına yol göstereceği düşünülmektedir.