Mise en place d’une méthode semi-quantitative en toxicologie clinique par UHPLC-PDA en utilisant une extraction SPE en micro-élution

Abstract

Objectifs : Une methode semi-quantitative en toxicologie clinique a ete developpee utilisant une extraction par micro-elution en phase solide suivie d’une analyse par un systeme de chromatographie liquide ultra-haute performance couplee a une spectrometrie UV-visible a barrettes de diodes (PDA) (UHPLC-PDA). Cette etude a ete realisee sur 122 molecules medicamenteuses en respectant les recommandations de la norme NF EN ISO 15189. Methodes : Parmi differentes cartouches SPE (Solid-Phase Extraction ) testees, la cartouche Strata®-X a ete selectionnee pour ses meilleurs rendements d’extraction. Un protocole d’extraction manuelle a partir de plasma sanguin a ete mis en place pour 3 concentrations (0,1 mg/L, 1 mg/L et 10 mg/L) avec le methanol comme solvant d’elution. La separation sur UHPLC a ete realisee avec un gradient de phase mobile acetate d’ammonium 5 mM/acetonitrile (ACN) (85/15; V/V) a pH 3,8 ± 0,05 et d’ACN sur une colonne BEH C18 1,7 μ m, 2,1 mm × 150 mm avec un debit de 0,45 mL/min. Les analytes ont ete detectes par PDA (190–400 nm). Resultats : Les rendements d’extraction etaient satisfaisants de meme que la precision (CV% repetabilite 15 % pour certaines molecules) mais diminuaient lorsqu’ils etaient rapportes aux 2 etalons internes (flurazepam et prazepam). La semi-quantification s’est faite a l’aide de 2 facteurs de reponses et les LOD et LOQ ont ete comparees aux valeurs therapeutiques ou toxiques. Conclusion : La methode decrite est simple et rapide. Les resultats ont montre la capacite de la cartouche Strata®-X a extraire des molecules appartenant a plusieurs classes pharmacologiques avec des proprietes physico-chimiques differentes.